Name: Eletrolítico Veia Cava Inferior Model (EIM) de trombose venosa (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 3 s
Description: Aprenda a induzir trombose venosa em camundongos usando o modelo eletrolítico de veia cava inferior. Este método permite estudar a formação de trombos em fluxo sanguíneo contínuo e investigar correlações com marcadores bioquímicos.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Suportado pelo NIH 1P01HL089407-01A1 (Lawrence, PI), Core animal A, 1 NIH K01 HL080962-01A2 (Myers, PI).

1. Anestesia Procedimentos do mouse <ol><li> Os animais são removidos de suas gaiolas e colocados em uma câmara de indução anestésica pré-operatória para a indução de gás em isoflurano a 2% e 100% de oxigênio a uma vazão de 0,5 litros por minuto (vaporizador controlada). </li><li> Os ratos são sedados na câmara de indução anestésica, removido da câmara e do abdômen ventral é raspada com tosquiadeiras elétricas, ou mantidos dentro da câmara se um creme depilatório cabelo é usado (1 min). </li><li> Enquanto ainda sob sedação, eles são pesados, os olhos são lubrificados com pomada oftálmica estéril e, em seguida, colocado em recumbancy dorsal em um dispositivo de aquecimento de água quente circulando sob anestesia geral com um cone de nariz usando isoflurano e oxigênio. Neste ponto, a taxa de oxigênio é reduzida para 0,2 litros por minuto. </li><li> O abdômen é pulverizado com solução de clorexidina (diacetato de clorexidina é rapidamente bacterialcidal e persistente) e limpo com gaze estéril ou até três vezes o local da cirurgia está limpo. </li></ol> 2. Rato Micro-cirúrgico e procedimentos de recuperação <ol><li> A incisão mediana ventral (2 cm) é feita com tesoura de íris através da pele e parede abdominal expondo o abdome. Um 2x2 salina estéril embebido em gaze é usada para refletir os intestinos para o lado esquerdo do animal. Um limitador do mouse é colocado no lugar permitindo a visualização da veia cava inferior (VCI). </li><li> Neste ponto, o isoflurano é reduzida a um nível de manutenção de 2% ea taxa de oxigênio permanece em 0,2 litros por minuto para o restante do procedimento cirúrgico. </li><li> Dissecção romba é facilitada utilizando um cotonete aplicador estéril e extra delicadas meia íris pinça curva. Cuidados devem ser tomados no manuseio do mouse para tecidos que são extremamente frágeis. </li><li> Todos os ramos laterais IVC, a partir das veias renais até a bifurcação ilíaca, estão ligados com 7-0 suturas não-reativo prolene. Ramos volta permaneceu patente. </li><li> No eletrolítico IVC modelo (EIM), uma agulha de aço inoxidável 25G, conectado a um fio de cobre revestido de prata (KY-30-1-GRN, Electrospec, Dover, NJ) é inserido na exposição caudal da VCI (Figura 1) e posicionado contra a parede anterior (ânodo). </li><li> Outro fio é implantado por via subcutânea completando o circuito (cátodo). </li><li> Uma corrente de 250 μAmps mais de 15 minutos foi aplicado utilizando um estimulador Grass S48 onda quadrada e uma unidade de corrente constante (Tecnologias Grass, Um Astro-Med, Inc., West Warwick, RI). Os resultados de corrente direta na formação de produtos tóxicos de eletrólise que corroem a superfície endotelial do IVC promoção de um ambiente trombogênico e formação de trombos subseqüentes. </li><li> Após 15 minutos, a agulha é removida e um chumaço de algodão é realizada suavemente em contato com a área para prevenir hemorragias </li><li> Em animais sham, a agulha é colocada na VCI e depois removido, sem aplicação da corrente. </li><li> O site laparotomia é fechada em uma forma de duas camadas. Nosso laboratório emprega vicryl 5-0, uma sutura sintética, em um padrão contínuo para