Coloração com ácido periódico de Schiff de células: uma técnica in vitro para detectar níveis de glicogênio em células mononucleares do sangue periférico

As células mononucleares do sangue periférico, ou PBMCs, são células sanguíneas circulatórias com núcleos grandes e únicos, compreendendo linfócitos B e T, células assassinas naturais, monócitos e células dendríticas. As PBMCs armazenam o excesso de glicose na forma polimérica como glicogênio - um polissacarídeo ramificado - em seu citoplasma.

Para detectar a presença de glicogênio em PBMCs, prepare um esfregaço uniforme de PBMCs isolados em uma lâmina de vidro. Trate as células com formalina - uma solução fixadora, que reticula as biomoléculas celulares, preservando a integridade estrutural dos PBMCs.

Mergulhe parcialmente a lâmina em solução de amilase. Esta enzima entra nas células e hidrolisa o glicogênio nas células tratadas. Isso resulta em duas populações de células distintas - células ricas em glicogênio tratadas com enzimas, deficientes em glicogênio e não tratadas com amilase.

Cubra-os com solução de ácido periódico que converte oxidativamente os grupos hidroxila das moléculas de glicogênio em aldeídos.

Enxágue a lâmina em água para interromper a reação de oxidação e remover o excesso de ácido periódico. Trate a lâmina com reagente de Schiff, que reage com os grupos aldeí