Name: Laser Microdissecção Captura de tecidos de mamíferos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 34 s
Description: Aprenda microdissecção a laser para isolamento preciso de amostras de tecido mamífero usando o microscópio Leica A-S-L-M-D. Esta técnica avançada permite capturar células específicas para análise detalhada em estudos de neurociência e biologia molecular.

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Os autores não têm nada a declarar.

laser microdissecção captura de tecidos de mamíferos

Laser Capture Microdissection of Mammalian Tissue

Laser microscopia de captura, também conhecido como microdissecção a laser (LMD), permite ao usuário isolar um pequeno número de células ou tecidos de congelados ou fixadas em formalina, seções parafina do tecido. Técnicas LMD contar com uma membrana lábil termo colocado tanto em cima, ou embaixo, na seção de tecido. Em um método, a energia de laser focalizado é usado para derreter a membrana sobre as células subjacentes, que podem então ser retirado da secção de tecido. No outro, a energia do laser vaporiza a folha ao longo de um caminho &quot;desenhada&quot; no tecido, permitindo que as células selecionadas para cair em um dispositivo de coleta. Cada técnica permite a seleção de células com uma resolução mínima de microns diversas. DNA, RNA, proteínas, lipídios e as amostras podem ser isolados e analisados ​​a partir de micro-amostras dissecados. Neste vídeo, demonstramos o uso da Leica AS-LMD instrumento microdissecção a laser em sete segmentos, incluindo uma introdução aos princípios da LMD, inicializando o instrumento para uso, considerações gerais para preparação de amostras, a amostra de montagem e configuração de captura de tubos , alinhando ao microscópio, ajustando os controles de captura e capturar amostras de tecido. Laser de captura de micro-dissecção permite ao investigador para isolar amostras de populações de células pura tão pequeno como uma célula-equivalentes poucos. Isto permite a análise de células de interesse que estão livres de contaminantes vizinhos, que possam confundir os resultados experimentais.

Laser Microdissecção Captura de tecidos de mamíferos

A microscopia de captura a laser, também conhecida como microdissecção a laser (LMD), permite ao usuário isolar pequenas quantidades de células ou tecidos de amostras congeladas ou...

Olá, meu nome é Rob Edwards. Sou o diretor da instalação de microscopia de captura a laser da Universidade da Califórnia em Irvine. Vou descrever para vocês o uso do microscópio de captura a laser que temos aqui.Nosso instrumento é um Leica A-S-L-M-D, que adquirimos há aproximadamente três anos. Existem dois tipos diferentes de sistemas de captura a laser. Um deles pode ser comparado a um soldador por pontos, no qual se tem um fragmento de tecido sobre uma lâmina de vidro posicionada acima de uma membrana plástica, a qual recobre o tecido.Uma fonte a laser é então usada para derreter a membrana, efetivamente soldando localmente o tecido à membrana, e em seguida essa membrana é removida, levando consigo o tecido capturado. Ok. Para iniciar o sistema de MCL, ligamos sequencialmente vários instrumentos aqui. Começaremos com a caixa de controle A-S-L-M-D, que é ligada aqui.Em seguida, ligamos o computador, o que é bastante simples. Se você tiver uma amostra que exija óptica de fluorescência para identificar as células a serem capturadas, deverá ligar a lâmpada de mercúrio para a iluminação de fluorescência. No entanto, não utilizaremos esse recurso nesta demonstração.Se você deseja cap

laser-capture-microdissection-of-mammalian-tissue

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

O vídeo descreve a dissecção a laser do modelo de cocultura organotípica 3D com precisão em nível de mícron. Em modelos organotípicos 3D, constituintes estromais, como fibroblastos, são co-cultivados tridimensionalmente com células epiteliais cancerígenas. O modelo 3D serve como uma ferramenta experimental que permite que as interações entre invasão e estroma de câncer sejam estudadas em condições quase fisiológicas.

Microdissecção a laser: uma técnica para isolar células invasoras de câncer colorretal a partir de um modelo de cultura organotípica 3D

Microdissecção tem sido extensivamente utilizada para a análise de DNA, RNA e proteínas dentro do tecido. Microscopia captura a laser (LCM) é o método mais comumente utilizado, mas uma nova técnica de fresagem, mesodissection, é recentemente disponível. Demonstramos extração de RNA a partir de mesodissected formalina parafina fixo lâminas de tecido embebidos de Mycobacterium tuberculosis granulomas.

