Name: Windowing Ovos de galinha para Estudos do Desenvolvimento (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 1 s
Description: Aprenda a preparar ovos de galinha para experimentos neurobiológicos usando técnicas de windowing. Este método otimiza a sobrevivência embrionária e facilita mapeamento de destino celular em estudos de desenvolvimento.

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1. Retire os ovos da incubadora <ol><li> Manter a 37 ° C com umidade relativa acima de 60% definido. </li><li> Retire os ovos, vire ovos 90 ° para que a grande base está horizontal. </li></ol> 2. Ovos cotonete para esterilizar <ol><li> Saturar uma pilha de gaze não esterilizada com etanol 70%. </li><li> Use 2-3 peças de algodão até 5 ovos. Descartar quando a gaze está suja. </li></ol> 3. Site remoção preparando albumen <ol><li> Cortar e colocar um 1 &quot;x 1&quot; pedaço de fita plástica 3M acaba de sair da base para proteger a área onde a albumina será retirado. </li></ol> 4. Remoção de albumina <ol><li> Use a ponta de uma tesoura para fazer um pequeno buraco no meio da fita. </li><li> Usando uma seringa de 10 cc com um calibre 18, de 1 polegada agulha, lentamente broca a agulha através do orifício feito pela tesoura. </li><li> Disco a agulha para baixo em um ângulo de 45 ° C para a parte inferior do ovo. </li><li> Inclinação da agulha em direção ao centro e elaborar 3-4 mL de albumina. </li></ol> 5. Windowing <ol><li> Corte um 3 &quot;x 3&quot; pedaço de fita plástica e esticá-la para caber no topo do ovo. Estender os cantos da praça em torno das extremidades arredondadas da superfície horizontal dos ovos, tomando cuidado para não puxar demasiado duro. Puxe a fita para que ele seja apertado contra a superfície dos ovos sem dobras. </li><li> Usando um par de sharp-reta quatro tesouras &quot;dissecação, torcer um buraco no centro inferior da área onde a fita foi colocada. Lentamente orientar a menor lâmina da tesoura no ovo certificando-se de manter as pontas para cima contra o interior do o shell. direto a lâmina para a base e, lentamente, começam a cortar a casca. Prossiga de forma anti-horário, parando pouco antes de chegar ao centro da parte superior. Remover a tesoura e repita indo na direção oposta até que apenas uma pequena porção do ovo permanece ligado. Certifique-se o óvulo é fertilizado. Feche a janela. </li></ol> 6. Encerramento, reabertura e selando o ovo. <ol><li> Cortar cerca de um 2-3 &quot;de comprimento por 1 / 2&quot; fita plástica de largura e fechou a janela para que ele se encaixa de volta para o buraco que foi cortada. Tomar outro 1 x 1 &quot;pedaço de fita e selar o buraco do qual o óvulo foi drenado. Use uma pinça para reabrir o ovo para fazer quaisquer manipulações. Quando você estiver pronto para retornar os ovos para a incubadora, corte um pedaço da fita que é grande o suficiente para selar a janela e cobrir toda a superfície horizontal do ovo. </li></ol>

<ol><li>Cramer, K. S., Fraser, S. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 224, 138-151 (2000).</li>
<li>Cramer, K. S., Bermingham-McDonogh, O., Krull, C. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 269, 26-35 (2004).</li>
<li>Cramer, K. S., Cerretti, D. P., Siddiqui, S. A. Dev Biol. 295, 76-89 (2006).</li>
<li>Huffman, K. J., Cramer, K. S. Dev Neurobiol. 67, 1655-1668 (2007).</li>
<li>Krull, C. E. Dev Dyn. 229, 433-439 (2004).</li>
<li>Gerlach-Bank, L. M., Cleveland, A. R., Barald, K. F. Dev Dyn. 229, 219-230 (2004).</li>
</ol>

Este método permite a sobrevivência a longo vezes seguintes manipulações experimentais. Por exemplo, tintura de rotulagem estudos permitiram a sobrevivência de E10 ou mais tarde, em um estudo de mapeamento de destino (1). Além disso, ela tem sido usada para estudos de eletroporação in ovo que fornecem alteração dos níveis de expressão de genes e desenvolvimento necessário para avançar para estágios mais avançados de desenvolvimento (2-6). Esta técnica de janelas pode ser usado em combinação com qualquer procedimento que requer a sobrevivênc...

