Cultura de salispheres a partir de tecido de glândulas salivares: um método para desenvolver salispheres a partir de células epiteliais derivadas de glândulas salivares humanas

Os salispheres são culturas in vitro, auto-agregadoras, de células epiteliais derivadas da glândula salivar. Para cultivar salispheres, comece retirando o tecido da glândula salivar humana em uma placa de cultura.

Usando uma tesoura, pique o tecido em pedaços finos. Em seguida, complemente essas peças com uma solução de dissociação contendo enzimas colagenase e dispase e incuba. Essas enzimas digerem a matriz extracelular presente no tecido.

Além disso, triturar para homogeneizar o tecido. Esta etapa libera as células epiteliais e as hemácias na solução. Em seguida, use um filtro de células e filtre o homogeneizado de tecido em um tubo cônico fresco para remover pedaços de tecido não digeridos e detritos. Centrifugue para pellet as células.

Após a centrifugação, rejeitar o sobrenadante e ressuspender o sedimento celular no tampão de lise das hemácias. Este tampão rompe as hemácias presentes na suspensão celular.

Agora, centrifugue para peletizar as células epiteliais. Ressuspenda o pellet em um meio de crescimento de células epiteliais apropriado. Além disso, prepare a placa de cultura do salisphere revestindo seu poço com uma matriz de membrana basal liquefeita ou BMM. Incube para