Name: Detecção de placas neuríticas no rato da doença de Alzheimer Modelo (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 2 s
Description: Aprenda a detectar placas neuríticas em camundongos transgênicos modelo da doença de Alzheimer usando imunohistoquímica com anticorpo 4G8 e DAB, além de coloração com tioflavina S. Essas técnicas permitem visualizar deposição de amiloide com alta especificidade.

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Este trabalho foi financiado pelos Institutos Canadenses de Pesquisa em Saúde (CIHR), a Família Townsend, e Jack Brown e Família Alzheimer Research Foundation (para WAS). WS é o titular da Cátedra de Pesquisa do Canadá na Doença de Alzheimer. PTTL é suportado pelas Ciências Naturais e Conselheiro Pesquisa de Engenharia e Michael Smith Fundação de Saúde de Bolsas de Investigação.

1. Fixação de cérebros de camundongos e cryosectioning <ol><li> Camundongos transgênicos são sacrificados com gás de dióxido de carbono, seguido por decapitação eo cérebro extraído. </li><li> O cérebro é dissecada no sentido longitudinal no centro. Metade do cérebro será flash congelado em gelo seco para análise bioquímica. O outro será submerso em paraformaldeído a 4% (PFA) para pelo menos 48 horas a 4 ° C. </li><li> Após a fixação em PFA 4% para pelo menos 48 horas, o cérebro hemi é transferido diretamente para a solução de sacarose 30% e colocou a 4 ° C. No ponto, o cérebro hemi deve ser flutuante na solução de sacarose. Quando o cérebro hemi afundou para o fundo, normalmente exigindo cerca de 48 horas, ele está pronto para ser incorporado em outubro para cryosectioning. </li><li> Antes cryosectioning, monte uma camada fina de outubro na maçaneta e deixe congelar a -20 ° C. Remova o cerebelo do resto do cérebro hemi e coloque sobre a camada de outubro congelados. Cobrir imediatamente o cérebro hemi com outubro e deixe lentamente congelar a -20 ° C. Uma vez que a incorporação de outubro o cérebro se tornou opaco, ele está pronto para ser seccionado. </li><li> Definir a espessura de cada seção para 30 mm. Coletar cada fatia em um recipiente com solução de D'Olomos. </li></ol> 2. Procedimento de imuno-histoquímica para placas neuríticas (free seções flutuante) <ol><li> Tratar cada seção em 88% de ácido fórmico por 15 minutos. Após o tratamento ácido fórmico, a seção vai desativar temporariamente opaco e pode aparecer a murchar. </li><li> Retire cada seção em um prato e lave com Tx-PBS (0,3% Triton X-100 em PBS) por 5 X 3 min, agitando suavemente. </li><li> Peróxido de bloco endógena bloqueio 0,5% H 2 O 2 em Tx-PBS, RT 30 min, agitando suavemente. </li><li> Lavar a lâmina com Tx-PBS por 10 min X 3, agitando suavemente. </li><li> Seção do bloco com 5% de leite desnatado sem gordura dissolvida em Tx-PBS em temperatura ambiente por uma hora, agitando suavemente. </li><li> Incubar seções em anticorpo primário (biotinilado 4G8, 1:500-1:2000, Signet) diluído em PBS-Tx contendo 5% de leite a 4 ° C durante a noite, agitando suavemente. </li><li> Lavar a lâmina com Tx-PBS por 10 min X 3, agitando suavemente. </li><li> Prepare protocolo ABC fabricante da solução seguinte (Elite ABC, Vector Laboratories). Incubar a mistura de seções ABC por 30 min, agitando suavemente. </li><li> Lavar a lâmina com Tx-PBS por 10 min X 3, agitando suavemente. </li><li> Prepare 3,3 tetrahidrocloreto 'diaminobenzidina (DAB) (Vector Laboratories) protocolo do fabricante seguinte. Incubar seções em DAB mistura de 5-10 min. Neste ponto, você vai observar uma cor acastanhada desenvolver em cada seção. </li><li> Lavar a lâmina com Tx-PBS por 10 min X 3, agitando suavemente. </li><li> Seções de livre flutuação do cérebro são montados em gelatina slides revestido, para ajudar na adesão do tecido. Seções são