Isolamento de células cerebrais de larvas de peixe-zebra: uma técnica para obter neurônios, macrófagos e microglia intactos do tecido cerebral do peixe-zebra

O cérebro do peixe-zebra consiste em neurônios - células nervosas que desempenham um papel proeminente no processamento de informações. Além disso, compreende uma população de células imunes de suporte, incluindo macrófagos e micróglia, que habitam o espaço interneuronal.

Para isolar todos esses tipos de células cerebrais de um peixe-zebra, primeiro pegue as larvas de peixe-zebra anestesiadas em uma placa de Petri contendo meios apropriados.

Visualize o peixe-zebra sob um estereomicroscópio e corte as cabeças larvais acima do saco vitelino para manter o cérebro intacto.

Transferir as cabeças excisadas para um homogeneizador cheio de meios pré-refrigerados, colocados sobre gelo. A baixa temperatura ajuda a prevenir a degradação das células cerebrais.

Com um pilão, homogeneizar o tecido cerebral do peixe-zebra. A homogeneização desintegra a matriz extracelular e inicia a dissociação de neurônios, macrófagos e micróglia do tecido cerebral.

Esta etapa também separa a mielina - uma camada isolante rica em lipídios - dos neurônios.

Passe o homogeneizado por uma peneira para prender grandes aglomerados de células.

Centrifugue o filtrado para peletizar as células e os fragmentos da bainha