Name: A técnica de impedância elétrica em tempo real baseado medir Invasão de monocamada de células endoteliais por células cancerosas (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 51 s
Description: Aprenda a monitorar invasão de células cancerosas através de monocamada endotelial usando impedância elétrica em tempo real com células HUVEC. Esta técnica quantifica interações celulares que mimetizam processos metastáticos in vivo.

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Este trabalho foi generosamente apoiado por fundos da Fundação do Câncer Infantil (Baltimore, MD), Brandon Lee Carrington Foundation (Silver Spring, MD), DOD (W81XWH-10-1-0137) e NIH (R01CA108641). Gostaríamos de agradecer ao Dr. Anton Wellstein e membros de seu laboratório para compartilhar sua experiência e nos ajudando a otimizar métodos apresentados.

1. Preparação <ol><li> Todos os passos devem ser realizados em condições estéreis, numa câmara de cultura de tecidos. </li><li> A estação xCELLigence é colocada numa incubadora de 37 ° C na presença de 5% de CO 2. </li><li> Use células HUVEC passagem baixas, de preferência, não mais do que a passagem 6. Além disso, certifique-se de que as células não são mais do que 75% confluente no momento da colheita. </li><li> As células HUVEC são cultivadas em meios EGM-2 reconstituídos com kit EGM-2 bala (Lonza Biosciences) contendo factores de crescimento, suplementos e 5% de soro fetal bovino. </li><li> Todos os vestígios de tripsina devem ser removidos a partir de suspensões de células por centrifugação a 200xg células, lavagem uma vez com PBS, e ressuspensão de densidades celulares indicadas. </li><li> Revestimento xCELLigence E-chapa 16 com 0,1% de gelatina durante 1 hora a 37 ° C ou durante a noite a 4 ° C. Lavar a placa com PBS e adicionar 100 uL reconstituído mídia EGM-2. Realizar uma leitura em branco no sistema xCELLigence para medir fundoimpedância na ausência de células. </li></ol> 2. Gerando monocamada HUVEC <ol><li> Colher um frasco de sub-confluente de células HUVEC por tripsinização. Ressuspender as células em reconstituídos EGM-2 Meios para uma densidade final de 2,5 x 10 5 células / ml. </li><li> A cada poço de uma base calibrado E-placa contendo 100 ul de meio EGM-2, adicionar 100 uL da suspensão de células HUVEC (2,5 x 4 10 células HUVEC). </li><li> Instalar imediatamente E-Plate no instrumento xCELLigence. </li><li> Software xCELLigence programa para realizar leituras de impedância em intervalos de 10 minutos. </li><li> Permitir que as células endoteliais para crescer 18-21 horas até se formar uma monocamada, como evidenciado por um achatamento do índice de células (Figura 2). </li></ol> 3. Além das células e normalização de dados invasor. <ol><li> Uma vez que uma monocamada de HUVEC estável formado, a colheita de células tumorais por tripsinização e ressuspender a um tocas finaisdade de 1 x 10 5 células / ml em meios utilizados para crescer células tumorais (tais como meios RPMI ou DMEM contendo 10% de FBS) </li><li> Leituras de impedância pausa do software xCELLigence e remover E-Plate da estação. </li><li> Remover EGM-2 media por aspiração. Adicionar 100 uL de suspensão de células de tumor contendo 1 x 4 10 