Name: Criação de modelo Rat reversível colestática (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-21T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 39 s
Description: Aprenda a criar um modelo colestático reversível em ratos para estudos de fisiologia biliar e cirurgia hepática. Este método utiliza microcirurgia com tubo de poliéster e anestesia com isoflurano.

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1. Anatomia biliar de ratos O diâmetro do duto biliar e comprimento médio foi de 1 mm e 29 mm, respectivamente. A distância média entre o piloro e da papila duodenal foi de 28 mm. Há dois ductos pancreáticos principal, que se abrem para o ducto biliar - o duto anterior abre no lado esquerdo eo ducto posterior abre no lado direito. Além desses dutos principais, uma série de dutos menores que drenam as três porções do pâncreas aberto diretamente para o ducto biliar 6. 2. Técnica Todos os experimentos com animais foram realizados de acordo com os Institutos Nacionais de Saúde diretrizes para a pesquisa ética e foram aprovados pelo Comitê de Pesquisa da Instituição e do Comitê Animal Care. Masculino Sprague-Dawley com 8 semanas foram utilizadas para esta demonstração. Os ratos foram obtidos a partir de Charles River Laboratories, em Wilmington, MA e todos foram mais de 300 gramas. Ratos tiveram acesso a dieta padrão de laboratório e foi mantido em condições de laboratório padrão. Os ratos foram inicialmente anestesiados com isofluorano e mantidas sob anestesia durante a cirurgia com isofluorano por meio de uma máscara. A incisão mediana de 2 cm foi feita a partir do processo xifóide. Uma vez que a fáscia foi aberto, os lobos do fígado foram retraídos cranialmente com retractor uma Sen, e do duodeno foi recolhido caudalmente usando Q-dicas. O ducto biliar foi identificado como uma estrutura tubular de entrar no duodeno. O ducto biliar foi colocado sob tensão e parcialmente cortada. A estéril cinco centímetros tubo de polietileno de comprimento com um diâmetro interno de 0,6 mm e um diâmetro externo de 0,9 mm foi utilizada. Uma extremidade deste tubo foi selado calor ea outra extremidade foi gentilmente chanfrados. O fim chanfrado foi então passado para o ducto biliar. Este foi garantido no local usando 8-0 suturas Nylon proximal e distal à abertura do ducto biliar. O tubo restantes junto com o fim selado foi colocado na cavidade peritoneal. O local da operação foi irrigada com solução salina normal. O abdômen foi então fechado em 2 camadas, com sutura de poliglactina 4-0. A linha alba foi fechada com sutura contínua ea sutura interrompida dérmica foram colocados. Cola de pele foi então aplicado sobre a pele. Os ratos foram autorizados a se recuperar em condições de laboratório padrão com acompanhamento diário do peso corporal para assegurar a hidratação adequada. Para a operação de inversão de colestase, os ratos foram anestesiados com isofluorano como descrito anteriormente. O abdômen foi aberto sobre o local da incisão anterior. O tubo foi identificado e levado para fora da cavidade peritoneal. Aderências omental ao redor do tubo são libertados usando dissecção romba e aguda. Um site no duodeno foi então identificado para o posicionamento confortável do tubo duodenostomy. A sutura em bolsa, 2-3 mm de diâmetro, foi então colocado usando 8-0 Nylon. O duodeno foi aberto dentro desta sutura em bolsa. O fim selada do tubo foi, então, cortados em tamanhos adequados. Livre fluxo de bile foi assegurada. Esta extremidade do tubo foi então colocado para o duodeno ea sutura em bolsa foi apertada. O abdômen foi irrigada e fechou em camadas. Em um estudo anterior, onde coledocoduodenostomia foi realizada utilizando uma técnica diferente, os ratos foram sobreviveu por 12 semanas e os ratos eram saudáveis ​​durante esse período. Além disso, este estudo confirmou a reversão de alterações bioquímicas e histológicas após coledocoduodenostomia em ratos submetidos à obstrução do ducto biliar por um período de duas semanas. 7