fechar a parede abdominal. Cola adesivo de pele é usado para fechar a pele. Não há suturas externas para remoção. </li><li> Ratos são então recuperados em uma gaiola de rato individual, observado de perto no pós-operatório (45 minutos a 2 horas), sob uma lâmpada de aquecimento (min distância 24 centímetros de distância da gaiola), em seguida, voltaram para suas unidades habitacionais original. Medicação para dor e anti-inflamatórios podem ser usados ​​se não interferir com o objetivo do estudo. Justificação científica de reter medicamentos para a dor, veterinária, e aprovação ICUCA são necessários. Nosso laboratório descobriu que a buprenorfina ,0.05-0 0,1 mg / kg ² é um analgésico excelente pré-e pós-operatório para os ratos. Além disso, Lidocaína a 4mg/kg (0,4 ml / kg de uma solução a 1%) pode ser infundida no local da incisão, quando analgésicos sistêmicos possam confundir os resultados experimentais. </li><li> Nós normalmente não experiência pós-operatório efeitos adversos devido à TVP. No entanto, adversos pós-operatório pode incluir efeitos anestésicos morte espontânea, perda de sangue cirúrgico, e paresia parcial devido ao trauma do nervo. Animais que são lentas para se recuperar pode ser alimentado nutria gel ou ter ração úmida colocada no chão da gaiola para facilitar a recuperação do animal. Animais com sever complicações pós-operatórias devem ser humanamente eutanasiados. </li><li> No ponto de tempo determinado, a eutanásia é realizada de forma humana, em conformidade com as recomendações estabelecidas pela American Veterinary Medical Association orientações sobre a eutanásia para roedores. </li></ol> 3. Resultados representante O EIM é um modelo que formas trombo na presença de fluxo de sangue contínuo. As figuras abaixo mostram os parâmetros investigados neste novo modelo. <img src="/files/ftp_upload/2737/2737fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1 definesthe área anatômica onde uma 25G de aço inoxidávelagulha, conectada a um fio de cobre revestido de prata (KY-30-1-GRN, Electrospec, Dover, NJ) é inserido. Note que um nó linfático é quase presente e ajuda como um marco para encontrar o IVC caudal. <img src="/files/ftp_upload/2737/2737fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2: peso do trombo 2 dias após EIM em diferentes linhagens. Como esperado, o peso do trombo foi menor no PAI-1 camundongos KO e maiores em hipercoagulabilidade Delta CT camundongos (^ CT). <img src="/files/ftp_upload/2737/2737fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3: P-selectina solúvel, um fabricante de trombose venosa profunda, foi medida em diferentes linhagens. Os níveis mais baixos foram encontrados em PAI-1 camundongos KO enquanto os níveis mais altos foram encontrados em ratos de hipercoagulabilidade delta CT. <img src="/files/ftp_upload/2737/2737fig4.jpg" alt="Figura 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 4"> Figura 4 Correlação entre o peso do trombo e P-selectina solúvel foi encontrado em diferentes linhagens. De nota, no grupo que gerou o menor tamanho do trombo, a P-selectina solúvel detectado foi a mais baixa (PAI-1 camundongos KO). No grupo que gerou o maior tamanho do trombo, a P-selectina solúvel detectado foi o maior (hipercoagulabilidade delta CT). <img src="/files/ftp_upload/2737/2737fig5.jpg" alt="Figura 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 5"> Figura 5: A fim de demonstrar a presença do fluxo de sangue, ultra-sonografia foi realizada em ratos submetidos a EIM. A Figura 5 mostra o ultra-som realizado em um rato de 2 dias após EIM. Em seguida, o espécime foi colheita. Observe o que a forma trombo sugerem a formação de trombos na presença de fluxo

