Name: Um sistema para a cultura de células epiteliais pigmentadas da íris para estudo da regeneração Lens em Newt (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-22T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 56 s
Description: Aprenda a cultivar células epiteliais pigmentadas da íris de tritões para estudar regeneração de lentes. Este método demonstra isolamento, cultivo in vitro e implante para análise histológica do potencial regenerativo.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Este trabalho foi financiado por uma bolsa NIH Ey10540 a PAT.

1. Iris Cultura de Células <ol><li> Colete globos oculares de 7 newts (anestesiados em 0,1% etílico 3-aminobenzoato de ácido metano sulfônico preparado em PBS) e coloque em cálcio, magnésio livre Hanks solução (CMF). </li><li> Mudar de luvas e trabalhar no bairro de cultura de tecidos. </li><li> Esterilizar bolas olho em Lugol's-EtOH por 3 segundos. </li><li> Lavar 2 vezes em CMF. </li><li> Transferência olhos para Hanks e começar a dissecção. </li><li> Dissecar-íris da córnea complexa e remover retina neural. </li><li> Transferência de complexos em um novo prato de Hanks. </li><li> Utilizando bisturi # 15, complexos separados em metades dorsal e ventral. </li><li> Remover fragmentos íris (ventral primeiro) e coloque em um prato contendo 1 ml L-15. </li><li> Adicionar 15% (150 ul) volume de dispase (7,5 unidades / ml de concentração). </li><li> Incubar a 27 ° C por 2 horas (wrap prato com parafilme). </li><li> Isolar as células do estroma IPE (solução Coloque tripsina a 27 ° C). </li><li> Coletar células IPE em um tubo de 1,5 ml. </li><li> Centrifugar a 1000 rpm em temperatura ambiente (temperatura ambiente) por 2 minutos, retire o sobrenadante. </li><li> Lave com 1 ml Hanks e centrifugar a 1000 rpm em temperatura ambiente por 2 minutos, retire o sobrenadante. </li><li> Adicionar 1 ml de solução de tripsina; incubar por 2 horas a 27 ° C. </li><li> Centrifugar a 1000 rpm em temperatura ambiente por 2 minutos, retire tripsina. </li><li> Adicionar 1 ml L-15 para lavar, centrifugar a 1000 rpm por 2 minutos. </li><li> Adicionar 800 ul L-15, pipeta lentamente para cima e para baixo ~ 10 vezes (mais de 12 vezes reduz a aderência). </li><li> Placa IPE as células em um prato de colágeno 24 revestido bem e incubar a 27 ° C por 2 semanas (geralmente, 4 dorsal e ventral 4 poços são obtidos a partir de 7 newts). </li><li> Nesta fase as células são adequados para a transfecção de genes ou tratamento com fatores para determinar seu papel na indução ou interferir com a regeneração da lente. </li></ol> 2. Agregação de células Iris <ol><li> Para as placas contendo as células da íris adicionar 20μl de solução dispase a 400 mL médio, homogeneizar suavemente. </li><li> Incubar as placas a 27 ° C para pernoite. </li><li> Pipeta suavemente para cima e para baixo para retirar as células </li><li> Células lugar em Eppendorf tubo e girar durante 2 minutos a 1000 rpm em temperatura ambiente. </li><li> Remova o meio e lavar, adicionando 1 ml L-15 completa, spin 2 minutos a 1000 rpm em temperatura ambiente, remova o meio. </li><li> Use 2000-7000 células por agregado. Adicione 200 ul L-15 por agregar em cada tubo. </li><li> Dividir células (200 mL) em tubos eppendorf novo. </li><li> Giram a 1000 rpm por 2 min à temperatura ambiente. </li><li> Incubar por 48 horas a 27 ° C. </li></ol> 3. Implantação de células de agregação <ol><li> Fazer um corte na córnea do olho de salamandra e remover as lentes. </li><li> Após a remoção da lente, coloque o agregado de células IPE, logo abaixo do tecido da córnea no lado ventral do olho. </li><li> Os tritões são mantidos por um mês para deixá-los regenerar a lente. </li></ol> 4. Incorporação de Olho Newt <ol><li> Remove os olhos newt implantado com o agregado e colocá-lo em tampão fosfato salino (PBS). </li><li> Fix em paraformaldeído 4% a 4 ° C durante pelo menos 4 horas ou durante