Eletroporação ex vivo de fatias cerebelares de embriões de galinha: um método para introduzir DNA de plasmídeo que codifica proteína fluorescente verde para visualizar o desenvolvimento de células granulares

As células granulares cerebelares são o tipo de neurônio mais abundante no cérebro. A camada granular externa, EGL, é composta apenas de precursores de células granulares, GCPs, que se diferenciam e migram para dentro para formar a camada granular interna, IGL.

Para visualizar o desenvolvimento de células granulares, prepare uma câmara de eletroporação anexando um ânodo à base de uma placa de Petri. Adicione meio de cultura para cobrir o eletrodo. Agora, coloque uma inserção de cultura no eletrodo coberto com meio. Transfira as fatias de cerebelo do embrião de galinha para o inserto de cultura em uma orientação sagital.

O plano sagital permite que a camada-alvo EGL seja identificada em diferentes camadas do cerebelo. Adicione uma solução de corante viscoso contendo um DNA de plasmídeo GFP sobre EGL. O DNA do plasmídeo GFP codifica uma proteína fluorescente verde que se distribui homogeneamente dentro do citoplasma da célula e permite a imagem de células vivas.

Em seguida, coloque um cátodo no meio próximo ao EGL, mas não diretamente no tecido. Em seguida, aplique vários pulsos elétricos a diferentes regiões EGL. Os pulsos elétricos induzem poros temporários na membrana celular, per