então ar seco seguido por limpeza com uma série de xileno e montados em Entellen. </li><li> Placas são visualizadas em microscopia de luz em aumento de 40X e são quantificados avaliando a contagem de placa médio por fatia para cada rato. </li></ol> 3. Thioflavin S coloração procedimento para a detecção de placas neuríticas <ol><li> Sacrifício do mouse e procedimento de extração do cérebro são, tal como indicado nos pontos 1.1 a 1.5. </li><li> Monte 4-5 seções cérebro hemi numa lâmina de vidro e deixar completamente o ar seco antes da coloração. </li><li> Lavagem das lâminas com etanol 70% por 1 minuto. </li><li> Lavagem das lâminas com etanol 80% por 1 minuto. </li><li> Incubar as lâminas em solução filtrada (filtro de 0,2 mm) thioflavin S (1% em 80% de etanol) por 15 minutos. (Solução Thioflavin S precisa ser filtrada antes de cada utilização). Nota: proteger thioflavin S da luz e proteger lâminas coradas da luz. </li><li> Lavagem das lâminas com etanol 80% por 1 minuto. </li><li> Lavagem das lâminas com 70% de etanol minutos 1. </li><li> Lavar com água destilada duas vezes. </li><li> Slides montagem em solução aquosa meios de montagem e permitir que as lâminas secar no escuro por pelo menos duas horas, seguido por lamínula de vedação com unhas polonês claro. Cortes corados deve ser armazenado no escuro a 4 ° C. </li><li> A fluorescência verde placas manchada poderia ser visualizado com microscropy fluorescente. Analisar slides dentro de uma semana porque a coloração vai desaparecer com o tempo. </li></ol> 4. Resultados representante Em nosso estudo recente sobre a eficácia do medicamento anti-epiléptico e ácido valpróico estabilizador de humor (VPA) para inibir a formação de placas neuríticas, foi utilizada a imunocoloração acima descritos e thioflavin S coloração procedimentos para identificar placas neuríticas em ratos AD modelo (3). A Figura 1 representa um típico 9 meses de idade APP23 camundongo transgênico, corados com anti-Aâ usando 4G8 biotinilado e detectados através do método ABC. Placas neuríticas são claramente identificados com o anticorpo e são indicados pelas setas brancas. Usando coloração thioflavin S, detectamos deposição de placas neuríticas 2 meses de idade APP23xPS transgenic ratos (Figura 2). Obrigado Thioflavin S placas neuríticas Aâ contendo parece verde sob microscopia de fluorescência (indicado por setas brancas). Nós mostramos que o tratamento com VPA, a formação de placas neuríticas é significativamente reduzido (3). Em outro estudo, estudamos a hipóxia ligação molecular subjacente e patogênese AD. Mais uma vez, usando tanto a coloração imuno-histoquímica anti-4G8 Aâ e coloração thioflavin S, descobrimos que a hipóxia facilitou a formação de Aâ contendo placas neuríticas (4). <img src="/files/ftp_upload/2831/2831fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Análise imunohistoquímica da formação de placas neuríticas em camundongos transgênicos AD. APP23 ratos na idade de nove meses foram sacrificados e foram dissecados, fixo, e seccionados. Placas neuríticas no hipocampo foram detectados através de um anticorpo anti-4G8 Aâ e foram desenvolvidos utilizando os métodos ABC e DAB. As placas foram visualizadas por microscopia de luz com 40X. Setas brancas apontam para placas neuríticas Aâ. <img src="/files/ftp_upload/2831/2831fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Coloração Thioflavin S de placas neuríticas em ratos AD modelado. APP23xPS45 dupla camundongos transgênicos às 8 semanas de idade foram sacrificados e foram dissecados, fixo, e seccionados. Pragas neuríticas no hipocampo estão foram confirmados pela coloração fluorescente thioflavin S e visualizados por microscopia em aumento de 40X. Setas brancas indicam placas neuríticas manchada thioflavin S.