a noite. </li><li> Lavar em PBS, 4 ° C por 30 minutos. </li><li> Tratá-lo com solução salina a 0,85%: 4 ° C, 30 minutos. </li><li> Lave em Saline / etanol (1:1): RT por 15 minutos. </li><li> Lavar em etanol 70%: RT, 15 minutos. Repeti-lo uma vez. </li><li> Lavar em etanol 85% e 95% de etanol à temperatura ambiente, 30 minutos cada </li><li> Lavar em etanol 100%: RT, 30 minutos. Repeti-lo uma vez. </li><li> Armazenar a 4 ° C ou continuar. </li><li> Lavar em 100% xileno: RT, 30 minutos. Repeti-lo uma vez. </li><li> Tratar com xilol / parafina (1:1): 60 ° C, 45 minutos. </li><li> Tratar com parafina de 100%: 60 ° C, 20 minutos. Repeti-lo mais duas vezes. </li><li> Incorporar em moldes de incorporação. </li></ol> 5. Seccionamento <ol><li> Prepare 15 seções M do olho incorporado usando um micrótomo. </li><li> Coloque as seções olho em uma lâmina revestida de gelatina e deixe-a um aquecedor de slides. </li></ol> 6. Coloração <ol><li> Coloque as lâminas em xilol por 10 minutos. Repeti-la mais uma vez. </li><li> Hidrate em: 100%, 95%, 80%, 70%, etanol 30% por 1 minuto cada </li><li> Enxágüe em água DI por um minuto. </li><li> Lavar em PBS por 15 minutos. </li><li> Lave em PBST (0,2% Triton-X 100 em PBS) por 15 minutos. </li><li> Lavar em PBS por 15 minutos. </li><li> Lugar em solução de bloqueio (anticorpo de cabra 10% secundário) por uma hora. </li><li> Lugar em anticorpo primário para pernoite. </li><li> Lavar anticorpo primário em PBS por 15 minutos. </li><li> Lave em PBST por 15 minutos. </li><li> Lavar em PBS por 15 minutos. </li><li> Lugar em anticorpo secundário por 2 horas no escuro (diluição 1:100 em PBS). </li><li> Lavar em PBS, PBST e PBS por 15 minutos cada e depois montar. </li><li> Observe as lâminas no microscópio de fluorescência. </li></ol> 7. Resultados representativos: Este procedimento de cultivo newt irsão as células tem sido utilizada para estudar o potencial de regeneração da dorsal e as células ventral IPE. Além disso, também é possível estudar os genes específicos que contribuem para o mecanismo de regeneração da lente no olho do newt. Quando as células foram cultivadas por duas semanas (Figura 1) podem ser transfectadas por genes para examinar a sua função na regeneração da lente. De particular interesse são genes que poderiam induzir a íris ventral. Uma vez que as células ventral da íris não pode transdifferentiate a lente (Figura 2) a função de indutor de um gene candidato pode ser estudada. No passado, usando esta técnica nós mostramos que quando seis-3 foi mais expressa na presença de ácido retinóico lente de indução foi observado a partir da íris ventral 6. Na Figura 3 podemos ver que o agregado íris ventral deu origem a uma lente completamente crescido e diferenciados (seta), não diferente do que a lente de host da íris dorsal (seta). <img src="/files/ftp_upload/2713/2713fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. a) Dorsal células epiteliais pigmentadas da íris cultivadas in vitro por um período de duas semanas. b) Ventral células epiteliais pigmentadas da íris cultivadas in vitro por um período de duas semanas. Note-se que a pigmentação persistir a este estágio em células dorsal e ventral da íris. <img src="/files/ftp_upload/2713/2713fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Capacidade de regeneração de células cultivadas IPE. a) indução Lente de agregados de células dorsal IPE (seta). Anfitrião indução lente de íris dorsal (seta), di: iris dorsal, vi: iris ventral, le: epitélio da lente, lf: fibras da lente. b) Ausência de indução de lente de agregados de células ventral IPE (seta). Anfitrião indução lente de íris dorsal (seta). <img src="/files/ftp_upload/2713/2713fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Indução lente de agregados ventral transfectadas com seis-3 e tratadas com ácido retinóico. Anfitrião indução lente de íris dorsal (seta). Indução lente de agregados ventral (seta).

