Name: עכבר דגם ספיגה התיכון עורק מוחי (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-13T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 43 s
Description: למד את מודל ספיגת עורק המוח האמצעי בעכברים באמצעות חוט תוך-לומינלי ללא קרניוטומיה. שיטה זו מאפשרת הדמיה של שבץ מוחי איסכמי ומדידת גודל האינפארקט בצביעת TTC.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

עבודה זו נתמכה על ידי NIH NS057195 מענק, פרס reac קליפורניה בסן פרנסיסקו, ו קנט סטייט הזנק קרן WH צ&#39;ו.

<html> 1. שיטת MCAO פרוטוקול זה אושר על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדיים וועדות השתמש באוניברסיטת קליפורניה בסן פרנסיסקו ו קנט סטייט, ולאחר פועלת לפי המכון הלאומי לבריאות הנחיות לשימוש בחיות מעבדה. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גזור תפר 5-0 monofilament (הרווארד Apparatus, Holliston, MA) לתוך 20 קטעים מ&quot;מ. סיבוב קצה של כל פלח ידי חימום זה ליד cauterizer (Braintree Scientific, Inc, Braintree, MA). מדוד את הקוטר של קצה באמצעות מיקרומטר (יישומי Image Inc, רוצ&#39;סטר, ניו יורק). אנו משתמשים תפר בקוטר קצה הסופי של 0.21-0.22 מ&quot;מ עבור עכבר עם משקל גוף של 25-30 גרם </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעקר את כל כלי הניתוח על ידי מעוקר (מינימום 121 ° C, 15 PSI, במשך 15 דקות). לטהר את שולחן הניתוח וציוד נלווה באמצעות אתנול 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי 8-12 בן שבוע העכבר (25-30 גרם) עם 5% isoflurane (Aerrane, בקסטר, Deerfield, IL) ב 30% O 2 / 70% N 2 O באמצעות מערכת ה-V-10 הרדמה (VetEquip, Inc ., Pleasanton, CA). בעקבות אינדוקציה של הרדמה, להפחית את רמת isoflurane ולתחזק אותו 1.5%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר בעמדת פרקדן על משטח חימום. הכנס בדיקה רקטלית, לפקח ולשמור על טמפרטורת הגוף בין 36.5-37.5 מעלות צלזיוס באמצעות TR-200 המערכת טמפרטורה homeothermic (Fine המדע כלים בע&quot;מ, פוסטר סיטי, קליפורניה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לגלח את הפרווה שעל באזור הצוואר הגחון עם קוצץ חשמלי (Braintree Scientific) כדי לחשוף את העור. לחטא את האתר כירורגית באמצעות שלושה יישומים של אתנול 70%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תחת מיקרוסקופ לנתח סטריאו (ניקון, יפן), לעשות 1 ס&quot;מ חתך קו האמצע ארוך על הצוואר. השתמש retractors (Braintree Scientific) כדי לחשוף את שדה הניתוח ולזהות את עורק התרדמה המשותף הימני (CCA), חיצוני העורק הראשי (ECA), ו פנימי העורק הראשי (רשפ&quot;ת). בזהירות לנתח את העורקים ללא שמסביב עצבים fascia. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנתחים את ECA נוסף distally ו להקריש ECA ו עורק התריס מעולה (STA) הסניף באמצעות coagulator דו קוטבית (הווארד כלי Inc, Tuscaloosa, א.