<ol><li>Gouma, D. J., Roughneen, P. T., Kumar, S., Moody, F. G., Rowlands, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+nutritional+status+associated+with+obstructive+jaundice+and+biliary+drainage+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Clin+Nutr%22%5BJournal%5D)">Changes in nutritional status associated with obstructive jaundice and biliary drainage in rats.</a> Am J Clin Nutr. 44, 362-369 (1986).</li>
<li>Ohtsuka, M., Miyazaki, M., Kondo, Y., Nakajima, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil-mediated+sinusoidal+endothelial+cell+injury+after+extensive+hepatectomy+in+cholestatic+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Neutrophil-mediated sinusoidal endothelial cell injury after extensive hepatectomy in cholestatic rats.</a> Hepatology. 25, 636-641 (1997).</li>
<li>Abe, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kupffer+cell-derived+interleukin+10+is+responsible+for+impaired+bacterial+clearance+in+bile+duct-ligated+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hepatology%22%5BJournal%5D)">Kupffer cell-derived interleukin 10 is responsible for impaired bacterial clearance in bile duct-ligated mice.</a> Hepatology. 40, 414-423 (2004).</li>
<li>Saiki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preoperative+internal+biliary+drainage+is+superior+to+external+biliary+drainage+in+liver+regeneration+and+function+after+hepatectomy+in+obstructive+jaundiced+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Surg%22%5BJournal%5D)">Preoperative internal biliary drainage is superior to external biliary drainage in liver regeneration and function after hepatectomy in obstructive jaundiced rats.</a> Ann Surg. 230, 655-662 (1999).</li>
<li>Subhas, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+of+methylprednisolone+on+warm+ischemia-reperfusion+injury+in+a+cholestatic+rat+liver%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Surg%22%5BJournal%5D)">Protective effect of methylprednisolone on warm ischemia-reperfusion injury in a cholestatic rat liver.</a> Am J Surg. 199, 377-380 (2010).</li>
<li>Kara, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anatomical+study+on+the+rat+pancreas+and+its+ducts+with+emphasis+on+the+surgical+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Anat%22%5BJournal%5D)">The anatomical study on the rat pancreas and its ducts with emphasis on the surgical approach.</a> Ann Anat. 187, 105-112 (2005).</li>
<li>Ryan, C. J., Than, T., Blumgart, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Choledochoduodenostomy+in+the+rat+with+obstructive+jaundice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Choledochoduodenostomy in the rat with obstructive jaundice.</a> J Surg Res. 23, 321-331 (1977).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Colestase leva a uma miríade de mudanças no sistema gastrointestinal. Estudos têm sido feitos procurando as mudanças no sistema imunológico e estado nutricional. Colestase 1-3 pode afetar os resultados das cirurgias hepáticas. Estudos têm sido realizados para melhorar os resultados de cirurgias hepáticas, na presença de colestase. 05/04 Com as melhorias na medicina e na pesquisa, mais estudos serão feitos em colestase. Por isso, é necessário ter um modelo colestática bom. O rato é o preferido como ...

criação de modelo rat reversível colestática

Creation of Reversible Cholestatic Rat Model

Colestase é uma condição clínica comumente encontradas pelos dois cirurgiões e gastroenterologistas. Colestase pode causar várias alterações fisiológicas e afetam o estado nutricional e os resultados cirúrgicos. Estudo das alterações fisiopatológicas que ocorrem no fígado e outros órgãos é importante. Vários estudos foram feitos em modelos de ratos colestática. Nós usamos um modelo de rato reversível colestática em nosso recente estudo examinando o papel da metilprednisolona na lesão de reperfusão de isquemia. Várias técnicas para a criação de um modelo reversível colestática têm sido descritas. Criação de um modelo reversível colestática rato pode ser um desafio, em vista do pequeno tamanho e anatomia hepatopancreatobiliary única em ratos. Este artigo vídeo demonstra a criação de um modelo colestática reversível. Este modelo pode ser usado em vários estudos, como olhar para as mudanças na nutricionais, fisiológicos, patológicos, alterações histológicas e imunológicas do trato gastrointestinal. Este modelo também pode ser usado para ver os efeitos da colestase e várias intervenções terapêuticas em cirurgias hepáticas graves.

