Isolamento de DNA livre de células circulantes (cfDNA): um procedimento de membrana à base de sílica para extrair cfDNA do plasma sanguíneo de pacientes com câncer

Os DNAs livres de células circulantes ou cfDNAs são fragmentos curtos de DNA liberados principalmente por células cancerígenas submetidas à apoptose. Os cfDNAs são biomarcadores promissores do câncer e podem ser isolados de fluidos corporais, como o plasma.

Para isolar o cfDNA, primeiro obtenha uma amostra de plasma de um paciente com câncer. Em seguida, trate o plasma com um tampão de lise contendo proteinase K, sais caotrópicos e RNA transportador. Os sais caotrópicos desnaturam as proteínas, liberando cfDNAs ligados das proteínas. A proteinase K inativa as nucleases, minimizando assim a degradação do cfDNA.

Depois disso, adicione o buffer de associação desejado ao exemplo. Monte uma coluna giratória contendo matriz de sílica em fase sólida no aparelho de vácuo. Carregue a amostra na coluna. Aplique vácuo para passar a amostra através da membrana de sílica.

O RNA transportador liga-se de forma não específica às paredes do tubo. Essa ligação não específica, juntamente com a presença de sais no tampão, facilita a ligação do cfDNA à membrana de sílica, aumentando a recuperação dos cfDNAs. As proteínas e outros contaminantes não retêm na membrana.

Agora, coloque a coluna giratória em