Reação em cadeia da polimerase digital de gotículas: um método para gerar reações de PCR de nanogotículas para detectar mutações tumorais raras

A reação em cadeia da polimerase digital de gotículas ou tecnologia dPCR divide os reagentes de uma única reação de PCR em milhões de reações de PCR de nanogotículas. Esse particionamento em massa seguido de amplificação detecta uma quantidade minúscula de DNA mutante contra um grande fundo de DNA do tipo selvagem, permitindo a detecção precoce do câncer.

Para começar, aspire a mistura master de dPCR contendo oligonucleotídeos marcados com fluorescência junto com outros reagentes de PCR e um óleo estabilizador de gotículas. Adicione esta mistura principal diretamente no fundo de cada poço em um tubo de tira de PCR para evitar bolhas de ar. Em seguida, adicione amostras de DNA à mistura de reação e pipete várias vezes para misturar.

Agora, transfira toda a mistura de reação para um chip especializado de um instrumento gerador de gotículas. Monte um novo tubo de tira de PCR no instrumento gerador de gotículas. O gerador de gotículas combina a amostra e o óleo para formar nanogotículas discretas com uma área encapsulada que evita a contaminação cruzada entre as gotículas.

Quando a dropletização estiver concluída, transfira o tubo de tira de PCR para um termociclador para amplificar o