Modelo do rato de Oclusão da Artéria Cerebral Média
13 de fevereiro de 2011
Demonstramos no vídeo um método para produzir uma oclusão da artéria cerebral média em ratos adultos utilizando um monofilamento intraluminal. Também mostramos como avaliar a extensão do infarto cerebral por 2,3,5-trifeniltetrazólio cloreto de coloração (TTC).
Olá, meu nome é Terrence Jam. Meu nome é Hai Joe. Hoje mostraremos como realizar um modelo de camundongo de oclusão da artéria al média.
Então vamos começar. Este experimento começa com a preparação da sutura. Comece cortando a sutura em pedaços de 20 milímetros.
Em seguida, arredonde a ponta trazendo a sutura em direção a um cauterizador. Em seguida, meça a ponta da sutura. Agora estamos prontos para começar a cirurgia com a máscara colocada nas costas.
Faça uma incisão ao longo da linha média. Use uma pinça para expor o ECA. A artéria carótida externa ao longo da ECA são muitos ramos.
Um desses ramos é o STA, a artéria tireóidea superior. O STA precisa ser coagulado com pinça bipolar. Em seguida, o STA precisa ser cortado para permitir que o ECA seja melhor isolado.
Em seguida, o ECA é coagulado e em tamanho o mais longe possível do CCA. Neste ponto, você pode querer isolar o ECA para melhor acesso. Em seguida, amarre frouxamente duas suturas ao redor do ECAA com alguns milímetros de distância.
Aplicar a pinça na ramificação do CCA para ECA e ICA. Em seguida, corte a ponta do toco ECA. Em seguida, reposicione o ECA para alinhá-lo com o ICA.
Isso permite que a sutura tenha entrada contínua do ECA para o ICA. Meça o comprimento total da sutura antes da inserção. Insira a sutura na abertura feita cortando o coto ECA.
À medida que a sutura passa pelo nó distal, prenda o nó apertando-o. Em seguida, remova a pinça e insira a sutura ainda mais no ECA. À medida que a sutura passa pelo nó proximal, prenda o nó apertando-o.
Depois de prender os dois nós, insira cuidadosamente a sutura ao longo da artéria até que nove a 10 milímetros de sutura sejam passados. O ponto de bifurcação, isso pode ser feito subtraindo o comprimento da sutura até o ponto de bifurcação do comprimento total da sutura. À medida que a sutura atinge a origem da MCA.
O MCA está ocluído. Após 24 horas, as massas se sacrificam e o cérebro isolado. Para a coloração TTC, o cérebro isolado é colocado em um molde e cortado com uma lâmina de barbear.
Em seguida, o cérebro é colocado em 2% TTC por 20 minutos em temperatura ambiente. Finalmente, o cérebro é fixo, da noite para o dia e neutro. Formina tamponada.
A preparação da sutura é um processo delicado. Aqui estão algumas dicas úteis. Posicione a sutura e o cauterizador assim.
Em seguida, mantendo o cauterizador parado, aproxime lentamente a sutura. Em seguida, meça a sutura para garantir que seja do tamanho certo. O tamanho da sutura que usamos neste experimento é de cerca de 0,21 a 0,22 milímetros.
Para iniciar a cirurgia, coloque a máscara nas costas e induza a anestesia com 30% de oxigênio e 70% de nitrogênio. Faça uma incisão ao longo da linha média e, em seguida, aplique afastadores para abrir o acesso à área. Deve ficar assim.
Separe o tecido com a pinça cuidadosamente. Em seguida, exponha e isole o ECA com a pinça no processo de isolamento do ECA, o STA precisa ser coagulado e cortado. Isso permite que uma parte mais longa do ECA seja isolada.
Em seguida, o ECA precisa ser coagulado com a ajuda de uma pinça bipolar Após a coagulação, o ECA precisa ser cortado. Em seguida, isole o ECA e amarre duas suturas frouxamente ao redor do ECAA a alguns milímetros de distância. O resultado deve ser mais ou menos assim.