<ol><li>Tsonis, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+in+vertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Regeneration in vertebrates.</a> Dev Biol. 221, 273-284 (2000).</li>
<li>Tsonis, P. A., Madhavan, M., Tancous, E. E., Del Rio-Tsonis, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+newt%27s+eye+view+of+lens+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">A newt's eye view of lens regeneration.</a> Int. J. Dev. Biol. 48, 975-980 (2004).</li>
<li>Del Rio-Tsonis, K., Tsonis, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Eye+regeneration+at+the+molecular+age%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Dyn%22%5BJournal%5D)">Eye regeneration at the molecular age.</a> Dev. Dyn. , 226-2211 (2003).</li>
<li>Okamoto, M., Ito, M., Owaribe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Difference+between+dorsal+and+ventral+iris+in+lens+producing+potency+in+normal+lens+regeneration+is+maintained+after+dissociation+and+reaggregation+of+cells+from+the+adult+newt%2C+Cynops+pyrrhogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Develop+Growth+Differ%22%5BJournal%5D)">Difference between dorsal and ventral iris in lens producing potency in normal lens regeneration is maintained after dissociation and reaggregation of cells from the adult newt, Cynops pyrrhogaster.</a> Develop Growth Differ. 40, 11-18 (1998).</li>
<li>Hayashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Highly+efficient+transfection+system+for+functional+gene+analysis+in+adult+amphibian+lens+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Develop+Growth+Differ%22%5BJournal%5D)">Highly efficient transfection system for functional gene analysis in adult amphibian lens regeneration.</a> Develop Growth Differ. 43, 361-370 (2001).</li>
<li>Grogg, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BMP+inhibition-driven+regulation+of+six-3+underlies+induction+of+newt+lens+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">BMP inhibition-driven regulation of six-3 underlies induction of newt lens regeneration.</a> Nature. 438, 858-862 (2005).</li>
<li>Nakamura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((miRNAs+in+Newt+Lens+Regeneration%3A+Specific+Control+of+Proliferation+and+Evidence+for+miRNA+Networking%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">miRNAs in Newt Lens Regeneration: Specific Control of Proliferation and Evidence for miRNA Networking.</a> PLoS One. 5, e12058-e12058 (2010).</li>
<li>Madhavan, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+Pax-6+in+lens+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">The role of Pax-6 in lens regeneration.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 14848-14853 (2006).</li>
<li>Maki, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oocyte-type+linker+histone+B4+is+required+for+transdifferentiation+of+somatic+cells+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Oocyte-type linker histone B4 is required for transdifferentiation of somatic cells in vivo.</a> FASEB J. 24, 3462-3467 (2010).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Este protocolo estabeleceu um sistema in vitro para estudar mecanismos de regeneração lente em salamandras. Uma vez que os agregados (ou dorsal ou ventral seguir fielmente os seus no comportamento in vivo durante a regeneração esta técnica pode aliviar o tremendo esforço necessário para transgenia em tritões e pode ser utilizado para ganho de função, bem como perda da função experimentos 7,8,9. Também , dos agregados ou a íris como um todo pode ser facilmente tratada com fatores de crescimento e examinar os seus efeitos, conforme descrito neste protocolo. Por exemplo, o papel da BMP caminho tem sido estudada utilizando esta técnica 6.

<table><tbody><tr><td>Solução de Lugol&amp;rsquo;s</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L-6146</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H-4034</td><td></td></tr><tr><td>Ácido metanosulfônico de etil 3-aminobenzoato</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E-10521</td><td></td></tr><tr><td>Dispase</td><td>GIBCO, por Life Technologies</td><td>17105-041</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina 1:250</td><td>GIBCO, por Life Technologies</td><td>27250018</td><td></td></tr><tr><td>L-15 (Leibovitz)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L-4386</td><td></td></tr><tr><td>DNase 1</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5025-150KU</td><td></td></tr><tr><td>Sulfato de canamicina</td><td>GIBCO, por Life Technologies</td><td>100x, 15160</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F4135</td><td></td></tr><tr><td>Fungizone (solução de anfotericina B)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2942</td><td></td></tr><tr><td>Placa de 24 poços revestida com colágeno</td><td>BD Biosciences</td><td>354408</td><td></td></tr></tbody></table>

um sistema para a cultura de células epiteliais pigmentadas da íris para estudo da regeneração lens em newt

