Cultura de células endoteliais de microvasos cerebrais de ratos: um procedimento para isolar e cultivar células endoteliais de microvasos de cérebro de ratos
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 8:27 min. • April 30th, 2023
Para isolar as células endoteliais cerebrais, primeiro, transfira um cérebro de rato colhido para um prato contendo tampão resfriado.
Depois de remover o cerebelo e os nervos ópticos, divida o cérebro em hemisférios cerebrais. Em seguida, separe o mesencéfalo do prosencéfalo.
Remova as meninges e a substância branca contendo mielina do prosencéfalo, deixando para trás o córtex cerebral para isolar os microvasos.
Em seguida, homogeneizar o córtex para quebrar o tecido nervoso e os constituintes.
Centrifugue o homogenato para remover os detritos celulares e a mielina.
Posteriormente, trate o pellet de tecido com um coquetel de digestão contendo enzimas colagenase, dispase e desoxirribonuclease.
As colagenases e dispases digerem a matriz extracelular que incorpora os microvasos, soltando os fragmentos de microvasos do tecido. As desoxirribonucleases degradam qualquer DNA livre liberado das células lisadas.
Misturar o volume desejado do homogenato digerido com um meio de gradiente de densidade adequado e centrifugar.
Descarte a mielina e a camada superior contendo células parenquimatosas cerebrais, seguidas pelo sobrenadante.
Agora, trate o pellet contendo microvasos com o coquetel de
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