Hibridização de sonda e amplificação de sinal em hibridização in situ de RNA: uma técnica para detectar sequências específicas de RNA em seções de tecido

Para detectar uma sequência específica de RNA em uma célula, comece fazendo uma seção de tecido em uma lâmina de vidro. Cubra a seção de tecido com um tampão de hibridização adequado contendo as sondas de RNA alvo.

Essas sondas são moléculas de RNA em forma de Z com uma porção de reconhecimento de alvo em uma extremidade e uma sequência de cauda em outra extremidade. Um braço espaçador liga essas duas extremidades.

Agora, incube a lâmina em um forno de hibridização a uma temperatura ideal. As sondas de RNA em forma de Z entram na célula e hibridizam com a sequência de mRNA alvo correspondente em pares.

Retire a corrediça do forno. Mergulhe a lâmina em uma solução de lavagem para remover quaisquer sondas não ligadas e o excesso de tampão de hibridização.

Em seguida, adicione uma solução de pré-amplificador e incube. A molécula pré-amplificadora se liga à sequência de cauda de duas sondas Z adjacentes. Esta molécula não se liga a uma única sonda Z, garantindo especificidade.

Em seguida, adicione a mistura de reagentes do amplificador e incuba. Várias moléculas amplificadoras hibridizam com a única sequência de pré-amplificador.

Por fim, rotule a seção de tecido com as sondas de marca