<table><tbody><tr><td>Incubadora rotativa</td><td> </td><td>Profi</td><td></td><td>Manter a 37&amp;deg; C com umidade relativa acima de 60%</td></tr><tr><td>EtOH 70%</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>gaze</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>Fita plástica 3M</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>Seringa de 10 cc</td><td> </td><td></td><td></td><td>1/ovo</td></tr><tr><td>Agulhas 18G</td><td> </td><td></td><td></td><td>Agulha de 1&amp;#189; polegada, 1 por seringa</td></tr><tr><td>Tesoura de dissecação</td><td> </td><td></td><td></td><td>Lâminas retas afiadas de 4&quot;</td></tr><tr><td>Ovos fertilizados</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr></tbody></table>

windowing ovos de galinha para estudos do desenvolvimento

Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies

O estudo do desenvolvimento foi muito facilitada pelo uso do embrião de galinha como modelo experimental. A facilidade de acesso do embrião tem permitido experimentos para mapear destinos célula usando várias abordagens, incluindo pintinho de codorna quimeras e rotulagem corante focal. Além disso, permite a perturbações molecular de vários tipos, incluindo a colocação de proteína revestido contas ea introdução de DNA plasmídeo usando em eletroporação in ovo. Esses experimentos produziram dados importantes sobre o desenvolvimento dos sistemas nervoso central e periférico. Para muitos desses estudos, é necessário para abrir a casca de ovo e religar-lo sem perturbar o crescimento do embrião. O embrião pode ser examinada em sucessivos estágios de desenvolvimento de re-abertura da casca de ovo. Apesar de existirem vários métodos excelentes para a abertura de ovos de galinha, neste artigo vamos demonstrar um método que foi otimizado para o tempo de sobrevivência longa. Neste método, o óvulo fica do seu lado e uma pequena janela é cortado no shell. Após o procedimento experimental, a casca é usada para cobrir o ovo para a duração do seu desenvolvimento. Fita plástica que recobre a casca do ovo protege o embrião e ajuda a manter a hidratação durante o restante do período de incubação. Este método tem sido utilizado início em dois dias de incubação e permitiu a sobrevivência através madura idades embrionárias.

A facilidade de acesso do embrião tem permitido experimentos para mapear destinos célula usando várias abordagens, incluindo pintinho de codorna quimeras e rotulagem corante focal. Neste artigo vamos demonstrar um método de preparação de ovo que foi otimizado para os tempos de sobrevivência a longo.

Windowing Ovos de galinha para Estudos do Desenvolvimento

O estudo do desenvolvimento foi amplamente auxiliado pelo uso do embrião de galinha como modelo experimental. A facilidade de acessibilidade do embrião tem...

Bem-vindo ao Laboratório Kramer. Sou Matt Korn, do departamento de Neurobiologia e Comportamento da Universidade da Califórnia em Irvine. Hoje vou mostrar como preparar ovos de galinha para diversas manipulações, incluindo a colocação de microesferas, a injeção de corantes ou a exploração dentro do ovo.Então, sem mais delongas, vamos começar. Ok, então vamos seguir em frente e limpar o ovo. O motivo é que há muitas coisas que podem ser depositadas nele no incubador.Vamos selar isso com fita. Não queremos que pequenos fragmentos entrem na área onde a janela será aberta para o ovo, aumentando a chance de o embrião morrer até o momento em que desejarmos removê-lo. Então, se você observou no incubador, os ovos estão posicionados com o lado maior voltado para cima.O que vamos fazer é pegar o ovo e girá-lo para o lado. Isso vai ter dois efeitos. Primeiro, nossa janela ficará bem aqui; em segundo lugar, o embrião precisa flutuar para a parte superior para que possamos realizar qualquer tipo de manipulação.Então, vou colocar alguns aqui fora da prateleira que estava na incubadora, colocando-os em um suporte de ovos de papelão. Na verdade, esta é a peça que vem na caixa quando os ovos são e

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Uma abordagem para análise da migração e destino final dos aviários células da crista neural em codornas de-bico embriões quiméricos é descrito. Este método é uma técnica simples e direta para rastrear células da crista neural durante a migração e diferenciação que são de outra maneira difícil distinguir dentro de um embrião de galinha não-manipulado.