<ol><li>Diaz, J. A., Hawley, A. E., Alvarado, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thrombogenesis+with+continuous+blood+flow+in+the+inferior+vena+cava.+A+novel+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Thrombogenesis with continuous blood flow in the inferior vena cava. A novel mouse model.</a> Thromb Haemost. 104, 366-375 (2010).</li>
<li>Eitzman, D. T., Westrick, R. J., Nabel, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Plasminogen+activator+inhibitor-1+and+vitronectin+promote+vascular+thrombosis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Plasminogen activator inhibitor-1 and vitronectin promote vascular thrombosis in mice.</a> Blood. 95, 577-580 (2000).</li>
<li>Myers, D., Farris, D., Hawley, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selectins+influence+thrombosis+in+a+mouse+model+of+experimental+deep+venous+thrombosis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Surg+Res%22%5BJournal%5D)">Selectins influence thrombosis in a mouse model of experimental deep venous thrombosis.</a> J Surg Res. 108, 212-221 (2002).</li>
<li>Myers, D. D., Hawley, A. E., Farris, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P-selectin+and+leukocyte+microparticles+are+associated+with+venous+thrombogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vasc+Surg%22%5BJournal%5D)">P-selectin and leukocyte microparticles are associated with venous thrombogenesis.</a> J Vasc Surg. 38, 1075-1089 (2003).</li>
<li>Pierangeli, S. S., Barker, J. H., Stikovac, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+human+IgG+antiphospholipid+antibodies+on+an+in+vivo+thrombosis+model+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Effect of human IgG antiphospholipid antibodies on an in vivo thrombosis model in mice.</a> Thromb Haemost. 71, 670-674 (1994).</li>
<li>Pierangeli, S. S., Liu, X. W., Barker, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+thrombosis+in+a+mouse+model+by+IgG%2C+IgM+and+IgA+immunoglobulins+from+patients+with+the+antiphospholipid+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Thromb+Haemost%22%5BJournal%5D)">Induction of thrombosis in a mouse model by IgG, IgM and IgA immunoglobulins from patients with the antiphospholipid syndrome.</a> Thromb Haemost. 74, 1361-1367 (1995).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

O mouse é uma ferramenta excelente para pesquisa em experimentos in vivo. Assim, o desenvolvimento de modelos de mouse que simulam doenças ou condições patológicas são necessárias. Diversos modelos de mouse trombose venosa têm sido usados ​​para estudar a TVP, incluindo: fotoquímica (2), estase (3-4) e trauma mecânico (5-6). No entanto, nenhum destes modelos utilizam um estímulo interno endoteliais para gerar trombo na presença de fluxo de sangue contínuo. A EIM, a partir de estímulo eletrolítica dentro do IVC, promove trombogênese venosa pela ativação endotelial na presença de fluxo sanguíneo (1). É tecnicamente simples, facilmente reprodutível e tem uma elevada taxa de sobrevivência (99%). Apesar do fato de que uma corrente elétrica é usado para criar a eletrólise, o calor não é gerado (1). O modelo simula EIM TVP clínicos e, portanto, serve como uma ferramenta valiosa para estudar os mecanismos intrínsecos de formação de trombos e resolução. O modelo de EIM também é útil para o avanço de novas abordagens terapêuticas contra a doença trombose.

<table border="1"><tbody><tr><th> Nome do reagente </th><th> Companhia </th><th> Número de catálogo </th><th> Comentários (opcional) </th></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> ABCD1234 </td><td></td></tr></tbody></table>