ל.). חותכים את ECA ו STA בכל מגזר קרוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Loosely קושרים שתי 8-0 תפרים משי סביב הגדם ECA. החל מהדק וסקולרית (כלי מדעי פיין) בשעה הסתעפות של המרכז לאמנות עכשווית לתוך ECA ו ICA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך קטן בסוף ECA גדם עם Vannas בסגנון מספריים באביב (כלים המדע פיין). מדוד ורשום את אורך תפר 5-0 monofilament מעוגלים בקצה. הכנס את תפר את החתך ולהתקדם מהדק. הדקו את שני התפרים משי סביב לומן מספיק כדי לאבטח עדיין לשמר הניידות של תפר ב-המגורים monofilament. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הסר את מהדק מ הסתעפות. בעדינות לקדם את תפר monofilament מ לומן של ECA לתוך ICA למרחק של 9-10 מ&quot;מ מעבר הסתעפות של המרכז לאמנות עכשווית כדי לחסום את המקור של MCA. משך הניתוח הוא כ - 30-45 דקות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפר את החתך על הצוואר במקום עכבר בתיבת 35 ° C סיעוד להתאושש מן ההרדמה, ולהחזיר אותו לכלוב. זה בדרך כלל לוקח 50-10 דקות עבור העכברים כדי להתאושש מן ההרדמה. כדי לבצע MCAO חולף, החוקר יכול להרדים מחדש את העכבר למשוך את תפר בחזרה גדם של ECA לאחר תקופה מסוימת, בדרך כלל בין 0.5-2 ח </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> עשרים וארבע שעות לאחר גיוס של MCAO, להרדים את העכבר עם 5% ו isoflurane להרדים אותו על ידי נקע בצוואר הרחם. לערוף את העכבר לאסוף את המוח. פורסים את המוח coronally לארבע פרוסות 2 מ&quot;מ עם מטריצה ​​המוח (Braintree Scientific) על קרח. דגירה את פרוסות המוח 2% 2,3,5-triphenyltetrazolium כלוריד (TTC) (סיגמא אולדריץ &#39;) ב 1X PBS עבור 20 דקות בטמפרטורת החדר, כדי לקבוע את הגודל וההיקף של אוטם. תקן את פרוסות המוח ב -10% ניטרלית שנאגרו פתרון פורמלין (סיגמא אולדריץ &#39;) בשעה 4 ° C עד הדמיה. היקף אוטם ניתן לכמת כמתואר יופיטר פרוטוקול 955 ( <a href="https://www.jove.com/index/Details.stp?ID=955">https://www.jove.com/index/Details.stp?ID=955</a> ) 9. </li></ol> 2. נציג תוצאות אוטמים שנוצר על ידי MCAO נראים בסטריאטום ואת קליפת דורסולטרלי. הסטריאטום הוא רגיש יותר לאיסכמיה מאשר בקליפת המוח. שלושים דקות של MCAO יפיק האוטם רק בסטריאטום, בעוד יותר משעה של MCAO יפגע הן הסטריאטום ואת קליפת המוח. לאחר 24 שעות MCAO קבוע, אחוז האוטם הכולל הוא ~ 40 ± 5% בחצי הכדור ואת שיעור התמותה לאחר הניתוח הוא ~ 10%. אנו לא כוללים עכברים ממחקרים נוספים אם דימום יתר מתרחשת במהלך הניתוח, את זמן הניתוח עולה על 90 דקות, עכברים מצליחים להתאושש מן ההרדמה בתוך 15 דקות, או דימום נמצא את פרוסות המוח או בבסיס המעגל של ויליס במהלך הבדיקה שלאחר המוות . 61/2761fig1.jpg &quot;alt =&quot; איור 1 &quot;/&gt; באיור 1. נציג תמונות של TTC מוכתם פרוסות המוח (רמת העטרה 1-4) לאחר 24 שעות של MCAO קבע. בכל רקמה חיה TTC הוא מופחת על ידי enzymatically dehydrogenases ל 1,3,5-triphenylformazan (TPF), שבו הוא בצבע אדום, ואילו באזורים נמקי הוא נשאר לבן בשל היעדר הפעילות האנזימטית כאלה. לכן, בתחום של אוטם ניתן לזהות לפי צבע לבן שלה בשל חוסר ההמרה של TTC כדי TPF. הערה: TTC הוא חום מעט אור לא יציב כל כך להגן על החלקים המוכתמים מהחום והאור כמה שיותר.