células. Geralmente, uma proporção de células de tumor de 1:2,5: células endoteliais semeadas, funciona melhor para o ensaio. No entanto, a proporção pode ser optimizado para as linhas de células individuais. </li><li> Colocar a placa de E no sistema xCELLigence na incubadora e continuar leituras de impedância em intervalos de 10 minutos. </li><li> Invasão pode ser monitorado em tempo real ao longo dos próximos 6-12 horas como uma queda no índice de células devido à retração das junções endoteliais e penetração de invadir as células tumorais. </li><li> Normalizar os resultados para o momento da adição de invadir as células tumorais. O software xCELLigence permite a normalização de qualquer ponto de tempo e os resultadospode ser visto directamente na janela do software. </li></ol> 4. Resultados representativos: Um exemplo de monocamada HUVEC invasão por células metastáticas e não metastáticas é mostrado na Figura 3. K7M2 é uma linha de células de osteossarcoma metastático. Estas células expressam níveis elevados da proteína do citoesqueleto ezrina ligante, que representa as propriedades invasivas de esta linha celular 13,14. Quando as células HUVEC são desafiados com K7M2 células, há uma queda na resistência eléctrica dentro de 6 horas. Esta queda na resistência eléctrica representa a invasão de monocamada HUVEC pelas células do tumor invasoras. A linha de células K12, por outro lado, expressa níveis muito mais baixos de ezrina e é, consequentemente, menos metastático 13. Um desafio a monocamada de HUVEC com K12 células resulta em uma diminuição menos acentuada da resistência à medida que as células são incapazes de aderir ou invadir através da monocamada de HUVEC (Figura 3). <imgsrc files alt='"Figura'></imgsrc> Figura 1. Diagrama esquemático do processo de fluxo de trabalho para a invasão de células endoteliais por células tumorais. As células HUVEC foram semeadas em placas de E-revestidos de gelatina para permitir a formação de uma monocamada confluente. As células malignas são adicionados uma vez por monocamada formou e invasão é monitorado em tempo real como o índice da célula muda devido à invasão da monocamada endotelial. <img src="/files/ftp_upload/2792/2792fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Formação de monocamada HUVEC. Mudanças no índice de células como células HUVEC juntar-se e espalhar sobre eletrodos de ouro gelatina revestidos. A formação de uma monocamada confluente é representado por uma estabilização do índice de células após 18 horas. <img src="/files/ftp_upload/2792/2792fig3.jpg" alt="Figura 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Invasão de células HUVEC por K7M2 e K12 células de osteossarcoma. A queda acentuada no cell-índice ocorre dentro de poucas horas após a introdução das células altamente metastáticas K7M2. K12 células, por outro lado, são menos metastático e são incapazes de penetrar na monocamada endotelial tão eficientemente quanto K7M2 células. Isto é representado por uma diminuição no índice de menos acentuada quando a monocamada de células HUVEC é desafiado com células K12. Controlo representa uma impedância de monocamada HUVEC, na ausência de células de cancro. Os experimentos foram realizados em triplicata.

