Name: Canulação da glândula submandibular do rato através do duto salivar de Wharton (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: Aprenda a técnica de canulação do duto de Wharton em camundongos para infusão de células-tronco na glândula submandibular. Este método viabiliza pesquisas em medicina regenerativa para disfunções salivares.

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Os autores são gratos a Dr. Ana Cotrim, para consulta técnica e Dr. Monzur Murshed para o equipamento. Este trabalho foi financiado em parte pelos Institutos Canadenses de Pesquisa em Saúde.

1. Descrição processuais <ol><li> Por via subcutânea injetar 1 ml / g de peso corporal de 0,5 monohidratada sulfato mg / ml atropina (Cat # 11330, Fluka, EUA) em cada um mouse para evitar que a secreção salivar de interromper o movimento das infusões. </li><li> Anestesiar cada rato com um peso corporal mL / g de ketamina a 100 mg / ml e 20 mg / ml solução xilazina (Phoenix Scientific, AR, EUA) injetou intra-peritoneal (IP) </li><li> Posicione o mouse sobre uma plataforma de plástico feito sob medida na posição ventral: os incisivos superiores estão bloqueados em um fio de metal, e os incisivos inferiores são viciadas em um fio elástico, a fim de manter a boca aberta. </li><li> Use uma seringa de insulina com uma agulha de calibre 29 (Cat # 600145, Tyco Healthcare, MA, EUA), colocado dentro de um tubo de polietileno 0,58 mm de diâmetro (Cat # 427410, Becton Dickinson, MD, EUA; Fig. 2). O tubo de polietileno inserido é 5 milímetros sobre a ponta de uma agulha de 29 gauge. A agulha é usada como um guia rígido para mover o tubo de polietileno em duto de Wharton. O tubo de polietileno é inserido 3-5 mm dentro do duto. Note que apenas o tubo de polietileno entra no ducto da glândula salivar, enquanto a agulha permanece fora do duto. Injetar 50uL de filtrado 0,4% solução de azul de tripano mancha (Cat # 15250, Gibco, EUA) na glândula submandibular via duto de Wharton, que está localizado logo abaixo da língua. A infusão é entregue de forma constante com pressão positiva sobre o pistão da seringa; o dedo permanece no pistão, mesmo depois de todos os infusão tenha sido entregue à glândula, a fim de evitar um refluxo da infusão intra-oral. A solução de azul de tripano é usado no vídeo como um corante para demonstrar a técnica. </li><li> epois a injeção da solução de azul de tripano, o rato foi sacrificado antes da dissecção. A glândula salivar é cirurgicamente expostas, a fim de determinar quanto das infusões realmente permaneceu na glândula. </li></ol> 2. Resultados representativos: Após as infusões foram injetados, o rato foi dissecado para expor cirurgicamente a glândula salivar pós-canulados. Como mostrado na imagem-2, a coloração escura do ducto de Wharton fornece evidências de que a solução de azul de tripano foi infundida com sucesso. <img src="/files/ftp_upload/3074/3074fig1.jpg" alt="Figura 1"> Figura 1. Canulação da glândula submandibular do rato. <img src="/files/ftp_upload/3074/3074fig2.jpg" alt="Figura 2"> Figura 2. Tubo de polietileno é envolto em torno da ponta de uma agulha de 29 gauge. A agulha da seringa é usada como um guia rígido para mover o tubo de polietileno em duto de Wharton. O tubo de polietileno está inserido (canulados) mm 3-5 no interior do duto. Note que apenas o tubo de polietileno entra no ducto da glândula salivar, enquanto a agulha permanece fora do duto.

<ol><li>Fox, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acquired+salivary+dysfunction.+Drugs+and+radiation%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Acquired salivary dysfunction. Drugs and radiation.</a> Ann N Y Acad Sci. 842, 132-137 (1998).</li>
<li>Bhide, S. A., Miah, A. B., Harrington, K. J., Newbold, K. L., Nutting, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiation-induced+xerostomia%3A+pathophysiology%2C+prevention+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Oncol+%28R+Coll+Radiol%29%22%5BJournal%5D)">Radiation-induced xerostomia: pathophysiology, prevention and treatment.</a> Clin Oncol (R Coll Radiol). 21, 737-744 (2009).</li>
<li>Redman, R. S., Ball, W. D., Mezey, E., Key, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dispersed+donor+salivary+gland+cells+are+widely+distributed+in+the+recipient+gland+when+infused+up+the+ductal+tree%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech+Histochem%22%5BJournal%5D)">Dispersed donor salivary gland cells are widely distributed in the recipient gland when infused up the ductal tree.</a> Biotech Histochem. 84, 253-260 (2009).</li>
</ol>

Todos os experimentos foram aprovados pelo comitê de ética da Universidade e estavam de acordo com as diretrizes do Canadian Council on Animal Care.