Colestase é uma condição clínica comumente encontradas pelos dois cirurgiões e gastroenterologistas. Criação de um modelo reversível colestática rato pode ser um desafio, em vista do pequeno tamanho e anatomia hepatopancreatobiliary única em ratos. Este artigo vídeo demonstra a criação de um modelo colestática reversível.

Criação de modelo Rat reversível colestática

A colestase é uma condição clínica comumente encontrada tanto por cirurgiões quanto por gastroenterologistas. A colestase pode causar diversas alterações fisiológicas e ...

Criação de modelo reversível de colestase em ratos. Olá a todos. Sou residente de Cirurgia Geral Goulash do Hospital e Centros Médicos de Providence em Southfield, Michigan.Hoje demonstrarei a criação de um modelo reversível de rato com colestase. O rato é anestesiado usando isoflurano na câmara e posteriormente com máscara. Durante o procedimento, utiliza-se um tubo de poliéster com diâmetro externo de 0,9 milímetro e diâmetro interno de 0,6 milímetro, com uma extremidade aberta e a outra selada. Os instrumentos utilizados incluem um conjunto padrão de instrumentos microcirúrgicos para rato, espátulas oftálmicas, cotonetes e nylon 8-0. O procedimento é realizado com microscópio cirúrgico.Pode ser realizada alternativamente utilizando campos cirúrgicos. Aqui está sendo aplicado um campo estéril estável. Este procedimento é realizado com todas as precauções assépticas.Passos cirúrgicos: é feita uma incisão mediana de dois centímetros a partir do processo xifoide do esterno. O tecido subcutâneo e a fáscia são abertos com tesoura. A peritônio é cortado aqui, expondo o fígado.A hemostasia é garantida usando uma pinça de eletrocautério portátil. Esta é a porção mediana e o lobo esquerdo do fígado na anatomia biliar do rato. Este é um diagrama esquemático da anatomia biliar do rato.O fígado do rato é dividido nos lobos direito, mediano, esquerdo e caudado. Este é o estômago e este é o ducto biliar. Aqui você observa que uma porção significativa do ducto biliar não está associada à veia porta e à artéria hepática.É nesta porção do ducto biliar que se realiza a fixação e a criação da colestase. Os lobos hepáticos são retratados utilizando um afastador tipo "send" e uma haste com ponta de algodão é usada para puxar o num para baixo. Em seguida, o ducto biliar é fixado com um instrumento microcirúrgico próximo ao num.Esta é a mesma etapa de cateterização do ducto biliar, que está sendo demonstrada em um modelo de rato diferente. E novamente, esta é a mesma etapa de cateterização do ducto biliar, que foi gravada a partir do exterior do microscópio cirúrgico. Para a criação de colestase, um fio de sutura polissub é passado sob o ducto biliar e o ducto biliar é colocado sob tração.Este é o ducto biliar sob tração. Esta é uma visão ampliada. O ducto biliar está sendo aberto aqui.A borda do tubo poli é então introduzida neste ducto biliar. Utilizamos um instrumento microcirúrgico para sonda de alimentação para auxiliar neste processo. É necessário ter cuidado para que o tubo seja inserido suavemente.Então, é feita uma janela no ducto biliar proximal. Uma sutura de náilon 8-0 é passada por essa janela. A sutura ATO é então amarrada com três nós quadrados para manter o tubo no lugar.Uma segunda janela é criada abaixo do ducto biliar proximalmente à primeira sutura. Outra sutura ATO é usada para fixar o tubo proximalmente. Em seguida, é feita uma janela na parte distal do ducto biliar e a sutura ATO é passada através dela.Isso é usado inicialmente para ligar o ducto biliar. Em seguida, o ponto é enrolado ao redor do tubo e amarrado ao redor dele, fixando o tubo com segurança. O ponto está