<ol><li>Klein, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer.+The+metastasis+cascade%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Cancer. The metastasis cascade.</a> Science. 321, 1785-1787 (2008).</li>
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</ol>

O custo para a publicação desse manuscrito foi gentilmente cedido pela Roche Applied Science.

O ensaio de invasão HUVEC em tempo real é um método simples, mas poderosa para a invasão de monitoramento. Ele fornece resultados em tempo real, o que é uma vantagem significativa em relação a outras técnicas tradicionais, que se baseiam na análise de ponto final. O ensaio pode ser modificado para testar drogas, anticorpos, ligandos e proteínas como inibidores ou estimuladores da metástase. O efeito de diferentes agentes na endotelial / célula cancerosa conversa cruzada pode ser avaliada, bem. Quando a introdução de agentes exógenos, tais como factores de crescimento e os medicamentos nos meios de cultura, é importante para garantir que eles não afectam a integridade da monocamada de HUVEC. Perturbação da monocamada HUVEC pode ser testada através da introdução do agente exógeno na ausência de células invasoras, e garantir que não existe qualquer alteração no índice de células. Assim, os controles apropriados devem ser incluídos como parte do projeto experimental. Linhas celulares diferentes demonstrar diferentes curvas de índice de células, que formam um confmonocamada luent. A forma da curva, bem como o valor máximo do índice da célula atingida, é do tipo de célula específico. Células HUVEC mostram uma característica transitória achatamento do índice de célula de 4-6 horas após a semeadura, seguido por outro de estabilização em um índice maior de células após 16-18 horas. Por isso, é importante para permitir que as células formam uma monocamada confluente durante pelo menos 18 horas antes da adição de células tumorais. Uma vez que o índice de células está dependente do ambiente iónico no eléctrodo / células de interfase, por vários factores tais como a morfologia celular e qualidade de adesões célula-célula influenciar o índice de células, para além da área do poço inferior coberta. Assim, a diminuição no índice de célula, que ocorre após a invasão de células de tumor, é uma função de diversos factores, que incluem a retracção das junções endoteliais e invasão de células de tumor subsequente. O instrumento xCELLigence é fabricado em três diferentes configurações: analisador de células em tempo real(RTCA) SP, RTCA MP e RTCA DP. O instrumento RTCA SP detém uma de 96 poços E-plate Considerando que o instrumento RTCA MP pode conter até seis de 96 poços E-chapas simultaneamente. Isto permite o rastreio de alto rendimento de drogas e compostos. Os experimentos deste artigo são realizadas utilizando o instrumento DP RTCA, que pode realizar três de 16 poços E-placas. Cada estação de realização E-plate pode ser operado de forma independente, o que permite que múltiplos usuários para executar experiências em simultâneo. O instrumento RTCA DP pode também ser usado para estudar a migração usando CIM-chapas. Estes são pratos de 16 poços com câmaras superior e inferior separadas por um tereftalato de polietileno (PET) de membrana com um tamanho de poro médio do 8um. Os sensores electrónicos estão localizados no lado de baixo da membrana porosa da câmara superior. A câmara inferior serve como um reservatório para o quimioatraente para células na câmara superior. No entanto, uma das principais vantagens do ensaio de invasão HUVEC nas placas CIM é que a invasão de células tumorais na ex-inão é restringida pelo tamanho do poro, como a invasão de células endoteliais depende de conversa cruzada entre as células tumorais e endoteliais. O ensaio de invasão de HUVEC também pode ser realizada em ECIS Z instrumento, fabricado por Biofísica Aplicada (Troy, NY). O Z instrumento ECIS utiliza uma tecnologia semelhante ao instrumento xCELLigence, com diferenças nas configurações da matriz e eletrodo. Temos realizado com sucesso testes de invasão HUVEC usando as matrizes ECIS oito poços. É importante notar que a área de superfície bem inferior é maior nas matrizes ECIS, o que requer um maior número de células endoteliais e de tumor seja banhado: 2,5 x 10 5 a 1 x 10 5 células, respectivamente.

<table><tbody><tr><td>Estação xCELLigence RTCA DP</td><td><a href="http://www.aceabio.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Roche Group</a></td><td>05469759001</td><td></td></tr><tr><td>Unidade de controle RTCA</td><td><a href="http://www.aceabio.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Roche Group</a></td><td>05454417001</td><td>Notebook com software RTCA pré-instalado</td></tr><tr><td>Placa E-16</td><td><a href="http://www.aceabio.com/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Roche Group</a></td><td>05469830001</td><td></td></tr><tr><td>Células HUVEC</td><td>Lonza Inc.</td><td>CC-2517</td><td></td></tr><tr><td>Meio EGM-2</td><td>Lonza Inc.</td><td>CC-3156</td><td></td></tr><tr><td>Kit Bullet EGM-2</td><td>Lonza Inc.</td><td>CC-4176</td><td></td></tr><tr><td>Gelatina 0,1% em H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O estéril</td><td>EMD Millipore</td><td>MCPROTO045</td><td></td></tr></tbody></table>

a técnica de impedância elétrica em tempo real baseado medir invasão de monocamada de células endoteliais por células cancerosas

A Real-time Electrical Impedance Based Technique to Measure Invasion of Endothelial Cell Monolayer by Cancer Cells