<ol><li>Howard, G., Howard, V. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aHoward%2C+G+%22Distribution+of+stroke%3A+hetrogeneity+of+stroke+by+age%2C+and+sex%22">Distribution of stroke: hetrogeneity of stroke by age, and sex</a>. , Elsevier Inc. New York. 3-12 (2004).</li>
<li>Thom, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics--2006+update%3A+a+report+from+the+American+Heart+Association+Statistics+Committee+and+Stroke+Statistics+Subcommittee%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics--2006 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee.</a> Circulation. 113, e85-e151 (2006).</li>
<li>Mohr, J. P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMohr%2C+JP+%22Middle+cerebral+artery+disease%22">Middle cerebral artery disease</a>. , Elsevier Inc. New York. 123-166 (2004).</li>
<li>Longa, E. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20, 84-91 (1989).</li>
<li>Chou, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+protein+kinase+Cdelta+as+a+mediator+of+stroke-reperfusion+injury%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Neutrophil protein kinase Cdelta as a mediator of stroke-reperfusion injury.</a> J. Clin. Invest. 114, 49-56 (2004).</li>
<li>Hudgins, W. R., Garcia, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+electrocautery%2C+atmospheric+exposure%2C+and+surgical+retraction+on+the+permeability+of+the+blood-brain-barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">The effect of electrocautery, atmospheric exposure, and surgical retraction on the permeability of the blood-brain-barrier.</a> Stroke. 1, 375-380 (1970).</li>
<li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+of+focal+stroke%3A+size%2C+mechanism%2C+and+purpose%5BTitle%5D)+AND+%22NeuroRx%22%5BJournal%5D)">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx. 2, 396-409 (2005).</li>
<li>Durukan, A., Tatlisumak, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+ischemic+stroke%3A+overview+of+major+experimental+rodent+models%2C+pathophysiology%2C+and+therapy+of+focal+cerebral+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol.+Biochem.+Behav%22%5BJournal%5D)">Acute ischemic stroke: overview of major experimental rodent models, pathophysiology, and therapy of focal cerebral ischemia.</a> Pharmacol. Biochem. Behav. 87, 179-197 (2007).</li>
<li>Taniguchi, H., Andreasson, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hypoxic-ischemic+encephalopathy+model+of+perinatal+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">The hypoxic-ischemic encephalopathy model of perinatal ischemia.</a> J Vis Exp. , (2008).</li>
</ol>

אין לנו שום אינטרסים מנוגדים פוטנציאל לחשוף.

MCAO בעכברים נפוץ מודל איסכמיה מוקד בבני אדם. שימוש בעכברים ללימודי שבץ הפכה שכיחה יותר בגלל הזמינות של זנים מהונדס ו בנוקאאוט. ישנם כמה פרטים קריטיים לציין בפרוטוקול: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זה חיוני כדי לשמור על טמפרטורת הגוף עכבר במהלך הניתוח ולפני זה לגמרי מתאושש מן ההרדמה. טמפרטורת הגוף יש השפעות על היקף של אוטם: ירידות היפותרמיה ו היפרתרמיה מגבירה את גודל האוטם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בעוד לחשוף לבודד את המרכז לאמנות עכשווית ו ECA, למנוע נזק העצב התועה סמוך לקנה הנשימה, מה שיכול להגדיל את גודל האוטם ואת הכדאיות ירידה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעולם לא להכניס את תפר monofilament יותר מ -10 מ&quot;מ להעביר את הסתעפות. תפר מוכנס מדי יכולים לנקב את עורק מוחי כתוצאה הקדמי וגם דימום מוחי. התנגדות ניתן לחוש כאשר תפר מתקדמת על 9-10 מ&quot;מ מעבר לנקודת הסתעפות. במקרה זה, החוקר צריך להפסיק לקדם את תפר ולאשר את המרחק. </li></ol>