eletrolítico veia cava inferior model (eim) de trombose venosa

Electrolytic Inferior Vena Cava Model (EIM) of Venous Thrombosis

Modelos animais desempenham um papel vital na pesquisa trombose venosa profunda (TVP), a fim de estudar a formação de trombo resolução, trombo e para testar potenciais compostos terapêuticos (1). Novos compostos para serem utilizados no tratamento e prevenção de TVP estão sendo desenvolvidos atualmente. A entrega do potencial antagonista de compostos terapêuticos para uma veia afetada thrombosed tem sido problemática. No contexto de aplicações terapêuticas, um modelo que usa parcial estase e consistente gera trombos dentro de uma veia importante foi recentemente estabelecida. O Eletrolítico veia cava inferior Model (EIM) é o modelo do rato de TVP que permite a formação de trombos na presença de fluxo de sangue contínuo. Este modelo permite que os agentes terapêuticos para estar em contato com o trombo de forma dinâmica, e é mais sensível do que outros modelos de TVP (1). Além disso, este modelo de trombose simula situações clínicas de formação de trombos e é ideal para estudar venosa ativação da célula endotelial, migração de leucócitos, trombogênese venosa, e para testar aplicações terapêuticas (1). O modelo de EIM é tecnicamente simples, facilmente reprodutível, cria tamanhos consistentes trombos e permite uma grande amostra (ie trombo e parede da veia) que é necessário para fins analíticos.

A indução eletrolítico de ativação endotelial na superfície interna da Vena Cava Inferior resultados na formação venosa tipo trombo devido à ativação endotelial e parciais a estagnação do sangue, dois componentes da tríade de Virchow.

Eletrolítico Veia Cava Inferior Model (EIM) de trombose venosa

Modelos animais desempenham um papel vital na pesquisa sobre trombose venosa profunda (TVP), a fim de estudar a formação de trombos, a resolução de trombos e testar potenciais...

