Injeção Cirúrgica de Cisterna Magna: Um Método para Administração de Células Tumorais Diretamente no Sistema Nervoso Central do Modelo Murino

O cérebro murino é revestido por três camadas meníngeas - a membrana dural mais externa, a membrana aracnóide média e a membrana pia mais interna.

Na região posterior do cérebro, a membrana aracnóide e pia são intervencionadas por um espaço subaracnóideo cerebroespinhal ou cheio de LCR, chamado cisterna magna.

Para realizar a injeção intracisternal das células tumorais, comece tomando um modelo de camundongo anestesiado. Prepare o mouse removendo o cabelo da superfície ventral da cabeça.

Agora, coloque o mouse na posição de bruços e prenda sua cabeça a uma estrutura estereotáxica. Posicione o nariz do mouse, apontando-o ligeiramente para baixo para nivelar a coluna com a cisterna magna.

Usando uma tesoura, faça uma pequena incisão na linha média na extremidade posterior do cérebro, no nível das orelhas.

Puxe cuidadosamente a camada muscular superficial. A cisterna magna pode ser visualizada como um triângulo invertido coberto pela membrana dural transparente.

Em seguida, pegue uma seringa contendo suspensão de células tumorais circulantes.

Mantendo a musculatura circundante retraída, insira a seringa sob a membrana da dura-máter, perfurando a membrana aracnóide. Esta etapa permite a injeção de células tumorais diretamente no LCR presente na cisterna magna.

Por fim, feche o local da incisão aplicando clipes de ferida e permita que o mouse se recupere.

Comece injetando no camundongo por via subcutânea 1 miligrama por quilograma de buprenorfina de liberação sustentada. Depois de anestesiar o mouse, prepare-o para a cirurgia. Corte o local cirúrgico com área de borda suficiente para evitar que o pelo contamine o local da incisão.

Raspe o pelo de toda a superfície da cabeça e prepare a pele usando a técnica estéril. Em seguida, sature o local com anti-séptico germicida da pele, trabalhando do centro do local para a periferia, e deixe secar.

Posicione o corpo para garantir que a coluna seja mantida nivelada com a cisterna magna. Ao aplicar uma leve tração na cauda, coloque fita adesiva na base da cauda para prendê-la.

Aplique um campo estéril ou um material de campo plástico estéril com adesivo para proteger o local da cirurgia contra contaminação. Com o pescoço em extensão total, passe as pontas da tesoura cirúrgica para baixo com uma leve pressão sobre o osso occipital, começando logo entre as pinas.

Faça uma pequena incisão na linha média de 3 a 5 milímetros ligeiramente acima da concavidade palpada. Aspire 5 microlitros da suspensão celular em uma seringa Hamilton 30G. Use uma pinça de ponta romba com uma ponta de 1 a 2 milímetros para pressionar suavemente a cisterna magna.

Introduza as pontas em uma posição fechada e abra-as enquanto aplica pressão para baixo na dura-máter. Repita a dissecção romba até que a membrana dural seja facilmente identificada e os vasos sanguíneos associados sejam visíveis na área exposta.

Enquanto segura a pinça, abra para retrair a musculatura circundante. Introduza uma agulha sem perfuração de 30G sob a dura-máter para visualizar o chanfro, certificando-se de que a agulha seja introduzida apenas um pouco além do próprio chanfro.

Implante lentamente um êmbolo de seringa e libere as células logo abaixo da dura-máter. Se for observado vazamento no local da injeção, aplique uma leve pressão com um aplicador com ponta de algodão. Feche a pele aplicando um clipe de ferida ou uma microgota de adesivo cutâneo.

Monitore os camundongos diariamente após a cirurgia durante a primeira semana. Se um camundongo parecer estar com dor ou angústia, trate-o com uma injeção subcutânea de 10 miligramas por quilograma de carprofeno, uma vez a cada 12 a 24 horas por até 5 dias, com base na consulta veterinária e na diretiva.