Disseminação metastática de células malignas requer degradação da membrana basal, a ligação de células de tumor ao endotélio vascular, a retracção das junções endoteliais e, finalmente, a invasão e a migração de células tumorais através da camada endotelial para entrar na corrente sanguínea, como meio de transporte para locais distantes do hospedeiro 1-3. Uma vez que no sistema circulatório, as células cancerígenas aderem à parede capilar e extravasar para o tecido circundante de modo a formar tumores metastáticos 4,5. Os vários componentes de interacção célula-célula endotelial tumoral pode ser replicado in vitro por desafio de uma monocamada de células endoteliais humanas da veia umbilical (HUVEC) com as células cancerosas. Estudos realizados com elétrons e microscopia de contraste de fase sugerem que a seqüência em vitro de eventos representam adequadamente o processo metastático in vivo 6. Aqui, descrevemos uma técnica baseada em impedância elétrica que monitora e quantifica em tempo real, as invasião de células endoteliais de células tumorais malignas. Giaever Keese e descrita pela primeira vez uma técnica para medir as flutuações na impedância quando uma população de células crescem sobre a superfície dos eléctrodos 7,8. O instrumento xCELLigence, fabricado pela Roche, utiliza uma técnica semelhante para medir as variações na impedância eléctrica como células de prender e espalhado num prato de cultura coberta com uma matriz de microeléctrodos de ouro que cobre cerca de 80% da superfície da parte inferior do poço. Como as células anexar e espalhada sobre a superfície do eléctrodo, ele conduz a um aumento na impedância eléctrica 9-12. A impedância é apresentada como um parâmetro sem dimensões denominado índice de células, que é directamente proporcional à área total do poço de cultura de tecidos, que é coberto por células. Assim, o índice de célula pode ser usado para monitorar a adesão celular, espalhamento, a morfologia e a densidade de células. O ensaio de invasão descrito neste artigo é baseado em mudançasna impedância eléctrica no eléctrodo / células de interfase, como uma população de células malignas invadem através de uma monocamada de HUVEC (Figura 1). A ruptura das junções endoteliais, retracção da monocamada de células endoteliais e sua substituição por células tumorais levar a grandes alterações na impedância. Estas alterações directamente correlacionadas com a capacidade invasiva de células tumorais, isto é, a invasão por células altamente agressivos levar a grandes alterações na impedância de células e vice-versa. Esta técnica proporciona uma dupla vantagem em relação aos métodos existentes de medição, tais como invasão câmara de Boyden e ensaios matrigel: 1) a interacção célula-célula endotelial tumoral imita mais de perto o processo in vivo, e 2) os dados são obtidos em tempo real, tempo e é mais facilmente quantificáveis, em oposição a análise de ponto final para outros métodos.

Este artigo descreve uma<em&gt; In vitro</em&gt; Técnica para células cancerosas invasoras de monitorização por meio de uma monocamada de células endoteliais. Os dados são adquiridos em tempo real, como uma função de alterações na impedância sobre a superfície de eléctrodos no fundo bem.

A técnica de impedância elétrica em tempo real baseado medir Invasão de monocamada de células endoteliais por células cancerosas

A disseminação metastática de células malignas requer a degradação da membrana basal, a adesão de células tumorais ao endotélio vascular, a retração de...