<ol><li>Glenner, G. G., Wong, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alzheimer%27s+disease%3A+initial+report+of+the+purification+and+characterization+of+a+novel+cerebrovascular+amyloid+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Alzheimer's disease: initial report of the purification and characterization of a novel cerebrovascular amyloid protein.</a> Biochem Biophys Res Commun. 120, 885-890 (1984).</li>
<li>Hardy, J., Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+amyloid+hypothesis+of+Alzheimer%27s+disease%3A+progress+and+problems+on+the+road+to+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The amyloid hypothesis of Alzheimer's disease: progress and problems on the road to therapeutics.</a> Science. 297, 353-356 (2002).</li>
<li>Qing, H., He, G., Ly, P. T., Fox, C. J., Staufenbiel, M., Cai, F., Zhang, Z., Wei, S., Sun, X., Chen, C. H., Zhou, W., Wang, K., Song, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Valproic+acid+inhibits+Abeta+production%2C+neuritic+plaque+formation%2C+and+behavioral+deficits+in+Alzheimer%27s+disease+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Valproic acid inhibits Abeta production, neuritic plaque formation, and behavioral deficits in Alzheimer's disease mouse models.</a> J Exp Med. 205, 2781-2789 (2008).</li>
<li>Sun, X., He, G., Qing, H., Zhou, W., Dobie, F., Cai, F., Staufenbiel, M., Huang, L. E., Song, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia+facilitates+Alzheimer%27s+disease+pathogenesis+by+up-regulating+BACE1+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Hypoxia facilitates Alzheimer's disease pathogenesis by up-regulating BACE1 gene expression.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 18727-18732 (2006).</li>
</ol>

Todos os experimentos foram conduzidos de acordo com o The University of British Columbia Animal Care e da comissão Use e diretrizes CIHR.

Imunohistoquímica utilizando o anticorpo biotinilado rotulados manchas 4G8 placas neuríticas na AD modelado camundongos com especificidade. O resultado coloração permite a quantificação e comparação da carga de placa bacteriana entre os diferentes grupos de tratamento. Existem vários passos cruciais que poderiam afetar o resultado. Porque o cérebro hemi não são perfundidos antes da extração do crânio, o cuidado deve ser usado durante o processo de extração, a fim de evitar danos para o cérebro hemi. Além disso, uma vez que o cérebro é hemi passivamente perfundidos, recomendamos incubando-o em PFA 4% para pelo menos 48 horas a 4 ° C antes da imersão em solução de sacarose a 30%. Alternativamente, a perfusão transcardial poderia ser feito antes de extrair o cérebro. Se o cérebro é fixada corretamente, ele deve ter uma textura emborrachada. No caso em que o cérebro não é fixa adequadamente, as seções serão rasgões na solução Olomos D&#39;ou durante os procedimentos de coloração. O anticorpo monoclonal é 4G8 reativa para resíduos de aminoácidos 17-24 de Aâ e reconheceu o epítopo na seqüência do núcleo (VFFAE). Desde 4G8 é derivado de espécies mouse, ele tende a dar uma coloração mais fundo. Assim, optou-se incubar as seções na diluição indicada com considerações para alcançar um verdadeiro sinal, minimizando coloração de fundo. Além de imunocoloração para a detecção de placas neuríticas usando o anticorpo 4G8, um método thioflavin S coloração também é usado para identificar placas. Thioflavin S é uma mistura homogênea de corante que resulta de metilação de dehydrothiotoluidine com ácido sulfônico. Thioflavin S não se liga seletivamente conteúdo folha beta de proteínas, tais como aquelas em oligômeros amilóide. Após a ligação, thioflavin sofre uma mudança de característica azul do seu espectro de emissão. Por outro lado vinculativo thioflavin S com as formas monoméricas não vai provocar uma mudança de azul e não podia ser detectado com microscópio de fluorescência. Coloração Thioflavin S oferece uma alternativa rápida para triagem de amilóide como a intensidade de fluorescência permite boa visualização de pequenas quantidades de depósitos de amilóide. No entanto, uma desvantagem sobre coloração thioflavin S é a falta de especificidade. Muitos componentes do tecido, incluindo contendo folhas beta extensa, como fibrinoids, hialina, queratina, etc, têm uma afinidade bastante para este corante.

<table border="1"><tbody><tr><th> Nome do reagente e equipamentos </th><th> Companhia </th><th> Número de catálogo </th></tr><tr><td> Paraformaldeído </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P6148-1KG </td></tr><tr><td> Polyvinylpyrrolidene </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> PVP40-100G </td></tr><tr><td> Sacarose </td><td> Fisher Scientific </td><td> S5-3 </td></tr><tr><td> Etilenoglicol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 324558-2L </td></tr><tr><td> Tissue-Tek Compound outubro </td><td> Sakura </td><td> 4583 </td></tr><tr><td> 88% de ácido fórmico </td><td> Fisher Scientific </td><td> A118P-500 </td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Biomedicals ICN </td><td> 807426 </td></tr><tr><td> H2O2 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H-1009 </td></tr><tr><td> Biotina rotuladas 4G8 Antibody </td><td> Cedarlane </td><td> SIG-39240-500 </td></tr><tr><td> Elite ABC kit </td><td> Vetor </td><td> PK-6100 </td></tr><tr><td> Imm PACTO DAB </td><td> Vetor </td><td> SK-4105 </td></tr><tr><td> Xileno </td><td> Fisher Scientific </td><td> X4-4 </td></tr><tr><td> Entellan </td><td> EM ciência </td><td> 65037-71 </td></tr><tr><td> Superfrost * Plus Lâminas de microscopia </td><td> Fisher Scientific </td><td> 12-550-15 </td></tr><tr><td> Criostato </td><td> Leica </td><td> CM-3050-S </td></tr><tr><td> MX35 Premier micrótomo blade </td><td> Thermo Scientific </td><td> 3052835 </td></tr><tr><td> Thioflavin S </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T1892-25G </td></tr></tbody></table>

