Windowing Ovos de galinha para Estudos do Desenvolvimento

Bem-vindo ao Kramer Lab. Eu sou Matt Korn, departamento de Neurobiologia e Comportamento da Universidade da Califórnia em Irvine. Hoje mostrarei como preparar ovos de galinha para uma variedade de manipulações, incluindo colocação de contas, injeção de corantes ou exploração in ovo.

Então, sem mais delongas, vamos começar. Ok, então vamos limpar o ovo. A razão é que há muitas coisas que poderiam ser colocadas na incubadora.

Vamos selar isso com fita adesiva. Não queremos que nenhum pequeno pedaço se espalhe por onde a janela vai pegar o ovo e aumentar a chance de que o embrião morra no momento em que quisermos retirá-lo. Então, se você viu da incubadora, os ovos estão com o lado grande voltado para cima.

Então, o que vamos fazer é pegar o ovo e simplesmente virá-lo para o lado. E isso vai fazer duas coisas. Primeiro, nossa janela estará bem aqui e, em segundo lugar, o embrião precisa flutuar até o topo para que possamos fazer qualquer tipo de manipulação.

Então, vou colocar alguns aqui do rack que estava na incubadora para um porta-ovos de papelão. Esta é realmente a peça que vem na caixa quando os ovos são entregues. Então, por hoje, vamos usá-lo apenas para segurar os ovos.

Agora o arranjo é, depende de você. Eu gosto de fazer isso dessa maneira porque posso acessar todos os ovos a qualquer momento e nenhum deles está se tocando. No caso de eu encontrar um que estivesse solto que tivesse uma rachadura e a deixasse cair, todos eles meio que têm um pouco de espaço um do outro.

Então, vou pegar minha gaze aqui e tirar uma bela pilha como essa e dividi-la em duas. Vou pegar 70% de álcool aqui e vou enchê-lo até sentir o fundo ficando úmido. E isso é porque vou usar toda essa pilha para limpar todos os ovos.

Então, vou tirar alguns do topo, ir em frente e realmente fazer o topo, mas, na verdade, quase contornar o ovo inteiro aqui. E depois que isso é feito, o álcool seca muito rapidamente e então podemos ir em frente e colocar fita adesiva nele. A fita vai grudar bem e, quando eu terminar uma série, geralmente a primeira está seca e podemos prosseguir para a próxima etapa na preparação do ovo.

Então, novamente, coloque-o de volta no lixo e estamos prontos para ir para a próxima etapa. Ok, agora que todos os nossos ovos foram esfregados com o álcool, podemos ir em frente e fazer um orifício de drenagem no lado grande do ovo, a base do ovo. E isso nos permitirá entrar e extrair um pouco de albumina, porque se não extrairmos a albumina, o embrião não se encaixa corretamente.

Não podemos fazer nenhuma manipulação. Então, isso envolve apenas eu pegar uma lâmina e pegar essa fita plástica. É um pouco elástico, o que é ótimo.

Isso não apenas nos permite expandir sobre um buraco se for um pouco maior do que gostaríamos, mas quando realmente cobrirmos o ovo inteiro, precisaremos esticá-lo. Portanto, a área onde a janela estará está totalmente coberta. Então, vou cortar a peça assim e depois fazer uma tira de cerca de um milímetro.

E então, a partir disso, posso fazer um pedaço de fita quadrada de cerca de um milímetro. E então, a partir disso, vou colocá-lo logo acima, à esquerda da data. Basta colocá-lo ali e você pode vê-lo.

Está aderindo muito bem. Então eu posso voltar para a tira que já fiz, cortar outro pedaço de fita milimétrica. E, novamente, basta colocá-lo à esquerda do número lá, que na verdade é a parte superior do ovo.

Agora que viramos de lado, está para a direita. E mais uma peça aqui. Agora não estou usando luvas porque usar luvas fará com que essa fita grude nas luvas e lavei minhas mãos.

Não estou realmente preocupado com qualquer outra coisa contaminando o ativo neste momento. Então, vou pegar uma tesoura com a ponta afiada. Vou entrar no centro de onde coloquei a fita e vou girá-la no sentido anti-horário até preenchê-la e quebrar um pouco.

E você verá que há um pequeno buraco lá. Agora, o buraco não precisa ser muito grande porque, assim que colocarmos essa seringa lá, ela fará com que o buraco seja grande o suficiente. Mas isso é para que não entremos direto com uma agulha e tentemos quebrar o ovo com isso, porque muitas vezes isso fará com que todo o lado do ovo se quebre.

Então não podemos mais usar o ovo. Ok, então agora vou drenar o ovo. Temos aquele pequeno orifício na lateral e vou usar esta seringa de 10 mililitros e uma agulha de calibre bastante grande para extrair a albumina.

Agora eu quero cerca de três ou quatro mililitros, definitivamente mais do que três, não muito mais do que quatro e meio ou cinco. Isso permitirá que nosso embrião que agora está sentado no topo caia um pouco longe da casca. E então seremos capazes de fazer nossas manipulações.

Então, entrando em um ângulo de 45 graus, estou embaixo da gema. E então eu só quero girá-lo um pouco para a minha direita apenas para me esgueirar por lá e você pode sentir a ponta da agulha tocando o fundo do ovo. E eu vou extrair apenas cerca de três ou quatro e sai muito bem.

Vou colocar essa albumina no balde da minha cintura aqui e agora posso continuar com os outros ovos. Ok, então vou seguir em frente e continuar. E você verá aqui que o buraco que eu fiz para a drenagem é um pouco maior do que eu gostaria, mas que acabou sendo bom.

O que eu quero me preocupar é que, enquanto estou enfiando a agulha, não a quebro mais. Então eu vou seguir em frente e fazer isso. Ok, então eu já posso ver que o ovo tem um pouco de rachadura.