<table><tbody><tr><td>Isoflurane</td><td>כימיקליות</td><td>Baxter Internationl Inc.</td><td>95045-588</td><td></td></tr><tr><td>מערכת הרדמה V-10</td><td>ציוד</td><td>VetEquip</td><td>901807</td><td></td></tr><tr><td>בקר טמפרטורה TR-200</td><td>ציוד</td><td>Fine Science Tools</td><td>21060</td><td></td></tr><tr><td>מכונת גילוח חשמלית</td><td>ציוד</td><td>Braintree Scientific, Inc.</td><td>CLP-9931</td><td></td></tr><tr><td>מיקרוסקופ דיסקציה</td><td>ציוד</td><td>Nikon Instruments</td><td>SMZ745T</td><td></td></tr><tr><td>מערכת רטראקטורים</td><td>ציוד</td><td>Braintree Scientific, Inc.</td><td>ACD-014</td><td></td></tr><tr><td>קוואגולטור ביפולרי</td><td>ציוד</td><td>Howard Instrument</td><td>64000</td><td></td></tr><tr><td>חוט תפירה ממשי (Silk)</td><td>חומר</td><td>Harvard Apparatus</td><td>510479</td><td></td></tr><tr><td>חוט תפירה מונופילמנט</td><td>חומר</td><td>Harvard Apparatus</td><td>723351</td><td></td></tr><tr><td>תפסנית כלי דם</td><td>ציוד</td><td>Fine Science Tools</td><td>00396-01</td><td></td></tr><tr><td>מספרי ואנאס (Vannas)</td><td>ציוד</td><td>Fine Science Tools</td><td>15000-08</td><td></td></tr><tr><td>מטריצת מוח</td><td>ציוד</td><td>Braintree Scientific, Inc.</td><td>BS-2000C</td><td></td></tr><tr><td>2,3,5-triphenyltetrazolium chloride</td><td>כימיקליות</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8877</td><td></td></tr><tr><td>פורמלין עם באפר ניטרלי 10%</td><td>כימיקליות</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT5011</td><td></td></tr></tbody></table>

עכבר דגם ספיגה התיכון עורק מוחי

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

שבץ היא מחלה נוירולוגית קטלנית הנפוצה ביותר בארצות הברית 1. רוב מקרי השבץ (88%) כתוצאה חסימה של כלי דם במוח (שבץ איסכמי) 2. מאז שבץ איסכמי ביותר (~ 80%) מתרחשות בשטח של עורק המוח האמצעי (MCA) 3, במודלים של בעלי חיים רבים שבץ שפותחו התמקדו עורק זה. המודל monofilament intraluminal של חסימת עורק המוח האמצעי (MCAO) כרוכה החדרת נימה כירורגית לתוך עורק הצוואר חיצוני להשחיל אותו קדימה לעורק התרדמה הפנימי (רשפ&quot;ת) עד קצה חוסם את מקורם של MCA, וכתוצאה מכך הפסקת זרימת הדם לבין אוטם מוחי לאחר מכן ב 4 השטח MCA. הטכניקה יכולה לשמש מודל חסימה קבועה או חולפת 5. אם תפר יוסר לאחר פסק זמן מסוים (30 דקות, 1 שעות, או 2 ח), reperfusion מושגת (MCAO חולף); אם הסיב נשאר במקומו (24 שעות) בהליך מתאים כמודל MCAO קבע . טכניקה זו אינה דורשת craniectomy, הליך נוירוכירורגי להסיר חלק בגולגולת, אשר עשויים להשפיע על לחץ תוך גולגולתי והטמפרטורה 6. זה הפך את השיטה הנפוצות ביותר בשימוש לחקות קבע חולף איסכמיה מוחית מוקד חולדות ועכברים 7,8. כדי להעריך את מידת אוטם מוחי, אנו כתם פרוסות המוח עם כלוריד 2,3,5-triphenyltetrazolium (TTC) כדי לזהות רקמות מוח איסכמי 9. בסרטון הזה, אנחנו מדגימים את השיטה MCAO וקביעת גודל האוטם על ידי מכתים TTC.

אנו מדגימים את הוידאו שיטה לייצור באמצע חסימה בעורק המוח בעכברים בוגרים באמצעות monofilament intraluminal. כמו כן, אנו מראים כיצד להעריך את מידת אוטם מוחי על ידי מכתים 2,3,5-triphenyltetrazolium כלוריד (TTC).

שבץ מוחי הוא המחלה הנוירולוגית הקטלנית הנפוצה ביותר בארצות הברית 1. מרבית מקרי השבץ (88%) נובעים מחסימה של כלי דם ב...