detecção de placas neuríticas no rato da doença de alzheimer modelo

Detection of Neuritic Plaques in Alzheimer's Disease Mouse Model

Doença de Alzheimer (DA) é a mais comum desordem neurodegenerativa levando à demência. Formação de placas neuríticas é uma das características patológicas da doença de Alzheimer. O componente central de placas neuríticas é uma pequena proteína filamentosa proteína chamada amilóide β (Aâ) 1, que é derivada da clivagem proteolítica seqüencial da proteína precursora beta-amilóide (APP) por β-secretase e γ-secretase. A hipótese amilóide implica que Aγ contendo placas como o mecanismo subjacente tóxicos em patologia 2. A análise post-mortem da presença de placas neuríticas confirma o diagnóstico da DA. Para promover nossa compreensão da neurobiologia Aγ na patogênese da AD, várias linhagens de camundongos expressando AD relacionados com mutações nos genes APP humanos foram gerados. Dependendo da gravidade da doença, esses ratos desenvolvem placas neuríticas em diferentes idades. Esses camundongos servem como ferramentas de valor inestimável para o estudo da patogênese e desenvolvimento de drogas que podem afetar o caminho de processamento APP e formação de placas neuríticas. Neste protocolo, empregamos um método imuno-histoquímico para detecção específica de placas neuríticas em camundongos modelo AD. Vamos especificamente discutir a preparação de extrair o cérebro meia, fixação paraformaldeído, cryosectioning, e dois métodos para detectar placas neurótico em camundongos transgênicos AD: detecção imuno-histoquímica usando o método ABC e DAB e detecção fluorescente usando o método thiofalvin S coloração.

Uma das características patológicas da doença de Alzheimer é a formação de amilóide β proteína placas neuríticas positivo. Neste protocolo, descrevemos dois métodos para detectar placas neuríticas em camundongos transgênicos modelo AD: detecção imunohistoquímica utilizando o método ABC e DAB e detecção fluorescente usando o método thioflavin S coloração.

Detecção de placas neuríticas no rato da doença de Alzheimer Modelo

A doença de Alzheimer (DA) é o distúrbio neurodegenerativo mais comum que leva à demência. A formação de placas neuríticas é uma das marcas patológicas...