A dificuldade em utilizar este método de canulação é evitar que o refluxo da solução injetada. Mesmo se a solução azul de tripano foi temporariamente migraram para a glândula salivar com sucesso, a secreção de saliva pode interferir com as infusões e causar refluxo da solução de azul de tripano para fora da glândula. Como precaução, além de usar atropina para inibir a secreção de saliva, a cânula de polietileno deve permanecer no duto de Wharton eo pistão da seringa realizada durante 60 segundos após as infusões foram d...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente </td><td> Tipo </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários (opcional) </td></tr><tr><td> Atropina </td><td> Droga </td><td> Fluka </td><td> 11330 </td><td> Para inibir a secreção de saliva </td></tr><tr><td> Ketamina </td><td> Droga </td><td> Phoenix Scientific </td><td></td><td> Sedação </td></tr><tr><td> Xilazina </td><td> Droga </td><td> Phoenix Scientific </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Tubos de polietileno (0,58 mm de diâmetro) </td><td> Tubo </td><td> Intramedic PE-10, Becton Dickinson Diagnostic Systems </td><td> 427410 </td><td> Para inserir mais de ponta da agulha para evitar lesão tecidual durante a inserção no ducto de Wharton. </td></tr><tr><td> Seringa de insulina Ultra Comfort (com uma agulha de 29G) </td><td> Seringa </td><td> Tyco Healthcare </td><td> 600145 </td><td></td></tr><tr><td> 4% azul de tripano </td><td> Mancha </td><td> Gibco </td><td> 15250 </td><td></td></tr></tbody></table>

canulação da glândula submandibular do rato através do duto salivar de wharton

Cannulation of the Mouse Submandibular Salivary Gland via the Wharton's Duct

Hipofunção da glândula salivar é grave freqüentemente encontrados em pacientes com síndrome de Sjögren e aqueles que recebem a irradiação terapêutica em sua cabeça e pescoço para tratamento de câncer. Ambos os grupos de sintomas dos pacientes experiência como xerostomia (boca seca), disfagia (deficiente mastigação e deglutição), grave cárie dentária, alteração do paladar, oro-faringe infecções (candidíase), dor, mucosite e desconforto. Uma abordagem inovadora da medicina regenerativa para o tratamento da glândula salivar hipo-função é especulado no RS Redman, E Mezey et al 2009:. Células-tronco pode ser depositado diretamente pela canulação para a glândula como um método potente em reviver as funções do deficiente órgão. Presumivelmente, a migração de células-tronco estrangeiros irão se diferenciar em células glandulares funcionar como parte da glândula salivar anfitrião. Além disso, esta técnica de canulação é um método de entrega expeditos e eficazes para a aplicação clínica de transferência de genes. Aqui nós ilustrar as etapas envolvidas na realização do procedimento canulação do mouse glândula salivar submandibular via duto de Wharton (Fig. 1). C3H camundongos (Charles River, Montreal, Quebec, Canadá) são utilizados para este experimento, que foram mantidos sob condições convencionais limpa no centro de recursos McGill University animal. Todos os experimentos foram aprovados pelo comitê de ética da Universidade e estavam de acordo com as diretrizes do Canadian Council on Animal Care. Para este experimento, uma solução de azul de tripano é infundida a glândula através da abertura do ducto de Wharton, utilizando uma seringa com uma agulha de insulina 29-gauge encerrado dentro de um tubo de polietileno. Posteriormente, o mouse é dissecado para mostrar que as infusões migraram para a glândula com sucesso.

Um protocolo para a canulação do mouse glândula salivar submandibular via ducto de Wharton, é descrito. Para este experimento, a solução de azul de tripano é usado como um tintureiro para demonstrar como esta técnica efetivamente oferece infusões na glândula alvo, e sugerir a confiabilidade dessa nova abordagem como uma potencial terapia medicamentosa / célula clínicos para a regeneração das glândulas salivares.