O objetivo geral deste procedimento é induzir um trombo venoso em camundongos utilizando um modelo venoso inferior eletrolítico de CVA. Isso é realizado primeiramente abrindo a cavidade abdominal para expor a veia cava inferior ou VCI. Em seguida, os ramos laterais da VCI são ligados.Em seguida, um ânodo e um cátodo são inseridos, e uma ocorrência é aplicada para induzir um trombo. Por fim, o animal é fechado e permitido recuperar-se. Em última análise, podem ser obtidos resultados que mostram um trombo venoso formado dentro da veia cava inferior do camundongo na presença de fluxo sanguíneo e uma correlação entre os níveis de pectina e o tamanho do trombo em diferentes linhagens de camundongos.O Dr. Lucchesi publicou o conceito dessa técnica em 1980 e a utilizou com sucesso no sistema arterial. Quando me juntei ao laboratório da Universidade de Michigan, fui designado para modificar essa técnica original para ser usada no sistema venoso. Durante esse processo, pensei em inserir a agulha próxima à origem da VCI, com base na direção do fluxo.Para induzir trombose venosa profunda em um camundongo, comece por anestesiar o animal em uma câmara de indução pré-operatória com 5% de isoflurano e 100% de oxigênio a uma taxa de 0,5 litros por minuto. Após o camundongo estar sedado, remova-o da câmara de indução, depile o abdômen ventral com uma tesoura elétrica. Em seguida, pese o camundongo.Em seguida, aplique pomada oftálmica e posicione-o em decúbito dorsal sobre uma placa aquecida com circulação de água morna, sob anestesia geral com isoflurano e oxigênio a 100%. Para desinfetar a área da incisão, pulverize o abdômen com solução de clorexidina e limpe com gaze estéril. Repita este procedimento três vezes ou até que o local cirúrgico esteja limpo.Para iniciar a cirurgia, faça uma incisão mediana ventral de dois centímetros com tesoura de íris através da pele e da parede abdominal, expondo a cavidade abdominal. Use uma gaze estéril de dois por dois polegadas embebida em solução salina para desviar os intestinos para o lado esquerdo do animal. Em seguida, fixe um suporte para camundongo no lugar para expor a veia cava inferior ou IVC.A partir deste ponto, utilize um nível de manutenção de 2% de isoflurano e 0,2 litros por minuto de oxigênio. Use um aplicador estéril e pinça de dissecção fina curva em forma de meia-iris para realizar a dissecação romba da fáscia em ambos os lados da VCI, permitindo acesso completo à VCI e seus ramos. Observe que um nódulo linfático está próximo e pode ser usado como ponto de referência para localizar a VCI coddle usando sete suturas de prolina não reativas 7-0.Ligue todos os ramos laterais da VCI das veias renais até a bifurcação ilíaca. Deixe os ramos posteriores abertos. Em seguida, insira uma agulha de aço inoxidável de 25 gauge conectada a um fio de cobre revestido de prata na VCI exposta e posicione-a contra a parede anterior.Este é o ânodo. Em seguida, implante outra agulha com um fio subcutaneamente, completando o circuito. Este é o cátodo.Utilizando um estimulador de onda quadrada S 48 de grama e uma unidade de corrente constante, aplique uma corrente de 250 microamps durante 15 minutos. Isso irá erodir a superfície endotelial da VCI e formar um trombo para controle. Animais. Insira a agulha na VCI durante 15 minutos sem aplicar corrente; mudanças mínimas, como pequenas manchas pretas próximas à agulha, geralmente são observadas durante o procedimento, confirmando o sucesso do procedimento.Após 15 minutos, remova a agulha abaixando-a dorsalmente e permitindo que o sangue reabra a luz da VCI ao redor da agulha, usando um cotonete acima do ponto de entrada da agulha. Pressione a veia ao retirar a agulha. Aplique suavemente pressão com o cotonete até que o sangramento pare.Para fechar o sítio de laparotomia, utilize um fio sintético Vicryl 5-0 em padrão contínuo para fechar a parede abdominal. Em seguida, aplique cola adesiva para fechar a pele. Deixe os camundongos se recuperarem em gaiolas individuais sob uma lâmpada de aquecimento e monitore-os atentamente antes de devolvê-los às suas unidades de alojamento originais.O EIM é um modelo que forma um trombo na presença de fluxo sanguíneo contínuo. As figuras a seguir mostram os parâmetros investigados neste novo modelo aqui. O peso do trombo, que é uma medida do tamanho do trombo, é apresentado em linhagens de camundongos dois dias após o EIM, conforme esperado.O peso do trombo foi menor em camundongos com nulificação do PA I um, os quais são conhecidos por apresentar fibrinólise aumentada e, consequentemente, desenvolver um trombo pequeno, e maior em camundongos hipercoguláveis delta CT utilizando uma pectina solúvel em ELA. Um marcador para trombose venosa profunda foi medido em diferentes linhagens. Os níveis mais baixos foram encontrados em camundongos com nulificação do PI um, enquanto os níveis mais altos foram observados em camundongos hipercoguláveis delta CT.Este gráfico mostra a correlação entre o peso do trombo e a pectina solúvel encontrada em diferentes linhagens de camundongos nos camundongos knockout do PI1, que geraram tamanho de trombo menor. A pectina solúvel detectada foi a mais baixa, enquanto os camundongos delta CT geraram o maior tamanho de trombo e seus níveis de pectina solúvel detectados foram os mais altos. Para demonstrar a presença de fluxo sanguíneo, foi realizada ultrassonografia em camundongos submetidos à EIM.Esta figura mostra os resultados de ultrassonografia de um camundongo dois dias após a EIM. Observe que a forma do trombo sugere que ele foi formado na presença de fluxo durante este procedimento. É importante estar ciente do nosso paciente em todos os momentos.A hipotermia é o fator mais importante que pode afetar gravemente o animal no seu período pós-operatório, comprometendo sua vida e a sua pesquisa.

electrolytic-inferior-vena-cava-model-eim-of-venous-thrombosis

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

O rato modelo estase completa de veia cava inferior trombose produz quantidades mensuráveis ​​de tecido veia parede e trombo. Ele tem se mostrado útil para avaliar as interações entre a parede da veia eo trombo oclusivo e na avaliação da progressão de aguda a inflamação crônica.

Modelo do mouse completa de Stasis Inferior Trombose da veia cava

Descrevemos aqui estenose na veia cava inferior como um modelo murino de trombose venosa profunda. Este modelo recapitula a restrição do fluxo de sangue, um dos principais gatilhos de trombose venosa em seres humanos.