A System for Culturing Iris Pigment Epithelial Cells to Study Lens Regeneration in Newt

Salamandras como newt e axolotl possuem a capacidade de regenerar muitas de suas partes do corpo perdidas, como membros, a cauda com medula espinhal, olhos, cérebro, coração, mandíbula 1. Especificamente, salamandras são únicos pela sua capacidade de regeneração da lente. Após a remoção da lente, IPE células da íris dorsal transdifferentiate para as células da lente e, eventualmente, formar uma nova lente em cerca de um mês 2,3. Esta propriedade de regeneração nunca é exibido por células ventral da íris. O potencial de regeneração das células da íris pode ser estudado, fazendo transplantes de células cultivadas in vitro IPE. Para a cultura, as células dorsal e ventral da íris são primeiramente isoladas do olho e cultivadas separadamente para um período de duas semanas (Figura 1). Estas células são cultivadas e implantadas avaliação reagregada de volta para o olho newt. Estudos anteriores mostraram que o reaggregate dorsal mantém a sua capacidade de lente formando enquanto o agregado ventral não formar uma lente, sintetizando, assim, o processo em vivo (Figura 2) 4,5. Este sistema de determinação do potencial de regeneração de células dorsal e ventral da íris é muito útil para estudar o papel dos genes e proteínas envolvidos na regeneração da lente.

Em newt, a lente regenera sempre a partir da íris dorsal pela transdiferenciação das células epiteliais pigmentadas da íris (EPIs). Aqui nós descrevemos um procedimento para células de cultura dorsal e ventral newt IPE e sua implantação para o olho newt. As células são então implantados estudado por corte de tecido e imuno-histoquímica.

Um sistema para a cultura de células epiteliais pigmentadas da íris para estudo da regeneração Lens em Newt

Salamandras, como o tritão e o axolote, possuem a capacidade de regenerar muitas de suas partes corporais perdidas, tais como membros, a cauda com a medula espinhal, olhos, cérebro, ...