Agora, pequenas rachaduras estão bem, mas você precisa se preocupar quando elas se estendem para outro plano do ovo. E neste caso sim. Você pode ver isso do buraco.

Ele se estende praticamente até o topo. E, de fato, é aqui que nossa janela vai ficar. Então, infelizmente para este ovo, vamos ter que descartar este.

E não há nada de especial em descartá-lo. Você não precisa escrever um protocolo específico nem nada. Só vou colocá-lo no balde de lixo.

Usamos essas latas de lixo pretas para designá-las como resíduos animais, mas fora isso, já foi resolvido. Podemos passar para o próximo ovo. Ok, agora que drenamos todos os nossos ovos, podemos ir em frente e cobrir o orifício de drenagem.

Agora, isso é importante porque, se não entrarmos na incubadora, podemos obter uma tremenda evaporação do que resta da albumina. E então um ovo que está seco é um ovo que está morto. Então, vamos pegar aproximadamente o mesmo tamanho de fita adesiva e colocá-la sobre o buraco e não teremos que nos preocupar em entrar nesse buraco novamente.

Em alguns casos, se você decidir que gostaria de tentar drenar mais albumina de um ovo, uma vez aberto, esse orifício atua como uma área selada na qual você pode enfiar uma agulha e não perderá muita albumina. Ok, não é? Ok, então agora vamos cobrir os ovos com um pedaço de fita adesiva de bom tamanho.

E eu meio que comparo isso a colocar um pedaço de fita adesiva sobre um balão antes de colocar um pequeno alfinete nele. O legal é que o balão não estoura e, neste caso, uma pequena fita adesiva sobre o ovo. O ovo não racha em vários lugares e, em seguida, a janela pode ser selada e, quando a janela se fecha, porque usamos fita adesiva, ela meio que cria uma pequena vedação agradável e não precisamos nos preocupar com qualquer evaporação.

Então você pode ver que o tamanho da fita é, provavelmente é o maior que eu cortei até agora, mas mesmo assim eu vou esticá-la um pouco e realmente puxá-la, um pouco de tensão lá e colocá-la sobre o ovo. E eu vou dar a volta aqui e esticá-lo com muito cuidado sobre o ovo para que não haja vincos bem acima de onde minha janela vai ficar. E você pode redefinir um pouco a fita.

É, não está grudando tanto que você tenha que se preocupar. Uma vez que está preso, está preso. E você pode ver que essa área geral aqui é onde eu vou seguir em frente e cortar a janela.

Ok, agora que temos fita adesiva em todos os ovos, podemos ir em frente e cortar uma janela na parte superior. Esta pode ser a parte mais difícil e muitas vezes é aqui que você perderá a maioria dos seus ovos. Então, vou dar uma boa limpeza na minha tesoura com gaze que continha álcool e depois secá-la.

O álcool praticamente seca sozinho, mas você não quer que o álcool vá direto para o ovo. Então, vou entrar no meio de onde está a fita e, novamente, usar esse movimento no sentido horário anti-horário até ouvi-la estalar um pouco. E então eu sei que minha lâmina está dentro.

E então eu meio que quero mover minha tesoura para que ela fique quase plana contra a superfície do ovo. E então é só fazer pequenos recortes até que eu possa colocar toda a tesoura lá. E eu vou voltar para o outro lado depois de fazer cerca de um semicírculo e não quero completar o círculo porque quero uma janela, mas então posso simplesmente ir em frente e abrir o ovo.

E agora parece que há mais ou menos a idade que eu esperava que eles tivessem, não têm muitos vasos sanguíneos, mas há um pouco de sangue ao redor de onde o embrião está sentado principalmente da região do delírio que o sangue já começou e os batimentos cardíacos se foram. Então, eu vou fechar isso, deixá-lo em cima assim e dar a volta novamente e eu vou fechar as janelas. E, novamente, apenas plana para a superfície e de volta para o outro lado.

E tudo bem, então temos algumas bolhas aqui e acontece que o embrião está de lado. Agora há duas coisas que podemos fazer agora. Se tivermos muitos ovos e não estivermos preocupados em usar cada um deles, podemos ir em frente e jogar fora.

Ou o que podemos fazer é fechar a janela e apenas configurá-la para que o embrião flutue até o topo onde queremos novamente. E quando chegarmos a ele em nossas manipulações, pode estar onde queremos. Caso contrário, podemos descartá-lo naquele momento.

Então, o que eu fiz aqui foi apenas colocá-lo em um ângulo. Você terá um pouco de escoamento de albumina, mas ajudará esse embrião a voltar para onde precisa estar. Ok, agora que temos todas essas janelas, precisamos ter certeza de que elas estão fechadas e só queremos que elas sejam fechadas antes de fazermos qualquer manipulação.

E então podemos ir em frente e selar novamente o ovo. Mas se tivermos uma janela aberta, às vezes o jugo pode escorregar. Se você sabe que o ovo apenas tomba um pouco quando você está andando de um cômodo para o outro, você não quer que a coisa toda caia.

Então, tudo o que estou fazendo é cortar outro milímetro de comprimento, ou desculpe, um milímetro de largura, provavelmente cerca de três, dois ou três milímetros e comprimento pedaço da fita plástica. E eu meio que gosto de colocá-lo lá bem no meio. E se eu puder puxá-lo para baixo na frente do ovo, então ele meio que o torna apertado.

E você pode ver onde a janela se encaixa, exatamente onde estava a outra fita, onde cortamos a janela e isso a torna bem selada para este momento. Quero dizer, vamos seguir em frente e fazer algumas manipulações em apenas um minuto, então não precisa ser totalmente hermético. Então é assim que você prepara e coloca seus ovos em janela.

Então, boa sorte com seus experimentos.