Uma nova abordagem para Microdissecção Recuperando<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em&gt; transcritos específicos de formalina fixo Parafina incorporado Lung granulomas

O isolamento de neurônios de dopamina individuais ou a área tegmental ventral com imunohistoquímica direta ou indireta é demonstrada usando captura a laser microdissection. São discutidos os parâmetros para o isolamento de tecido a partir de uma lâmina de vidro usando um laser de infravermelhos e a partir de lâminas de membrana usando a combinação de um laser infravermelho e ultravioleta.

Captura Laser Microdissection - uma demonstração do Isolamento de Pessoa dopamina Neurônios e região ventral tegmental Entire

O objetivo deste protocolo é usar a microdissecção por captura a laser como um método eficaz para isolar populações puras de tipos de células de tecidos heterogêneos da próstata para análise de RNA a jusante.

Captura de Laser Microdissection de Próstata Humano Epithelium para Análise de RNA

Aqui, descrevemos um protocolo para um laser reprodutíveis captura microdissection (LCM) para isolar a malha trabecular (TM) para a análise de RNA a jusante. A capacidade de analisar as alterações na expressão gênica na TM vai ajudar na compreensão do mecanismo molecular subjacente de doenças oculares relacionadas ao TM.

Captação microdissection da malha Trabecular altamente pura de olhos de rato de laser para análise de expressão do Gene

Um protocolo da microdissecção da captação do laser (LCM) foi desenvolvido para obter a quantidade suficiente de RNA de alta qualidade para a análise da expressão de gene em pilhas de osso. O estudo atual centra-se em seções do fêmur do rato. Entretanto, o protocolo de LCM relatado aqui pode ser usado para estudar a expressão de gene nas pilhas de todo o tecido duro.

Um protocolo da microdissecção da captação do laser que rende o RNA da alta qualidade dos ossos frescos-congelados do rato

Este protocolo descreve a microdissecção da captação do laser para a isolação da cartilagem e do osso das seções congeladas frescas do embrião do rato. Cartilagem e osso podem ser rapidamente visualizados por manchas violetas cresyl e coletados precisamente para produzir RNA de alta qualidade para análise transcriptômica.

Microdissecção de captura a laser da cartilagem embrionária do rato e osso para análise de expressão gênica

A microdissecção a laser (LMD) é uma técnica sensível e altamente reprodutível que pode ser usada para descobrir caminhos que mediam a heterogeneidade e invasão do glioma. Aqui, descrevemos um protocolo otimizado para isolar áreas discretas do tecido glioma usando LMD a laser seguido de análise transcritiva.

Microdissecção de Captura a Laser de Sub-regiões de Glioma para Caracterização Espacial e Molecular da Heterogeneidade Intratumoral, Oncostreams e Invasão

Um protocolo é descrito que usa microdissecção a laser para isolar tecidos nematoides individuais para sequenciamento de RNA. O protocolo não exige kits de ferramentas genéticas específicos para espécies, permitindo que perfis de expressão genética sejam comparados entre diferentes espécies ao nível de amostras de tecido único.

Microdisseção a laser para aplicações de tecido único agnóstico de espécies

Este protocolo descreve um fluxo de trabalho de alto rendimento para segmentação de regiões de interesse confirmadas pela patologia de imagens de seção de tecidos manchados e finos para enriquecimento de populações celulares resolvidas por histologia usando microdisseção a laser. Esta estratégia inclui um novo algoritmo que permite a transferência de demarcações denotando populações celulares de interesse diretamente para microscópios a laser.

Microdisseção laser industrializada e guiada por inteligência artificial para análise proteômica microescalada do Microambiente tumoral

Este protocolo descreve um método para isolar RNA de regiões histológicas definidas de tecido hepático de camundongo, fixado com paraformaldeído, composto de Temperatura Ótima de Corte, utilizando microdissecação por captura a laser, permitindo análise direcionada de expressão gênica a jusante.

Microdissecação por captura a laser de tecido hepático de camundongo fixado com paraformaldeído para análise de RNA

Aprenda microdissecção a laser para isolamento preciso de amostras de tecido mamífero usando o microscópio Leica A-S-L-M-D. Esta técnica avançada permite capturar células específicas para análise detalhada em estudos de neurociência e biologia molecular.

Laser Microdissecção Captura de tecidos de mamíferos

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