Este vídeo demonstra um método para monitorar a invasão de uma monocamada de células endoteliais por células cancerígenas, utilizando uma técnica baseada em impedância elétrica em tempo real. Primeiro, células endoteliais da veia umbilical humana, denominadas VE, são semeadas em placas EPL de 16 poços revestidos com eletrodos de ouro no fundo dos poços. Para formar uma monocamada confluente, células cancerígenas são adicionadas, as quais se aderem às células VE e invadem a monocamada de VE, rompendo as junções entre as células endoteliais. Em seguida, são obtidas leituras de impedância, que dependem da área total do fundo do poço coberta pelas células.A extensão da invasão pode então ser determinada com base em alterações na impedância elétrica. A principal vantagem desta técnica em relação a métodos existentes, como os ensaios de câmara de vazio e METROGEL, é que as interações entre células endoteliais e células tumorais imitam mais fielmente o processo metastático in vivo, e os dados são obtidos em tempo real e são mais facilmente quantificáveis, ao contrário da análise de ponto final utilizada em outros métodos. Embora este método possa fornecer informações sobre a invasão de células cancerígenas.Também pode ser aplicado a outros sistemas, como o estudo de interações entre células no sistema imunológico. Além disso, a fase inicial do experimento, na qual observamos o crescimento de células UX, pode ser utilizada para avaliar a proliferação celular de qualquer linhagem celular, sem etapas adicionais de invasão, demonstrando que o procedimento será realizado por Rahim, estudante de pós-graduação do meu laboratório. Todas as etapas deste protocolo devem ser realizadas em condições estéreis em uma câmara de cultura de tecidos.O sistema Xcel utilizado neste experimento é mantido permanentemente em uma incubadora com 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono, exclusivamente dedicada a este instrumento desde seu primeiro uso. O instrumento deve permanecer na incubadora por pelo menos 16 horas para equilibrar-se com o novo ambiente de temperatura e umidade. Em seguida, prepare o Thence EPL 16 revestindo-o com gelatina 0,1% por uma hora a 37 graus Celsius.Após o revestimento da placa, lave-a uma vez com PBS. Em seguida, adicione 100 microlitros do meio e gm dois reconstituído para realizar uma leitura em branco. Para medir a impedância de fundo na ausência de células.Coloque o EPL no sistema do agente Excel no computador. Abra o software do agente Excel clicando no ícone do software RTCA na área de trabalho na janela do software. Clique na guia layout e selecione os poços que contêm as amostras.Para programar a frequência da aquisição de dados em tempo real. Clique na aba cronograma, depois clique no ícone adicionar uma etapa. Varreduras indica o número de leituras e intervalos indica o intervalo de tempo entre as leituras. Esses valores são definidos automaticamente como um e 1,00 minuto, respectivamente.Isso programa o sistema para realizar uma leitura de fundo. Clique em adicionar um passo e insira 300 na caixa de varreduras e 10 minutos na caixa de intervalos. Isso programará o instrumento para realizar medições de impedância por até 50 horas.Para iniciar o experimento, clique no ícone iniciar uma etapa. A impedância de fundo de cada poço será medida após a realização da medição de fundo. A janela exibe a mensagem.Pronto para a próxima etapa, clique por favor. Próxima etapa para iniciar. Neste momento, as células podem ser adicionadas e a formação de uma monocamada pode ser monitorada conforme descrito.Na próxima seção, as células endoteliais de veia umbilical humana, ou VE utilizadas aqui, são cultivadas em meio EGM dois reconstituído com o kit complemento EGM dois contendo suplementos de fatores de crescimento e 5% de FBS. As células devem ser mantidas em uma incubadora a 37 graus Celsius na presença de 5% de dióxido de carbono. No dia do experimento, verifique a confluência das HUB E sob microscópio; as células devem ter um número baixo