Agora aplique o grampo na bifurcação do CCA para ICA e ECA. Certifique-se de que o molusco obstrua completamente o fluxo sanguíneo para o ECA. Em seguida, corte a extremidade do toco ECA.
Meça a sutura Antes da inserção, após uma abertura é feita no ECA. Insira a sutura e a abertura além do nó distal. Depois que a sutura passar o nó distal, aperte o nó.
Em seguida, remova o clamp. Depois de verificar se o nó distal está seguro, insira a sutura mais ao longo do ECA após o nó proximal. Em seguida, aperte o nó proximal.
Agora insira cuidadosamente a sutura ao longo do ECA no ICA. Continue inserindo a sutura ao longo da ACI até nove a 10 milímetros em que a sutura passe do ponto de bifurcação. Isso pode ser feito subtraindo o comprimento da sutura até o ponto de bifurcação do comprimento total da sutura.
Em seguida, apare a sutura de forma que não machuque o tecido circundante. Em seguida, suture a incisão e permita que o rato se recupere. Prepare-se para a coloração TTC 24 horas após a cirurgia.
Comece sacrificando o mouse com luxação cervical. Em seguida, isole o cérebro do crânio e coloque-o em um molde. Em seguida, corte com lâmina de barbear, core o cérebro em 2% TTC por 20 minutos em temperatura ambiente.
Em seguida, fixe durante a noite e 10% neutro tamponado para melina. Então é isso. Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.
Visão Geral
Este artigo demonstra o modelo de filamento intraluminal de oclusão da artéria cerebral média (MCAO) em camundongos, uma técnica amplamente utilizada para simular isquemia cerebral focal. O protocolo detalha os passos cirúrgicos para induzir acidente vascular cerebral isquêmico e a avaliação subsequente do tamanho do infarto utilizando coloração por cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazólio (TTC).
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Neurociência
- Pesquisa em acidente vascular cerebral
- Neurologia experimental
Antecedentes
- O acidente vascular cerebral é uma das principais causas de morte e incapacidade, sendo o acidente vascular isquêmico responsável pela maioria dos casos.
- A região da artéria cerebral média (ACM) é a mais frequentemente afetada nos acidentes vasculares isquêmicos.
- Modelos animais, particularmente em roedores, são essenciais para o estudo dos mecanismos do acidente vascular cerebral e de terapias potenciais.
- O modelo de oclusão da ACM por filamento intraluminal permite a indução reprodutível de isquemia cerebral focal sem necessidade de craniectomia.
Objetivo do Estudo
- Fornecer um protocolo passo a passo para induzir MCAO em camundongos.
- Demonstrar o preparo e a inserção do filamento cirúrgico para oclusão da MCA.
- Mostrar o processo de avaliação da infarto cerebral utilizando coloração com TTC.
Métodos Utilizados
- Preparação de um fio cirúrgico (monofilamento) com ponta arredondada.
- Exposição cirúrgica e isolamento da artéria carótida externa (ECA) e seus ramos.
- Inserção do filamento através da ECA até a artéria carótida interna (ICA) para ocluir a ACM.
- Avaliação do tamanho do infarto mediante corte do cérebro e coloração com TTC 2%.
Resultados Principais
- A oclusão bem-sucedida da ACM é alcançada avançando o filamento 9–10 mm além da bifurcação carotídea.
- Após 24 horas, o tecido cerebral infartado pode ser visualizado e quantificado utilizando coloração com TTC.
- O protocolo permite a indução reprodutível de isquemia cerebral focal em camundongos.
- A técnica evita a necessidade de craniectomia, reduzindo a complexidade cirúrgica e fatores de confusão potenciais.
Conclusões
- O modelo de ACO por filamento intraluminal é um método confiável para estudar o acidente vascular cerebral isquêmico em camundongos.
- A coloração com TTC fornece uma abordagem simples para avaliar o tamanho do infarto após a oclusão.
- Este protocolo facilita a pesquisa sobre a fisiopatologia do acidente vascular cerebral e intervenções terapêuticas.