שלום, שמי טרנס ג'ם. שמי היי ג'ו. היום נראה לכם כיצד לבצע מודל עכביש של חסימה של העורק המוחה האמצעי (middle cerebral artery occlusion).אם כן, בואו נתחיל. ניסוי זה פותח בהכנת התפר. התחילו בחיתוך התפר לקטעים של 20 millimeter.בשלב הבא, גולגלו את הקצה על ידי הבאת התפר לכיוון מכשיר כוויה. לאחר מכן, מדדו את קצה התפר. כעת אנו מוכנים להתחיל בניתוח כאשר המסכה מונחת על גבB.בצעו חתך לאורך קו האמצע. השתמשו בפינצטה כדי לחשוף את ה-ECA. לעורק הקרוטיד החיצוני לאורך ה-ECA ישנם ענפים רבים.אחד מענפים אלה הוא ה-STA, העורק התיירואידי העליון. יש לצרוב את ה-STA באמצעות פינצטה ביפולרית. לאחר מכן, יש לחתוך את ה-STA כדי לאפשר בידוד טוב יותר של ה-ECA.בשלב הבא, מקריעים את ה-ECA ובמרחק רב ככל האפשר מה-CCA. בנקודה זו, ייתכן שתרצו לבודד את ה-ECA כדי להשיג גישה טובה יותר. לאחר מכן, קשרו באופן רפוי שתי תפרים סביב ה-ECA במרחק של מספר מילימטרים זה מזה.הניחו את התסמין בנקודת הפיצול של ה-CCA ל-ECA ול-ICA. לאחר מכן, עברו לקליפ את קצה השארית של ה-ECA. בשלב הבא, מצעו מחדש את ה-ECA כדי ליישר אותו עם ה-ICA.פעולה זו מאפשרת לתפר לעבור באופן רציף מה-ECA אל ה-ICA. מדדו את האורך הכולל של התפר לפני ההחדרה. הדרימו את התפר אל תוך הפתח שנוצר על ידי קליפסה של נשער ה-ECA.כאשר התפר עובר את הקשר הדיסטלי, אבטחו את הקשר על ידי הידוקו. לאחר מכן, הסירו את התפס והחדירו את התפר הלאה אל תוך ה-ECA. כאשר התפר עובר את הקשר הפרוקסימלי, אבטחו את הקשר על ידי הידוקו.לאחר הידוק שני הקשרים, הכניסו בזהירות את התפר לאורך העורק עד שיהיו מושחלים 9 עד 10 מילימטרים מהתפר. את נקודת הפיצול, ניתן לעשות זאת על ידי חיסור אורך התפר עד לנקודת הפיצול מאורך התפר הכולל. כאשר התפר מגיע למקור של ה-MCA.עורכי חסימה של ה-MCA. לאחר 24 שעות, העכברים מוקרבים והמוח מבודד. לצורך צביעת TTC, המוח המבודד מוצב בתבנית ונחתך בעזרת להב תער.לאחר מכן, המוח מושם ב-2%TTC למשך 20 דקות בטמפרטורת החדר. לבסוף, המוח מקובע למשך לילה בפורמלין בבופר ניטרלי.הכנת התפר היא תהליך עדין. להלן מספר טיפים מועילים. מקמו את התפר ואת מכשיר הצריבה באופן זה.לאחר מכן, תוך השארת המכשיר לצריבה במקום, קרבו את התפר לאט. בשלב הבא, מדדו את התפר כדי לוודא שהוא בגודל הנכון. גודל התפר שבו אנו משתמשים בניסוי זה הוא כ-0.21 עד 0.22 Millimeters.כדי להתחיל בניתוח, הנח את המסכה על גבה והרדם באמצעות 30% oxygen ו-70% nitrogen. בצע חתך לאורך קו האמצע ולאחר מכן השתמש במרחיבים (retractors) כדי לפתוח גישה לאזור. זה אמור להיראות כך.הפרידו את הרקמה בזהירות באמצעות הפינצטה. לאחר מכן, חשפו ובדדו את ה-ECA בעזרת הפינצטה; בתהליך בידוד ה-ECA, יש לצרוב ולחתוך את ה-STA. פעולה זו מאפשרת לבודד מקטע ארוך יותר של ה-ECA.בשלב הבא, יש לצרוב את ה-ECA בעזרת פינצטה ביפולרית. לאחר הצריבה, יש לחתוך את ה-ECA. לאחר מכן, יש לבודד את ה-ECA ולקשור שתי תפרים באופן רפוי סביב ה-ECA במרחק של מספר מילימטרים זה מזה. התוצאה צריכה להיראות בערך כך.כעת יש להחיל את התפסן בפיצול של ה-CCA ל-ICA ול-ECA. ודאו שהתפסן חוסם לחלוטין את זרימת הדם ל-ECA. לאחר מכן, סגרו בעזרת קליפ את קצה השארית של ה-ECA.מדוד את התפר לפני ההחדרה, לאחר שבוצע פתח ב-ECA. החדש את התפר ואת הפתח מעבר לקשר הדיסטלי. לאחר שהתפר עבר את הקשר הדיסטלי, הדק את הקשר.בשלב הבא, הסר את התפסן. לאחר וידוא שהקשר הדיסטלי (Distal) מהודק, הכנס את התפר להמשך ה-ECA, מעבר לקשר הפרוקסימלי (proximal). לאחר מכן, הדק את הקשר הפרוקסימלי.כעת הכניסו בזהירות את התפר לאורך ה-ECA אל תוך ה-ICA. המשיכו להכניס את התפר לאורך ה-ICA עד ש-9 עד 10 מילימטרים מהתפר יעברו את נקודת הפיצול (bifurcation point). ניתן לעשות זאת על ידי חיסור אורך התפר עד לנקודת הפיצול מאורך התפר הכולל.בשלב הבא, קצצ את התפר כך שלא יפגע ברקמה הסובבת. לאחר מכן, תפר את החתך ואפשר לעכבר להתאושש. התכונן לצביעת TTC כ-24 שעות לאחר הניתוח.יש להתחיל בהטהרה של העכבר באמצעות פריקה צווארית. לאחר מכן, יש לבודד את המוח מהגולגולת ולהניחו בתבנית. לאחר מכן, יש לחתוך את המוח בעזרת להב תער, ולצבוע את המוח ב-2%TTC למשך 20 דקות בטמפרטורת החדר.לאחר מכן קבעו למשך הלילה וב-10% neutral buffered עבור melin. זהו כל הפרוצדורה. תודה שצפיתם ובהצלחה בניסויים שלכם.

