Divisão de esferóides para subcultura e transporte: um procedimento para propagar e transferir esferóides de tumor neuroendócrino do intestino delgado

Os esferoides são culturas in vitro de células auto-agregadas para formar estruturas esféricas tridimensionais. Para propagar esferoides tumorais, comece com esferoides cultivados em uma matriz extracelular adequada, ou MEC, contida em uma placa de cultura.

Triturar usando uma micropipeta para quebrar a ECM mecanicamente e soltar os esferoides. Transfira a mistura esferoide-ECM para um tubo de microcentrífuga.

Centrifugue em baixa velocidade para peletizar os esferoides e separá-los da ECM no sobrenadante. Descarte o sobrenadante contendo ECM gasto. Transfira o tubo contendo o pellet esferóide no gelo para evitar a solidificação do ECM durante as etapas subsequentes.

Completar o pellet com ECM liquefeito fresco. Para subcultura, misture o conteúdo pipetando para cima e para baixo repetidamente para dissociar as células esferóides e liberá-las em suspensão.

Semeie esta mistura contendo células formadoras de esferóides e ECM em uma placa de cultura fresca. A ECM se solidifica, permitindo o aprisionamento de células tumorais. Adicione o meio de crescimento desejado. Incubar para facilitar o crescimento de células aprisionadas em novos esferoides.

Para efeitos de expedição, transferir