de passagens, preferencialmente não superior a seis e com confluência inferior a 75%, para gerar uma monocamada uniforme. Colha as células por tripsinização. Assim que as células se desprendem do frasco, todos os vestígios de tripsina devem ser removidos por centrifugação a 200 ×g. Após a centrifugação, lave as células uma vez com PBS.Em seguida, ressuspenda as células e o meio e GM dois reconstituído para uma concentração de 2,5 vezes 10 à quinta células por mililitro. Uma vez que as células estejam ressuspendidas, remova o EPL calibrado de fundo do sistema EXOGEN e adicione 100 microlitros da suspensão de HX aos 100 microlitros do meio E GM dois já presentes na placa. Coloque imediatamente o EPL no analisador de células do sistema Excel.Inicie a aquisição de leituras de impedância clicando no botão de etapa inicial na janela do software. Deixe as células endoteliais crescerem. O sistema continuará realizando leituras de impedância a cada 10 minutos.As uve mostram um achatamento transitório característico do índice celular quatro a seis horas após a semeadura, seguido por outra estabilização após 16 a 18 horas. Portanto, é importante deixar as células formarem uma monocamada confluente por pelo menos 18 horas. Uma vez formada a monocamada, é hora de adicionar as células invasoras em preparação para o ensaio de invasão.Prepare as células tumorais invasoras. Aqui são usadas células de osteossarcoma. Comece pelo isolamento das células com tripsina.Remova todos os vestígios de tripsina centrifugando as células a 200 G e lavando uma vez com PPS. Após a lavagem, suspenda as células em densidade final de um vezes 10 à quinta células por mililitro no meio utilizado para cultivar as células tumorais, como meio RPMI ou DMEA contendo 10% de FBS. Pausar o experimento clicando no ícone de etapa de pausa na janela do software.Remova o EPL e aspire o meio EGM dois da monocamada em vácuo. Adicione 100 microlitros de suspensão de células tumorais contendo um vezes 10 à quarta células. Geralmente, uma proporção de um para 2,5 células tumorais por células endoteliais funciona melhor para o ensaio.No entanto, a proporção pode ser otimizada para linhagens celulares individuais. Coloque o EPL de volta no sistema agente Excel dentro do incubador. Clique em próximo passo para continuar coletando leituras de impedância em intervalos de 10 minutos.Monitore a invasão em tempo real nas próximas seis a doze horas. Uma queda no índice de células resultará da retração das junções endoteliais e da penetração por células tumorais invasoras. Quando o experimento terminar, utilize o software exergen para normalizar os resultados em relação ao momento da adição das células tumorais invasoras.O software exergen permite a normalização em qualquer ponto temporal em que os VEX foram cultivados no sistema exergen, conforme mostrado neste vídeo, e células K7M2 ou células K12 foram adicionadas após a formação da monocamada. Como mostrado aqui, ocorre uma diminuição acentuada no índice celular dentro de algumas horas após a introdução das células K7M2. K7M2 é uma linhagem celular de osteossarcoma altamente metastásica.Essas células expressam altos níveis da proteína ligadora do citoesqueleto ene, o que explica as propriedades invasivas da linhagem celular. As células K 12, por outro lado, são menos metastáticas e incapazes de penetrar a monocamada endotelial com a mesma eficiência das células K sete M dois. Isso é representado por uma diminuição menos acentuada no índice celular, conforme mostrado aqui.O controle mostrado aqui representa a impedância da monocamada de uve. Na ausência de células cancerígenas, os experimentos foram realizados em triplicata. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como medir a invasão em tempo real, gerando uma monocamada de células endoteliais e desafiando a monocamada com células cancerígenas.As etapas iniciais do experimento envolvendo a formação de monocamada de HU XL podem ser utilizadas para avaliar a proliferação celular por impedância. Dois.