O objetivo geral deste procedimento é preparar cérebros de camundongos modelo de DA para a detecção de placas reticulares utilizando imuno-histoquímica com o anticorpo 4G8 e coloração com tioflavina S. Isso é realizado primeiramente pela extração do cérebro do camundongo do crânio e perfusão passiva em PFA 4%, seguida pela imersão em solução de sacarose 30% para crio-seccionamento, sendo os cérebros cortados longitudinalmente com espessura de 30 mícrons. Em seguida, as placas reticulares são coradas utilizando o anticorpo 4G8 e visualizadas pelo método de DAB.Além disso, corar placas reticulares com a coloração de tioflavina S e visualizar utilizando microscopia de fluorescência. Em última análise, os resultados obtidos podem demonstrar o depósito de placas reticulares em tecidos cerebrais por meio de detecção baseada em anticorpos e coloração com o corante tioflavina S. A principal vantagem dessas técnicas em relação aos métodos existentes é que a coloração com 4G8 e a tioflavina S são altamente seletivas para placas reticulares contendo proteínas beta.Embora este método seja demonstrado aqui para detectar placas beta em camundongos transgênicos com doença de Alzheimer, ele também pode ser utilizado para detectar placas beta na doença de Alzheimer em humanos. Sacrificar os camundongos transgênicos utilizando gás carbônico, seguido por decapitação, extrair o cérebro e dissecá-lo longitudinalmente no centro. Congelar rapidamente uma metade do cérebro em gelo seco para análise bioquímica e submergir a outra metade em paraformaldeído a 4% por pelo menos 48 horas a quatro graus Celsius.Transfira o Hemi Brainin para uma solução de sacarose a 30% a quatro graus Celsius. Inicialmente, o cérebro hemisférico flutuará na solução de sacarose, mas após 24 a 48 horas, ele afundará no fundo. Antes da montagem para crio-seccionamento, aplique uma fina camada de OCT no botão e deixe congelar a menos 20 graus Celsius. Remova o cerebelo do restante do Hemi Brainin.Coloque o restante sobre a camada de OCT congelado, cubra imediatamente com OCT e deixe congelar lentamente a menos 20 graus Celsius. Ajuste o criostato para espessuras de corte de 30 mícrons e colete cada fatia em um recipiente com solução Domo. Trate cada seção livre com ácido fórmico a 88% durante 15 minutos.As seções parecerão murchar. Em seguida, transfira cada seção para uma placa e lave três vezes com Triton XPBS durante cinco minutos com agitação suave. Atenuar a atividade endógena com 0,5% de peróxido de hidrogênio em Triton XPBS por 30 minutos à temperatura ambiente com agitação suave.Em seguida, lave as seções três vezes com XPBS-Triton durante 10 minutos sob agitação suave, bloqueie as seções com leite desnatado desengordurado a 5% dissolvido em XPBS-Triton por uma hora à temperatura ambiente com agitação suave. Continue incubando as seções no anticorpo primário diluído em XPBS-Triton contendo 5% de leite a quatro graus Celsius durante a noite com agitação suave. Lave as amostras três vezes com PBS-Triton durante 10 minutos.Agora, prepare uma solução b, C de acordo com o protocolo do fabricante e incube os cortes na mistura A B, C por 30 minutos com agitação suave, seguido por três lavagens com PBS trite next por 10 minutos. Incube os cortes na mistura DAB recém-preparada por cinco a 10 minutos, quando uma coloração acastanhada se desenvolver em cada corte, e lave três vezes com PBS trite next por 10 minutos com agitação suave. Monte os cortes cerebrais em lâminas revestidas com gelatina e seque ao ar, clarifique com uma série de tratamentos com xileno e monte em lin.Visualize as placas por microscopia óptica com ampliação de 40x e quantifique a contagem média de placas por corte para cada camundongo; extraia o tecido cerebral dos camundongos conforme mostrado anteriormente. Monte quatro a cinco seções hemisféricas do cérebro em uma lâmina de vidro e deixe secar ao ar completamente; desidrate as amostras em etanol 70% por um minuto, seguido de etanol 80% por um minuto. Em seguida, incube as lâminas em solução de tioflavina S 0,1% filtrada por 15 minutos.Tendo o cuidado de proteger a solução de Theof Flavin S e as lâminas coradas da luz, lave as lâminas com etanol 80% por um minuto, etanol 70% por um minuto e água destilada duas vezes. Agora, monte as lâminas em meio de montagem aquoso e seque ao ar no escuro por pelo menos duas horas, seguido pelo selamento da lamínula com esmalte incolor. Armazene as seções coradas no escuro a quatro graus Celsius.Finalmente, visualize as placas marcadas com fluorescência verde por meio de microscopia fluorescente dentro de uma semana. Em nosso estudo recente sobre a eficácia do medicamento antiepiléptico e estabilizador do humor, o ácido valpróico, em inibir a formação de placas reticulares, utilizamos a imunomarcação descrita acima e o procedimento de marcação com flavinas para identificar placas reticulares em camundongos modelo de DA. Um camundongo transgênico típico de nove meses de idade, A PP 23, é marcado com anti A beta utilizando BIOTINILADO 4G oito e detectado pelo método A BC.As placas reticulares neurais são claramente marcadas com o anticorpo e são indicadas pelas setas brancas. Aqui, a coloração com flavina S detecta o depósito de placas reticulares em camundongos transgênicos APP23 vezes PS com dois meses de idade. Uma vez dominada, esta técnica pode ser concluída em três dias, se realizada corretamente. Ao tentar este procedimento, é importante fixar completamente o cérebro em PFA 4% e garantir que o cérebro afunde completamente até o fundo da solução de sacarose a 30%.Após este procedimento, outros métodos como imunomarcção para tau podem ser realizados para responder perguntas adicionais como hiperfosforilação de tau e degeneração neuronal.