O objetivo geral deste procedimento é cultivar células do epitélio pigmentado da íris para estudar a regeneração do cristalino em nova. Isso é realizado primeiramente anestesiando-se a nova em uma solução anestésica, e em seguida removendo-se os olhos.O segundo passo do procedimento é isolar as células epiteliais pigmentadas da íris a partir do tecido ocular, removendo primeiro o tecido retiniano, seguido pelo corte dos fragmentos da íris corneana em metades dorsal e ventral. As células da íris são então separadas do estroma e cultivadas in vitro por duas semanas. Após duas semanas de Turing, as células EPI são agregadas e então implantadas em um novo recipiente que foi lin optimiz.Após um mês de cicatrização, a histologia revela o potencial de regeneração do cristalino pelas células da EPI dorsal e ventral. A demonstração visual deste método é essencial nas etapas de cultura celular e implante, difíceis de aprender porque exigem cerca de cem habilidades para microdissecção e cirurgias. Comece anestesiando pelo menos sete camundongos nus com 0,1% de etil aminobenzoato de metano sulfônico, remova cirurgicamente seus olhos utilizando pinça e tesoura cirúrgica, cortando a pálpebra juntamente com a conjuntiva. Em seguida, corte o nervo óptico.Agora, transfira rapidamente os olhos dissecados para uma câmara de fluxo laminar e esterilize-os em etanol de Lugo por três segundos. Em seguida, lave os olhos duas vezes em solução de Hank livre de cálcio e magnésio. Transfira-os para Hank fresco e prossiga com a dissecação.Usando um bisturi, faça uma incisão no olho. Em seguida, use tesoura para cortar ao redor da margem corneana. Remova a lente e corte o tecido retiniano remanescente junto com a esclera.Transfira os complexos íris-corneanos para um recipiente com Hanks fresco usando um bisturi número 15. Separe os complexos em suas metades dorsal e ventral. As íris dorsal e ventral são identificadas pela presença de manchas pretas na esclera do lado dorsal e por um corte em forma de V na íris ventral.Se pare o íris ventral e o íris dorsal. Colete os fragmentos do íris em uma placa de 35 milímetros contendo um mililitro de solução L 15. Mantenha as metades dorsal e ventral em placas separadas.Agora, adicione 150 microlitros de solução dispa às placas e incube-as por duas horas a 27 graus Celsius. Para coletar células EPI do estroma. Com a ajuda de pinças, desprenda suavemente as células EPI de todos os fragmentos teciduais coletados.Em seguida, transfira as células IPE para um tubo de 1,5 mililitro e centrifugue a 1000 RPM por dois minutos à temperatura ambiente, descartando o sobrenadante. Ressuspenda o pellet em um mililitro de solução de Hanks e repita a centrifugação para separar as células. Descarte a solução de Hanks e ressuspenda o pellet.Em um mililitro de uma solução de tripsina 1:250, incubar por duas horas a 27 graus Celsius para lavar as células, centrifugar e remover a tripsina. Adicionar um mililitro de solução L 15 e centrifugar novamente, repetir a lavagem mais uma vez e substituir por 800 microlitros de solução L 15 fresca, e pipetar suavemente as células para colocá-las em suspensão. Em seguida, semear as células em placas de 24 poços revestidas com colágeno.O rendimento habitual de sete Ns é de quatro poços de células dorsais e quatro poços de células ventrais. Incube o recipiente por duas semanas a 27 graus Celsius após duas semanas. Como mostrado aqui, o IPE pode ser transfectado com genes para examinar sua função na regeneração do cristalino.Essa cultura de duas semanas de células IPE ventrais exibe a mesma morfologia que as células dorsais. Observe que a pigmentação persiste até esta fase tanto nas células da íris dorsal quanto nas ventrais. Antes de implantar as células IPE, elas devem ser agregadas pela adição de 20 microlitros de dyse em 400 microlitros de meio de cultura fresco às células, girar suavemente a placa e deixar as células durante a noite em uma incubadora a 27 graus Celsius.No dia seguinte, utilize pipetagem suave para desprender as células e, em seguida, transfira-as para tubos de 1,5 mililitro; agora, lave as células centrifugando os tubos e substituindo o sobrenadante por um mililitro de L 15. Repita este passo duas vezes. Utilize 10 microlitros da suspensão celular para calcular a contagem de células utilizando métodos padrão.Uma vez calculado, prepare de 3.000 a 5.000 células em 200 microlitros de L 15 por agregado. Agora, centrifugue as células e incube-as por 48 horas. A 27 graus Celsius, as células podem agora ser implantadas em um animal receptor.Comece anestesiando um adulto novo na solução anestésica até que pare de se mover. Agora, use uma lâmina de bisturi para fazer um corte na córnea do olho. Em seguida, com o auxílio de uma pinça, remova a lente.Após a remoção da lente, posicione o agregado de células da EPI logo abaixo do tecido corneano no lado ventral do olho. Agora, devolva a salamandra a um recipiente separado e permita que ela se recupere. Durante esse período, manipule a salamandra com cuidado para evitar danos ao tecido em cicatrização.As células transplantadas precisam de um mês para se regenerar em uma nova lente. Após decorrido um mês, remova os novos olhos implantados com as células agregadas e fixe o tecido. Utilizando um protocolo padrão de desidratação, o material fixado pode ser embutido em moldes apropriados para cortes de 15 micrômetros, fatiados e corados adequadamente.Após a implantação do agregado na região lenta do novo olho, o agregado proveniente das células da EPI dorsal induz a formação de uma nova lente. A indução da lente hospedeira a partir da íris dorsal também é observada no olho com o implante ventral. Nenhuma indução de lente é observada a partir do agregado preparado a partir das células da EPI ventral quando o gene six three está superexpresso; na presença de ácido retinóico, a indução de lente é observada a partir do agregado ventral.Além disso, a indução da lente do hospedeiro a partir da íris dorsal do olho é observada após o seu desenvolvimento. Esta técnica abriu caminho para que pesquisadores na área de regeneração da lente explorassem o papel de diferentes genes em um novo contexto.

a-system-for-culturing-iris-pigment-epithelial-cells-to-study-lens

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Este artigo demonstra a dissecção e incubação de retina de coelho e de partículas mediado por transferência de genes de codificação de plasmídeos GFP ou uma variedade de marcadores subcelular em células ganglionares da retina.

Cultura organotípicas de Retina Coelho Adulto

Explantes da região central da lente de ratos epitélio diferenciar de forma síncrona quando cultivadas na presença de FGF-2. Microscopia de imunofluorescência de tais culturas pode fornece informações romance sobre a expressão gênica e eventos de sinalização associado com a diferenciação terminal.