a-real-time-electrical-impedance-based-technique-to-measure-invasion

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JoVE Journal

Medicine

Medicina

Este vídeo descreve um ensaio de invasão usando uma matriz de três câmaras baseada em impedância elétrica. Esta técnica mede o potencial invasivo das células cancerígenas sob a influência de fatores solúveis secretados pelas células estromais residentes em microambientes tumorais.

Ensaio de impedância baseado em matriz de três câmaras: uma técnica de análise em tempo real para avaliar o potencial invasivo de células cancerígenas medindo a impedância elétrica

Fonte: Mudduluru, G., et. al. Medição em tempo real baseada em impedância da migração e invasão de células cancerígenas. J. Vis. Exp. (2020)Este vídeo demonstra um ensaio baseado em impedância para medir a invasão e migração de células de glioblastoma. As células degradam a matriz extracelular, movem-se através de membranas microporosas e aderem a eletrodos, gerando impedância. Esta análise em tempo real reflete seu potencial invasivo para aplicações de pesquisa do câncer.

Medições baseadas em impedância de invasão de células cancerígenas cerebrais

Este protocolo avaliados eléctrico Cell-substrato impedância de detecção, um método para gravar e analisar o espectro de impedância de células aderentes, para a quantificação da ligação da célula, a proliferação, a motilidade, e as respostas celulares a estímulos farmacológicos e tóxicos. Detecção de permeabilidade endotelial e avaliação de célula-célula e célula-substrato contatos são enfatizadas.

Elétrica Cell-substrato impedância Sensing para a quantificação do endotelial Proliferação, Barreira Function, e Motilidade

O câncer é uma doença letal devido à sua capacidade de metástase para diferentes órgãos. Determinar a capacidade das células cancerígenas de migrare e invadir diversas condições de tratamento é crucial para avaliar estratégias terapêuticas. Este protocolo apresenta um método para avaliar as habilidades metastáticas em tempo real de uma linha de células cancerígenas do glioblastoma.

Medição em tempo real da migração e invasão de células cancerígenas

Descrevemos uma abordagem para detectar e capturar subpopulações celulares invasivas em tempo real. O projeto experimental utiliza a Análise Celular em Tempo Real monitorando mudanças na impedância elétrica das células. Podem ser capturados câncer invasivo, células endoteliais ou estromais em tecidos complexos, e o impacto das co-culturas pode ser avaliado.

Detecção e Captura em Tempo Real de Subpopulações celulares invasoras de co-culturas

Muitos genes regulados estimulam a migração e invasão de células tumorais, levando a um prognóstico ruim. Determinar quais genes regulam a migração e invasão de células tumorais é fundamental. Este protocolo apresenta um método para investigar os efeitos do aumento da expressão de um gene sobre a migração e invasão de células tumorais em tempo real.

Mensuração Quantitativa em Tempo Real da Migração e Invasão de Células Tumorais Após Transfecção de RNAm Sintético

Aqui demonstramos a técnica de uso de biossensores baseados em impedância: ECIS e cellZscope, para medir a força da barreira endotelial cerebral. Detalhamos a preparação e a técnica de adição de vários estímulos a um modelo in vitro do endotélio cerebral. Medimos, registramos e fornecemos uma análise representativa dos resultados.

Medindo mudanças na integridade da barreira endotelial cerebral com dois biossensores baseados em impedância em resposta a células cancerígenas e citocinas

Nós apresentamos uma nova abordagem para quantificar a localização das nanopartículas na vasculatura de tumores humanos xenografted utilizando dinâmicas, imagens em tempo real intravital em um modelo embrião aviária.

Avaliação de Captação de nanopartículas em tumores em tempo real usando imagens intravital

Uma visão abrangente das técnicas envolvidas na geração de um modelo do rato de câncer oral e monitorização quantitativa de invasão tumoral dentro da língua por meio de microscopia multi-fotão de células marcadas é apresentado. Este sistema pode servir como uma plataforma útil para a avaliação molecular e eficácia de drogas anti-invasivos compostos.

Multi-fotão imagem de invasão das células tumorais em um modelo de camundongo ortotópico de carcinoma epidermóide oral

Um ensaio para medir quantitativamente Transforming Growth Factor (TGF)-β induzida por invasão em gel 3-dimensional colágeno é descrito. Este ensaio se aproveita da série MCF10A de linhas de células, que representam diferentes fases de desenvolvimento de câncer de mama. Este método pode ser adotado para ser usado com outras linhagens de células e pode ser usado para investigar outras possíveis ativadores ou inibidores de invasão.

Ensaio esferóide para TGF-β Medida induzida Invasion

Aprenda a monitorar invasão de células cancerosas através de monocamada endotelial usando impedância elétrica em tempo real com células HUVEC. Esta técnica quantifica interações celulares que mimetizam processos metastáticos in vivo.

A técnica de impedância elétrica em tempo real baseado medir Invasão de monocamada de células endoteliais por células cancerosas (Vídeo) | JoVE Journal

A técnica de impedância elétrica em tempo real baseado medir Invasão de monocamada de células endoteliais por células cancerosas

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