Imunomarcação de ouro de cortes exossômicos: uma técnica para visualizar marcadores diagnósticos no lúmen exossômico

Os exossomos são pequenas vesículas extracelulares que envolvem uma variedade de biomoléculas que servem como biomarcadores de câncer.

Para visualizar biomarcadores exossômicos, comece com seções exossômicas ultrafinas embebidas em resina suportadas em grades metálicas de microscopia eletrônica adequadas. Incube as grades em gotas de glicina. A glicina se liga e neutraliza grupos aldeídos reativos nas seções para superar sua interferência no ensaio.

Enxágue a amostra com água para remover os reagentes residuais. Em seguida, incubar a amostra em um tampão de bloqueio. O tampão transporta proteínas séricas que bloqueiam locais de ligação de anticorpos não específicos na amostra.

Em seguida, incube a amostra na solução de anticorpo primário desejada. Esses anticorpos reconhecem e se ligam aos seus biomarcadores alvo localizados no lúmen exossômico. Lave quaisquer anticorpos não ligados com um tampão adequado.

Agora, transfira as grades de suporte de amostra para gotas contendo anticorpos secundários conjugados com ouro que se ligam aos anticorpos primários. As nanopartículas de ouro servem como marcadores densos de elétrons para visualizar a localização fina das moléculas-alvo. Lave q