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Modelos transgênicos (Tg) do mouse do AD uma excelente oportunidade para investigar como e por que níveis Aâ ou tau na mudança CSF como a doença progride em pacientes humanos. Aqui, nós demonstramos uma refinada técnica de punção da cisterna magna para amostragem CSF serial do mouse.

A técnica de coleta de líquido cefalorraquidiano Serial da Cisterna Magna em rato

Fonte: Bisht, K., et. al. Microscopia de luz e eletrônica correlativa para estudar interações microgliais com placas β-amilóides. J. Vis. Exp. (2016) Este vídeo demonstra a visualização e o mapeamento de placas amilóides marcadas com metoxi-X04 no cérebro de camundongos com doença de Alzheimer seções usando fluorescência e microscopia de campo claro, permitindo a correlação precisa de placas com estruturas anatômicas para estudar a patologia de Alzheimer.

Visualização e mapeamento de placas amilóides marcadas com metoxi-X04 em uma seção do cérebro de camundongo com doença de Alzheimer

Fonte: Arango-Lievano, M. et. al., Imagem longitudinal in vivo da cerebrovasculatura: relevância para doenças do SNC. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra imagens in vivo de dois fótons para visualizar placas amilóides marcadas com fluorescência e vasculatura cerebral. A fluorescência azul marca as placas, enquanto a fluorescência verde destaca os vasos sanguíneos cerebrais. Um mapa 3D da região de interesse e imagens em mosaico de alta resolução revelam interações detalhadas de placas...

Imagens in vivo de vasos cerebrais e placas amilóides em um modelo de camundongo com doença de Alzheimer

Aqui, apresentamos um protocolo para infusão cerebral estereotáxica direta de beta-amilóide. Esta metodologia fornece um modelo alternativo de camundongo in vivo para abordar os efeitos de curto prazo da beta-amilóide nos neurônios cerebrais.

Infusão estereotáxica de oligomica beta-amilóide no ratinho Hippocampus

O amilóide-β (Ap) -injected modelo animal permite a administração de uma quantidade e espécie de fragmentos de Ap definidos e reduz as diferenças individuais dentro de cada grupo de estudo. Este protocolo descreve a injecção intracerebroventricular (ICV) de Ap sem instrumentos estereotáxicas, permitindo a produção de anormalidades comportamentais Alzheimer-like em ratinhos normais.

Injeção intracerebroventricular de peptídeos amilóide-beta em ratos normais para induzir Acutely déficits cognitivos Alzheimer-like

Aqui, descrevemos a configuração, navegação software e análise de dados para um método espacial e temporalmente precisa de medir a tônica e fásica mudanças glutamato extracelulares in vivo utilizando matrizes de microeletrodos ligado a enzima (MEA).

Utilizando biossensores baseados em Enzyme medir Tonic e Phasic glutamato na doença de Alzheimer rato Models

Descreve-se aqui uma abordagem de rastreio comportamental escalonada que pode ser utilizada para pesquisar compostos que exibem eficácia in vivo sobre comportamentos motores cognitivos e funcionais em modelos de ratinho transgénicos de β-amiloidose e tauopatia. Esses métodos são otimizados para pesquisar compostos para atividades em tarefas de memória de curto prazo e de trabalho.

Avaliação de Alternância Espontânea, Reconhecimento de Objetos Novos e Clasping de Membros em Modelos de Rato Transgênico de Neuropatologia Amilóide-β e Tau

O presente protocolo descreve e compara o procedimento para realizar uma análise de interesse de região completa ou sub-região de seções cerebrais de camundongos sagitos para quantificar a carga amilóide-beta no modelo de camundongo transgênico APP/PS1 da doença de Alzheimer.

Quantificação total versus sub-regional da carga amilóide-beta nas seções cerebrais do rato

Uma característica da doença de Alzheimer é a elevação da...

Preparação de Oligoméricas β-amilóide 1-42 Indução e de Impairment plasticidade sináptica em fatias do hipocampo

Aptâmeros são ribo-/deoxyribo-oligonucleotides curtas selecionados...

Seleção de Aptamers para proteína β-amilóide, o agente causador da doença de Alzheimer

Aprenda a detectar placas neuríticas em camundongos transgênicos modelo da doença de Alzheimer usando imunohistoquímica com anticorpo 4G8 e DAB, além de coloração com tioflavina S. Essas técnicas permitem visualizar deposição de amiloide com alta especificidade.

Detecção de placas neuríticas no rato da doença de Alzheimer Modelo

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