Análise de migração da crista neural e Diferenciação por Cross-espécies de Transplantes

Neste vídeo, descrevemos uma técnica para abrir a casca do ovo de um ovo de galinha fertilizado para expor sua membrana corioalantóide ou CAM carregando uma rede de vasos sanguíneos ramificados. O CAM exposto pode ser usado para modelagem de tumor in ovo.

Janela de ovo: um método de abertura de casca de ovo de galinha fertilizada para expor a vasculatura da membrana corioalantóide

Visualizar e acessar o embrião de galinha durante o desenvolvimento pode ser um desafio. Desenvolvemos um método ex ovo que é simples, econômico e pode ser facilmente usado em sala de aula ou ambiente de pesquisa. Este método fornece acesso ao embrião em estágios finais do desenvolvimento embrionário (HH 40).

Otimizado Ex-ovo A cultura de Chick embriões para estágio avançado de desenvolvimento

Este protocolo descreve três métodos sobre como obter e usar embriões de frango de 5 a 8 dias de idade e sua membrana corioalantóica (CAM) como um modelo in vivo para estudar imagens de ultrassom com contraste e entrega de drogas mediadas por microbolhas.

A preparação de embriões de frango ex ovo e vasos de membrana corioalantóica como modelo in vivo para imagens de ultrassom com contraste e estudos de liberação de drogas mediados por microbolhas

Este é um método eficaz para testar supressores ou condutores de metástase de câncer. As células, transduzidas com uma biblioteca de expressão, são injetadas na vasculatura da membrana corioallantóica do frango para formar colônias metastáticas. Colônias que têm diminuído ou aumentado a invasividade são extirpadas, expandidas, reinjetadas para confirmar seu fenótipo e, finalmente, analisadas usando alto sequenciamento de rendimento.

Descoberta de reguladores metastáticos usando um modelo de membrana corioallantóica intravital rápida e quantitativa

Embriões de frango, como modelo de desenvolvimento clássico, são usados em nosso laboratório para avaliar cardiotoxicções de desenvolvimento após a exposição a vários contaminantes ambientais. Métodos de exposição e métodos de avaliação morfológica/funcional estabelecidos estão descritos neste manuscrito.

Usando embrião de frango como ferramenta poderosa na avaliação de cardiotoxi cidades do desenvolvimento

Uma metodologia robusta foi desenvolvida para a realização de ensaios de pesquisa de alimentação ovo utilizando ovos de frango de corte comerciais não insusípidos para testar a capacidade de compostos naturais e sintéticos, neste caso, nicotinamida riboside, para influenciar o desenvolvimento e o crescimento muscular.

Em Ovo Alimentação de ovos de frango comercial: um método preciso e reprodutível para afetar o desenvolvimento e o crescimento muscular

O ensaio de contas encharcada envolve a entrega direcionada de reagente de teste em qualquer ponto de desenvolvimento para estudar a regulação da diferenciação celular e morfogênese. Um protocolo detalhado, aplicável a qualquer modelo animal experimental, para preparar três tipos diferentes de contas encharcadas e implantá-las no interdigit de um embrião de frango é apresentado.

Análise da diferenciação celular, morfogênese e padronização durante a embriogênese de frango usando o ensaio de contas encharcadas

Usamos técnicas padrão de resposta ao tronco cerebral (ABR) e aplicamos-as a galinhas filhotes, um modelo aviário precoce para função auditiva. O protocolo descreve detalhadamente as técnicas de preparação animal e aquisição da ABR, com etapas que podem se traduzir em outros modelos aviários ou roedores.

Avaliação da Resposta Auditiva do Brainstem em Filhotes de Frango

O pintinho é um organismo modelo econômico, acessível e amplamente disponível para uma variedade de estudos. Aqui, uma série de protocolos é detalhada para entender os mecanismos moleculares subjacentes ao desenvolvimento e regeneração do ouvido interno das aves.

In Ovo e Ex Ovo Métodos para estudar o desenvolvimento do ouvido interno aviário

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Windowing Ovos de galinha para Estudos do Desenvolvimento

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