Isolamento de células endoteliais da aorta suína (pAEC): um método baseado em enzimas para isolar células endoteliais da aorta abdominal suína colhida

A aorta - a principal artéria que transporta sangue oxigenado do coração para o corpo - é composta por três camadas ou 'túnicas': uma íntima interna, uma média média e uma adventícia externa. As células endoteliais ou CEs estão presentes na íntima como uma monocamada fina e contínua sobre uma membrana basal de suporte que consiste em proteínas estruturais, principalmente colágeno.

Para isolar CEs, comece com uma aorta suína colhida em uma placa de cultura. Extirpar suas extremidades e qualquer tecido aderente circundante para evitar a contaminação das células não endoteliais. Lave a aorta com tampão contendo antibióticos para inibir o crescimento microbiano.

Passe uma sutura cirúrgica estéril pela aorta e amarre uma de suas extremidades, mantendo a sutura dentro do lúmen. Prenda a extremidade amarrada e retraia a sutura para inverter completamente a aorta. Isso expõe a íntima contendo CE à digestão enzimática. Trate a aorta com solução de colagenase pré-aquecida e de baixa concentração para uma atividade enzimática ideal e incube.

A colagenase decompõe as proteínas de colágeno presentes na membrana basal subjacente aos CEs, iniciando sua dissociação. Após a incubação, adicione tamp