Perguntas Frequentes
Relevância Executiva para a Indústria
O modelo murino de oclusão da artéria cerebral média (MCAO) fornece uma plataforma robusta e reprodutível para avaliar mecanismos de acidente vascular cerebral isquêmico e possíveis intervenções terapêuticas em pesquisas pré-clínicas. Este modelo permite a avaliação quantitativa do tamanho do infarto e sustenta a continuidade translacional desde a descoberta inicial até a validação pré-clínica. Sua ampla adoção em pesquisa e desenvolvimento na neurociência reflete seu valor para desvio de risco mecanicista e confiança preditiva na validação de alvos cerebrovasculares.
Aplicações Estratégicas em P&D de Biotecnologia e Farmacêutica
Descoberta Inicial e Validação de Alvo
- Permite a investigação de vias de lesão cerebrovascular relevantes para o acidente vascular cerebral isquêmico.
- Apóia a validação funcional de alvos neuroprotetores em um sistema relevante para a doença.
- Facilita a desmistificação mecanicista ao modelar eventos isquêmicos permanentes e transitórios.
- Oferece pontos finais quantitativos para triagem de alvos orientada por hipóteses.
Desenvolvimento de Triagem e Ensaio
- Estabelece um sistema in vivo validado para avaliar a eficácia de compostos candidatos na redução do tamanho do infarto.
- Padroniza a avaliação por meio da coloração com TTC, permitindo leituras reproduzíveis e quantitativas.
- Prepara um fluxo de trabalho escalonável para triagem de agentes neuroprotetores em um contexto isquêmico controlado.
- Permite comparação confiável dos efeitos de intervenções entre coortes experimentais.
Pesquisa Translacional e Pré-clínica
- Alinha-se à patologia do acidente vascular cerebral humano ao direcionar a área da artéria cerebral média, aumentando a relevância translacional.
- Apoia a descoberta e validação de biomarcadores por meio de medidas quantificáveis de infarto.
- Facilita o avanço ajustado ao risco de estratégias neuroprotetoras para estudos de fases posteriores.
- Proporciona continuidade desde a descoberta mecanicista até a avaliação de eficácia pré-clínica.
Integração de Pipeline e Fluxo de Trabalho
Este modelo de OACM integra a descoberta inicial, a identificação de compostos promissores e a validação pré-clínica de alvos e intervenções cerebrovasculares.
- Biologia da Descoberta: Permite testar hipóteses e esclarecer vias em modelos de acidente vascular cerebral isquêmico.
- Triagem: Fornece medidas reprodutíveis e quantitativas do tamanho do infarto para avaliação de compostos.
- Análises: Oferece resultados padronizados da coloração com TTC para análise estatística comparativa entre condições.
- Pesquisa Translacional: Mantém a relevância para a doença e apoia o alinhamento de biomarcadores em estudos pré-clínicos.
- Reutilização Empresarial: Funciona como uma plataforma reutilizável para diversas pesquisas neurovasculares e triagem terapêutica.
Impacto Operacional e Empresarial
- Valor Científico: Aumenta a confiança preditiva e reduz a ambiguidade mecanicista na pesquisa de acidente vascular cerebral.
- Valor Operacional: Promove padronização, reprodutibilidade e escalabilidade em fluxos de trabalho pré-clínicos.
- Valor Estratégico: Orienta decisões de prosseguir/não prosseguir e melhora a eficiência do capital ao fornecer dados robustos de eficácia.
- Impacto no Portfólio: Apoia a priorização e o avanço ajustados ao risco de candidatos neuroprotetores.
Considerações de Implementação
- Exige experiência cirúrgica em oclusão vascular e manejo de animais.
- Requer acesso a instrumentação precisa para preparação de suturas e corte cerebral.
- Exige padronização entre equipes dos protocolos de coloração com TTC e quantificação de infarto.
- Adaptável a modelos de oclusão permanente e transitória, ampliando sua utilidade em pesquisas.
- As limitações potenciais incluem variabilidade no tamanho do infarto e complexidade técnica do procedimento.