sendo cortado aqui; em seguida, o ponto de tração é retirado.Aqui estamos afastando novamente. O tubo é então empurrado de volta para a cavidade peritoneal e acomodado confortavelmente. O abdômen é então lavado usando dois ml de solução salina normal.O fluido é então drenado usando uma gaze dois por dois. Em seguida, realiza-se uma inspeção final para confirmar a posição correta e confortável do tubo e para verificar a hemostasia antes do fechamento do abdome. A fáscia está sendo fechada com sutura contínua de poliácido 5-0.A pele é então fechada com pontos dermais interrompidos. A reversão da colestase é realizada treinando o cubo de poliéster no odum. A reversão da colestase está sendo demonstrada na rata neste mesmo contexto. Aqui. A pele e a fáscia estão sendo cortadas com tesoura.O fígado é retratado e o duodeno está sendo tracionado. Com os cotonetes, identificamos um ponto no duodeno onde o tubo de poliéster possa assentar confortavelmente. Em seguida, aplicamos suturas explosivas com fio 8-0 ou náilon ao redor do local previamente selecionado para a colocação do tubo.Asseguramos que mordidas musculares serosas sejam incluídas em cada ponto. O tubo de polietileno (NEP) é então retirado da cavidade peritoneal. Nos casos em que o tubo permaneceu por um período mais longo, pode haver aderências significativas ao redor do tubo, que precisam ser cuidadosamente soltas.O tubo é então cortado com a tesoura sobre um swab para absorver a drenagem biliar. Em casos em que o tubo permaneceu por um período mais longo, observamos uma quantidade significativa de bile saindo. Quando o tubo é aberto, o duram é então cortado ao centro do ponto de sutura da linha de pulso com uma tesoura, garantindo que toda a espessura do duram tenha sido aberta.O tubo é então inserido no nu e garantimos que ele fique confortável e alinhado na direção correta. A sutura de fixação é então apertada com três nós quadrados para ancorar o tubo no dynam. A ferida é então irrigada para remover a bile, que poderia ter vazado durante o procedimento, e o ADOS é fechado para garantir que o tubo esteja posicionado confortavelmente e que haja boa hemostasia antes do fechamento.Demonstração da drenagem biliar aqui, apenas para fins de demonstração, estamos removendo o cateter do Jordan para demonstrar que há drenagem livre de bile pelo cateter. Aplicação deste modelo, aplicação deste modelo. Este modelo pode ser utilizado para estudar as alterações fisiológicas, patológicas e histológicas no sistema biliar e no trato gastrointestinal associadas à colestase. Este modelo pode ser usado para estudar os efeitos da colestase sobre cirurgias hepáticas e também pode ser empregado para investigar as alterações no estado nutricional associadas à colestase.

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Medicine

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A interrupção do fluxo biliar resulta em lesão hepática colestática inflamatória grave com uma sequência característica de alterações morfológicas dependentes do tempo. Aqui apresentamos um protocolo para a ligadura cirúrgica do ducto colédoco em camundongos que permite induzir uma forte resposta fibrótica após 21 a 28 dias.

Ligadura do ducto biliar em ratos: Indução de Inflammatory Lesão hepática e fibrose por colestase obstrutiva

Indução rápida hipertrofia hepática usando associando partição do fígado e ligadura da veia porta para um hepatectomy encenada (ALPPS) tem sido proposto para ressecção de tumores no fígado ressecável no limite. Este modelo pode elucidar os mecanismos envolvidos na hipertrofia rápida e permite testes de drogas que promovem ou bloqueiam a aceleração da regeneração.