mouse-model-of-middle-cerebral-artery-occlusion

Research

JoVE Journal

Medicine

רפואה

פילמנטיות חסימה של עורק המוח התיכון הוא מודל משותף לחקר שבץ איסכמי בעכברים.

דוגמנות שבץ בעכברים - העורקים התיכון ספיגה מוחין עם דגם נימה

עורק המוח האמצעי intraluminal חסימה (MCAO) מודל הוא מודל בשימוש השכיח ביותר בקרב מודלים ניסיוניים שבץ איסכמי. להלן נדגים את המודל כולו בפירוט עם מדריך של flowmetry לייזר דופלר, והתוצאות מי מטעמה.

Intraluminal העורקים התיכון מוחין ספיגה (MCAO) מודל שבץ איסכמי עם הדרכה דופלר Flowmetry לייזר עכברים

מודל intraluminal המוח האמצעי, החסימה בעכברים מוצג במסמך זה. ההיקף אוטם מוחית מחושב על ידי ציון נוירולוגים וכתמים סגולים cresyl, מכתים חלופה לTTC, להציע את היתרון הגדול לבדיקה בסמני ריבית רבים במקביל.

מודל עכבר של MCAO intraluminal: הערכת אוטם מוחית על ידי כתמים סגולים Cresyl

מקור: Lee, S. E., et al. הערכת ההשפעות הנוירו-פרוטקטיביות של תמצית Glycyrrhizae Radix et Rhizoma באמצעות מודל עכבר חולף של חסימת עורק המוח האמצעי. J. Vis. Exp. (2018)סרטון זה מדגים את ההליך להערכת ההשפעה הנוירו-פרוטקטיבית של תרכובת בדיקה במודל עכבר חסימת עורק המוח האמצעי. התרכובת נכנסת למוח, מונעת מוות עצבי ומפחיתה את נפח האוטם, ומאשרת את השפעתו הנוירו-פרוטקטיבית בהשוואה לעכבר לא מטופל.

