0 visualizações • 4:11 min. • July 8th, 2025
A camada mais interna da córnea suína - a porção avascular transparente do olho frontal - consiste em células endoteliais da córnea, ou CECs, suportadas pela membrana basal - a membrana de Descemet, ou DM. OS CECs mantêm a transparência da córnea e a visão ideal. Qualquer dano a eles pode afetar a visão.
Para danos seletivos de CEC, comece com um olho suíno recém-colhido em um meio adequado. Remova os tecidos circundantes. Trate o olho com um desinfetante apropriado para eliminar a contaminação microbiana da superfície. Após a lavagem com soro fisiológico, examine opticamente a parte anterior do olho para descartar quaisquer anormalidades antes da irradiação do laser.
Prenda o olho em um aparelho de fixação personalizado na frente de uma unidade de lâmpada de fenda equipada com um laser de um comprimento de onda específico. Visualize as camadas individuais da córnea. Com energia laser apropriada e posição do ponto de foco, direcione os pulsos de laser para a camada endotelial da córnea. Os pulsos focados de curta duração e alta potência causam ruptura seletiva do CEC da superfície exposta, evitando a difusão de calor, protegendo assim o DM ou o tecido estromal.
Criando uma porta de entrada próxima ao limbo - a junção corneoescleral, injete uma solução viscoelástica na câmara anterior contendo a córnea para estabilizá-la e proteger os CECs restantes. Extirpar e transferir o segmento da córnea tratado com laser para uma placa de vários poços contendo meio, com o lado do CEC voltado para cima. O modelo de lesão do endotélio da córnea ex vivo pode ser usado para estudos posteriores.
Depois de obter olhos suínos recém-enucleados do matadouro local, coloque as amostras em 4 graus Celsius, meio completo. Use uma tesoura para remover os tecidos extracelulares e mergulhe os olhos em solução oftálmica de iodopovidona a 5% por cinco minutos. Em seguida, coloque as amostras desinfetadas em PBS estéril à temperatura ambiente.
Usando um dispositivo de tomografia de coerência óptica de domínio espectral, rastreie os olhos em busca de patologias importantes do segmento anterior, como cicatrizes na córnea, edema e outras opacidades. Após a triagem, posicione os olhos na frente de uma unidade de lâmpada de fenda equipada com um laser Nd:YAG com comprimento de onda de 1064 nanômetros e um diâmetro de ponto focal de 10 micrômetros no ar. Selecione a ampliação de 12X e desvie a iluminação para visualizar as camadas individuais da córnea.
Depois de definir a energia de pulso e o ponto de foco para os parâmetros apropriados para a ablação seletiva das células endoteliais da córnea, aplique vários tiros de laser no tecido. Em seguida, sob um microscópio de dissecação, coloque uma paracentese clara da córnea perto do limbo e injete viscoelástico para estabilizar a câmara interna. Em seguida, use uma trefina de 8 milímetros para extirpar a córnea central tratada com laser e coloque a córnea isolada em um poço de uma placa de 12 poços, com o lado endotelial voltado para cima. Quando todas as córneas tiverem sido coletadas, adicione 3 mililitros de meio completo a cada poço de amostra e incube as amostras por até três dias a 37 graus Celsius.