Canulação da glândula submandibular do rato através do duto salivar de Wharton

A hipofunção grave das glândulas salivares é frequentemente encontrada em pacientes com síndrome de Sjögren e naqueles que recebem irradiação terapêutica em suas ...

Todos os experimentos foram aprovados pelo Comitê de Cuidados com Animais da Universidade McGill, e estamos em conformidade com as diretrizes do Conselho Canadense de Cuidados com Animais. O objetivo deste experimento é administrar células progenitoras ou células-tronco na glândula salivar mandibular do camundongo por meio da canulação do ducto de Wharton. Para este vídeo, uma solução de azul de tripano é usada como corante para visualizar a infusão celular.A hipofunção das glândulas salivares é um dos efeitos colaterais mais comuns da síndrome de Sjögren e da irradiação terapêutica no tratamento do câncer nas regiões da cabeça e do pescoço. A disfunção da glândula salivar pode frequentemente levar a doenças dentárias, como infecção da mucosa oral e cárie dentária. Uma abordagem inovadora da medicina regenerativa para o tratamento das glândulas salivares danificadas é a seguinte.As células-tronco podem ser depositadas diretamente na glândula por meio de cânulação através dos ductos da glândula salivar, um método eficaz para restaurar as funções da glândula comprometida; presumivelmente, as células-tronco estranhas migradas irão se diferenciar em células glandulares para atuar como parte da glândula salivar. Aqui ilustramos os passos envolvidos na realização do procedimento de cânulação na glândula salivar submandibular de camundongo por meio do ducto de Wharton. Para este experimento, a solução trip e azul é injetada na glândula através da abertura do ducto de Wharton com uma agulha de 29 g e seringa ultraconfortável.Posteriormente, o camundongo é dissecado para demonstrar que as infusões migraram com sucesso para a glândula. Passo um: um microlitro por grama de peso corporal de sulfato de atropina monoidratado a 0,5 miligramas por mililitro é injetado subcutaneamente em cada camundongo para impedir que as secreções salivares interfiram no deslocamento das infusões. Passo dois: um microlitro por grama de peso corporal de uma solução de 100 miligramas por mililitro de cetamina e 20 miligramas por mililitro de xilazina é injetado intraperitonealmente em cada camundongo para sedá-lo.Passo três. Após o processo de sedação, o camundongo é colocado sobre uma plataforma. Na posição ventral, o incisivo maxilar é fixado em um fio metálico e o incisivo mandibular é preso a um fio elástico, a fim de manter a boca aberta.Passo quatro: utilizando uma agulha ultraconfortável de 29 G e uma seringa, infunde-se a solução azul de trian a 0,4% filtrada na glândula salivar submandibular através do ducto de Wharton, localizado logo abaixo da língua. A agulha está agora apontada em direção à abertura do ducto de Wharton e já entrou no ducto para administrar a infusão. Passo cinco.Imediatamente após o procedimento de cânulação, a glândula salivar é cirurgicamente exposta para determinar quanto do infusão permaneceu na glândula. Após as infusões serem injetadas, o camundongo foi dissecado para exposição cirúrgica da glândula salivar pós-cânulação. Como é possível observar nesta imagem, a coloração escura do ducto de Wharton fornece forte evidência de que a solução azul tripina foi infundida com sucesso no caso da hipofunção da glândula salivar.A aplicação local, ou seja, a injeção de fármacos e células por meio deste procedimento de cânulação, pode ser percebida como uma maneira mais direta e eficaz de restaurar as funções das glândulas salivares parótida, submandibular e sublingual. Como evidente nos resultados representativos, as infusões, que neste caso consistem na solução azul de Tripan, foram depositadas com sucesso na glândula salivar submandibular do camundongo através do ducto de Wharton. Assim, esta técnica de cânulação pode ser utilizada como um modelo confiável para a medicina regenerativa da glândula salivar de camundongo.E como perspectiva futura, este procedimento pode ser um método prático para aplicações clínicas de transferência gênica. Seria uma grande satisfação que este artigo visual fosse utilizado como uma ferramenta eficaz para estudantes e pesquisadores interessados em estudos futuros na medicina regenerativa da glândula salivar.

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