Coloração negativa de exossomos purificados: um procedimento para visualizar a morfologia do exossomo usando microscopia eletrônica de transmissão

Para realizar a coloração negativa de exossomos - vesículas esféricas de tamanho nanossuficiente - comece fazendo uma grade de microscopia eletrônica adequada. Prepare a grade usando um descarregador de brilho. Este processo torna a superfície da grade hidrofílica para melhor adesão das amostras.

Simultaneamente, tome uma suspensão de exossomos purificados em um tubo. Complemente o tubo com paraformaldeído - um fixador de amostra - e incuba. O paraformaldeído penetra nos exossomos e reticula as proteínas e os ácidos nucléicos. Esta etapa é vital para preservar a morfologia dos exossomos.

Agora, carregue a suspensão do exossomo na grade pré-preparada e incube para permitir que a adsorção ocorra. Em seguida, adicione algumas gotas de acetato de uranila, uma mancha de metal pesado, sobre a grade. Os íons uranila se ligam às proteínas e lipídios da membrana, formando um depósito ao redor do limite do exossomo.

Por último, lave a grade em água para remover o excesso de mancha. Deixe a grade secar e obter imagens usando microscopia eletrônica de transmissão ou TEM.

Quando um feixe de elétrons atinge os exossomos, a mancha ao redor da amostra espalha mais elétrons. Os exossomos, sendo men