הערכת ההשפעות הנוירו-פרוטקטיביות של תרכובת בדיקה במודל עכבר חסימת עורק מוחי אמצעי

מודלים עכבריים שונים של חסימת עורק המוח אמצעית (MCAO) נמצאים בשימוש נרחב בחקר המוח ניסיוני. הנה, אנחנו מדגימים את המודל של MCAO דיסטלי הקבוע transcranial אשר מייצר אוטם קליפת המוח עקבי של גודל המתאים לנזק שהוטל על ידי הרוב המכריע של מקרי שבץ איסכמי אנושיים.

דוגמנות שבץ בעכברים: קרישה קבועה של עורקי דיסטלי התיכון מוחין

מודלים שונים של אומת עורק המוח האמצעי (MCAo) משמשים במחקר שבץ ניסיוני. כאן, מודל שבץ ניסיוני של MCAo חולף דרך העורק הראשי החיצוני (ECA) מתואר, שמטרתו לחקות שבץ אנושי, שבו פקקת המוח מוסרת עקב תמוגה קריש ספונטני או טיפול.

שבץ דוגמנות בעכברים: אומת עורק מוחי אמצעי חולף דרך העורק הראשי החיצוני

פרוטוקול זה מדגים מודל שבץ עכבר ייחודי עם אוטם בגודל בינוני ושיעור הישרדות מצוין. מודל זה מאפשר לחוקרי שבץ פרה-קליניים להאריך את משך האיסכמיה, להשתמש בעכברים מזדקנים ולהעריך תוצאות תפקודיות ארוכות טווח.

מודל שונה של חסימת עורק מוחי אמצעי טרנס-גולגולתי לחקר תוצאות שבץ מוחי בעכברים מזדקנים

פרוטוקול זה מתאר את המודל של איסכמיה מוחית מוקדית חולפת בעכברים באמצעות חסימה תוך לומינלית של עורק המוח האמצעי. בנוסף, דוגמאות להערכת תוצאות מוצגות באמצעות הדמיית תהודה מגנטית ומבחני התנהגות.

מודל חולף של חסימת עורק מוחי אמצעי חולף

כאן, אנו מציגים פרוטוקול לביסוס מודל חסימת עורק מוחי אמצעי דיסטלי (dMCAO) באמצעות אלקטרוקואגולציה טרנס-גולגולתית בעכברי C57BL/6J ומעריכים את ההתנהגות הנוירולוגית והתכונות ההיסטופתולוגיות שלאחר מכן.

השראת שבץ איסכמי חריף בעכברים באמצעות טכניקת חסימת העורק האמצעי הדיסטלי

הפרוטוקול הנוכחי מתאר מודל חולדה של חסימה/רפרפוזיה של עורק המוח האמצעי המשמר את המבנה האנטומי של כלי המוח מבלי לגרום נזק.

מודל חולדה של חסימה/עירוי מחדש של עורק המוח האמצעי מבלי לפגוע במבנה האנטומי של כלי המוח

מטרת מחקר זה הייתה לקבוע שיטה שחוזרת לביצוע כריתת גולגולת ואחריה חסימה קבועה וסלקטיבית של עורק המוח האמצעי בחולדות, ליישום במחקרים ניסיוניים של ליקויים מוטוריים וזיכרון מרחבי.

סתימה סלקטיבית וקבועה של עורק המוח האמצעי בעכברים: גישה ניסויית לחקר ליקויים מוטוריים וזיכרון מרחבי

למד את מודל ספיגת עורק המוח האמצעי בעכברים באמצעות חוט תוך-לומינלי ללא קרניוטומיה. שיטה זו מאפשרת הדמיה של שבץ מוחי איסכמי ומדידת גודל האינפארקט בצביעת TTC.

עכבר דגם ספיגה התיכון עורק מוחי

גלה סרטונים נוספים