Preparação e Cultura de explantes Rat Lens epitelial para estudar a diferenciação terminal

Nós fornecemos um método reprodutível para monocamadas confluentes de cultura humana fetal células epitélio pigmentar da retina (hfRPE) células que apresentam morfologia, fisiologia, polaridade, e proteína e os padrões de expressão gênica do tecido nativo adulto. Este trabalho foi estendido para um modelo animal de várias doenças oculares.

Modelos experimentais para estudo da fisiologia epitélio pigmentar da retina e Fisiopatologia

Neste vídeo, mostramos um procedimento para obter células epiteliais pigmentares oculares de um modelo de coelho. As células são úteis no desenvolvimento de estratégias terapêuticas para doenças degenerativas da retina.

Isolando células IPE e RPE: uma técnica para obter células epiteliais pigmentares oculares do olho de coelho

Este vídeo demonstra o procedimento para isolar as células epiteliais pigmentares da retina, ou EPR, e as células epiteliais pigmentares da íris, ou EIP, de olhos bovinos colhidos. As células isoladas podem ser cultivadas para estudar seu papel no tratamento de doenças oculares.

Isolando células RPE e IPE do olho bovino: um procedimento para colher e cultivar células epiteliais de pigmento primário bovino

Descrito aqui é o estabelecimento de um modelo de cirurgia de catarata simulada ex vivo clinicamente relevante que pode ser usado para investigar mecanismos de resposta à lesão de tecidos epiteliais dentro de seu microambiente nativo.

Estabelecimento de um clinicamente relevantes<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Mock Cataract Surgery Modelo para investigar Epithelial Wound Repair em um microambiente Native

O objetivo do presente protocolo é demonstrar que o cultivo de pigmento retinal (RPE) as células epiteliais na membrana envelhecido e/ou doentes humanos de Bruch. Este método é adequado para estudar o comportamento de células RPE em uma matriz extracelular comprometido.

Cultivo de células epiteliais de pigmento Retinal em um modelo Ex Vivo da membrana de Bruch humano envelhecido

Aqui, é apresentado um protocolo para isolar e transfetar células epiteliais de íris primária e pigmento da retina de vários mamíferos (ratos, ratos, coelhos, suínos e bovinos). O método é ideal para estudar abordagens de terapia genética ocular em várias configurações para análises ex vivo e estudos in vivo transferíveis para humanos.

Isolamento, Cultura e Engenharia Genética de Células Epiteliais de Pigmento Primário mamífero para terapia genética não viral

Este manuscrito descreve um protocolo de vídeo detalhado para a cultura de células epiteliais primárias do cristalino (LECs), com o objetivo de melhorar a reprodutibilidade e auxiliar a pesquisa em catarata e opacificação da cápsula posterior (PCO). Ele oferece instruções passo a passo sobre dissecção de lentes, isolamento de LECs e validação, servindo como um guia valioso, especialmente para recém-chegados no campo.

Otimizando a cultura de células epiteliais primárias de lente de camundongo: um guia abrangente para tripsinização

Os protocolos descritos são novos métodos de visualização de estruturas periféricas na lente ocular com métodos de quantificação de imagens. Estes protocolos podem ser utilizados em estudos para melhor compreender a relação entre as estruturas da microescala do cristalino e o desenvolvimento/função do cristalino.

Imagens de montagem completa para visualizar e quantificar a estrutura da lente periférica, a morfologia e a organização da célula

A função da lente ocular de focar a luz na retina depende da transparência tecidual, biomecânica e índice de refração. Esta revisão destaca a arquitetura tridimensional da lente e discute os mecanismos complexos que mantêm a homeostase tecidual.

A Lente Ocular dos Mamíferos em Foco: Desenvolvimento, Anatomia, Fisiologia, Transparência, Biomecânica e Desafios Relacionados à Idade

Aprenda a cultivar células epiteliais pigmentadas da íris de tritões para estudar regeneração de lentes. Este método demonstra isolamento, cultivo in vitro e implante para análise histológica do potencial regenerativo.

Um sistema para a cultura de células epiteliais pigmentadas da íris para estudo da regeneração Lens em Newt

Explorar mais vídeos