Estenose da veia Cava Inferior: um modelo murino de trombose venosa profunda

O presente protocolo descreve as etapas para obter a trombose venosa, usando um modelo de estase. Além disso, estamos usando um método não-invasivo para medir a formação de trombos e resolução ao longo do tempo.

Trombose venosa profunda induzida por estase em camundongos monitorado por ultra-sonografia de alta frequência

A ecocardiografia intracardíaca (ECI) precisa mostra acurácia significativa na estimativa da estrutura atrial esquerda, um método prospectivo e promissor de estimativa da estrutura cardíaca. Propomos um protocolo de modelagem tridimensional do átrio esquerdo e das veias pulmonares com EIC e remodelamento rápido do cateter de mapeamento anatômico (FAM).

Modelagem Tridimensional do Átrio Esquerdo e das Veias Pulmonares com Abordagem Precisa do Ecocardiograma Intracardíaco

Este artigo tem como objetivo apresentar um método otimizado para avaliação da trombose venosa em modelo de câncer em camundongos, utilizando clipes vasculares para a ligadura venosa. A otimização minimiza a variabilidade nas medidas relacionadas à trombose e aumenta a relevância para a trombose venosa associada ao câncer humano.

Ensaio de Trombose Venosa em Modelo de Câncer em Camundongos

O protocolo apresenta um modelo de roedor de sobrevivência para testar intervenções com balão de venoplastia (VB) em veias profundas não trombóticas, trombóticas e pós-trombóticas.

Modelo de balão de venoplastia de veia cava inferior de roedores

Este estudo apresenta um protocolo para estabelecer um modelo reprodutível e minimamente invasivo em rato da trombose do seio sagital superior induzida por cloreto férrico, utilizando um método de sutura de seda em combinação com imagem de contraste de manchas a laser e ultrassom de alta resolução para avaliação.

Estabelecimento de uma trombose do seio sagital superior induzida por cloreto férrico modificado

Uma técnica para a criação otimizada microcirúrgica dos aneurismas da bifurcação arterial imitando bifurcação humana aneurismas cerebrais é descrita. Uma bolsa venosa é suturada em uma bifurcação criadas artificialmente verdadeiro de ambas as artérias carótida comum. Técnicas microcirúrgicas facilitado e anticoagulação pós-operatória agressiva e analgesia levar a taxas de morbidade minimizados e bons índices de permeabilidade aneurisma.

Microcirúrgica venoso Bolsa Bifurcação Arterial-aneurismas no Modelo de Coelho: Aspectos Técnicos

Para melhorar o nosso conhecimento da formação neotissue celular e molecular, um modelo murino da TEVG foi recentemente desenvolvida. Os enxertos foram implantados como infra-enxertos na veia cava de interposição em camundongos C57BL / 6. Este modelo consegue resultados semelhantes aos obtidos em nossa investigação clínica, mas ao longo de um curso de tempo muito reduzido.

Implantação de Veia Cava Inferior interposição de enxerto no Rato Modelo

O cancro é uma doença complexa que é influenciada pelo tecido circundante do tumor, bem como pro- local e anti-inflamatórias mediadores. Portanto, os modelos de injeção ortotrópicas, ao invés de modelos subcutâneos pode ser útil para estudar a progressão do câncer de uma forma que melhor mimetiza patologia humana.

Injeção Orthotopic de células cancerosas da mama na mamária Fat Pad de Ratos para o Estudo de crescimento tumoral.

Aprenda a induzir trombose venosa em camundongos usando o modelo eletrolítico de veia cava inferior. Este método permite estudar a formação de trombos em fluxo sanguíneo contínuo e investigar correlações com marcadores bioquímicos.

Eletrolítico Veia Cava Inferior Model (EIM) de trombose venosa

Explorar mais vídeos