Modelo do rato da partição fígado associando e ligadura da veia porta para procedimento encenado Hepatectomy (ALPPS)

Aqui nós descrevemos um método comum para induzir lesão hepática crônica em ratos, alimentando-se de uma dieta deficiente em colina e ethionine-complementado do (CDE). Demonstramos que o monitoramento de integridade, perfusão hepática, isolamento e preservação. Um curso de tempo de seis semanas pode informar sobre a lesão hepática, pathohistology, fibrose, inflamatória e respostas de células progenitoras de fígado.

O murino colina deficiente, Ethionine-completada (CDE) dieta modelo de lesão hepática crônica

Aqui, apresentamos a ligadura parcial biliar como modelo cirúrgico de lesão hepática e regeneração em roedores.

Ligadura do colédoco parcial no Mouse: um modelo controlado da colestase obstrutiva localizada

Aqui descrevemos um protocolo detalhado para medição invasiva dos parâmetros hemodinâmicos, incluindo pressão portal, fluxo sanguíneo esplâncnico e hemodinâmica sistêmica para caracterizar a síndrome de hipertensão portal em ratos.

Caracterização hemodinâmica invasiva da síndrome hipertensiva-Portal em ratos cirrose

O modelo animal da falha de fígado aguda desenvolvido no estudo atual apresenta uma alternativa praticável para o estudo de terapias potenciais. O modelo atual emprega o efeito combinado de ferimento hepático físico e droga-induzido e fornece uma janela de tempo apropriada para estudar o potencial de terapias novas.

Geração de um modelo de rato de insuficiência hepática aguda, combinando 70% hepatectomia parcial e paracetamol

Este protocolo descreve um método comum e viável de induzir lesão hepática aguda (ALI) através da exposição ao ClC4 através de uma sonda orogástrica. A exposição ao CCl4 induz ali através da formação de espécies reativas de oxigênio durante sua biotransformação no fígado. Este método é utilizado para analisar a fisiopatologia da ALI e examinar diferentes estratégias hepatoprotetoras.

Induzindo lesão hepática aguda em ratos via tetracloreto de carbono (CCl4) exposição através de um tubo orogástrico

Modelos animais para pancreatite aguda grave permitem o estudo de alterações fisiodicosiológicas no estágio inicial, facilitando a observação da evolução dos eventos inflamatórios. Aqui fornecemos um protocolo para a indução de pancreatite biliar aguda grave por infusão retrógrada de taurocholate de sódio no ducto pancreático de camundongos C57BL/6 anestesiados.

Taurocholate de sódio induziu pancreatite aguda grave em C57BL/6 camundongos

Pancreatite crônica (PC) é uma doença caracterizada por inflamação e fibrose do pâncreas, frequentemente associada a dor abdominal intratável. Este artigo se concentra na refinação da técnica para gerar um modelo de camundongo de CP via infusão de ducto biliar com ácido sulfônico de 2,4,6 -trinitrobenzene (TNBS).

Um modelo de rato para pancreatite crônica através da infusão TNBS do ducto biliar

Um modelo de rato de pancreatite aguda grave é descrito aqui. O procedimento aqui apresentado é muito rápido, simples e acessível, permitindo, assim, potencialmente o estudo dos mecanismos moleculares e diferentes intervenções terapêuticas na pancreatite aguda de forma conveniente.

Estabelecimento de um modelo de pancreatite aguda grave do rato usando injeção retrógrada de taurocholate de sódio no ducto biliopancreático

Estabelecemos um modelo murino de fibrose hepática crônica, que fornece um modelo animal adequado para o estudo mecanístico da atresia biliar (AB) induzida por vírus e uma plataforma para futuros tratamentos de AB.

Um Modelo Murino de Fibrose Hepática Crônica para o Estudo da Atresia Biliar

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