Name: CD4 + T-linfócitos Captura Usando um chip descartável microfluídicos para HIV (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T13:03:52.000+00:00
Duration: 12 min 44 s
Description: Aprenda a captura de linfócitos T CD4+ usando um chip microfluídico descartável de PDMS para diagnóstico de HIV. Este método permite quantificar células T auxiliares com precisão em ambientes com recursos limitados.

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<ol><li> Prepare canais microfluídicos com anti-CD4 + biotinlayted superfície. </li><li> Injectar 10 ml de amostra de sangue de 5 ml / min no canal microfluídicos com bomba de seringa. </li><li> Lavar o sangue de 20 ml / min para 20 min com PBS. </li><li> Injectar a solução diluída de lise FACS (diluído a 10% da solução estoque com PBS) em 5ul/min por 15 min. </li><li> Incubar por 15 min. </li><li> Injetar CD3 + solução de anticorpos primários (diluído a 10% da solução estoque com PBS) a 5 ml / min para 20 min. </li><li> Incubar por 2 horas. </li><li> Lave canal com PBS, 5 ml / min para 15 min. </li><li> Injectar 20% AF488 CD4 + de anticorpos, solução estoque 0,2% DAPI, e 10% CD3 + anticorpo secundário a 5 ml / min para 20 min, ao mesmo tempo. </li><li> Incubar por 20 min. </li><li> Lave o canal com PBS, 5 ml / min para 15 min. </li><li> Contagem de células ao microscópio fluorescente: <ol><li> White (óptica) - Preto e branco: célula e poeira </li><li> UV (DAPI) - Blue: única célula </li><li> Azul (CD4 +) - Verde: linfócitos T e monócitos </li><li> Verde (CD3 +) - Vermelho: linfócitos T só </li></ol></li></ol>

<table><tbody><tr><td>Microcanal de PDMS</td><td></td><td></td><td></td><td>Fabricado por molde SU-8</td></tr><tr><td>Sangue</td><td></td><td></td><td></td><td>Sangue doado por indivíduo humano normal. Mass General Hospital, 10 X leucócitos de alta densidade ou Brigham and Women&amp;rsquo;s Hospital.</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Tampão</td><td>Invitrogen</td><td>14190</td><td>Solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco&amp;rsquo;s 1x.</td></tr><tr><td>Solução lisadora FACS</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>349202</td><td>Diluída a 10% da solução estoque com PBS.</td></tr><tr><td>Anticorpo biotinilado anti-CD4+</td><td></td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>IM0704</td><td>Superfície preparada com anticorpo biotinilado anti-CD4+, diluído a 10% da solução estoque com PBS/BSA após mistura com 0,2 mg do estoque e 1 ml de água desionizada.</td></tr><tr><td>anti-hCD3delta de cabra</td><td>pAB</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>sc-1128</td><td>Diluído a 10% da solução estoque com PBS</td></tr><tr><td>IgG de cabra anti-coelho PE</td><td></td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>sc-3755</td><td>Anticorpo secundário para anticorpo anti-CD3, diluído a 10% da solução estoque com PBS</td></tr><tr><td>anti-CD4+ humano</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>557695</td><td>Marcar com Alexa Fluor 488, diluído a 20% da solução estoque com PBS.</td></tr><tr><td>DAPI</td><td></td><td>Invitrogen</td><td>D1306</td><td>Solução de 4&amp;rsquo;,6-dianidino-2-fenilindol, di-hidrocloreto, diluída a 0,2% da solução estoque com PBS.</td></tr></tbody></table>

cd4 + t-linfócitos captura usando um chip descartável microfluídicos para hiv

CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV

CD4 + T-linfócitos Captura Usando um chip descartável microfluídicos para HIV

Olá, meu nome é Richard Lin e sou pesquisador no grupo da Professora TI Mercy, na Divisão de Ciências da Saúde e Tecnologia de Harvard MIT. O projeto em que estou trabalhando tem como objetivo quantificar e capturar linfócitos T CD4 positivos e C3 positivos. O sangue do paciente será utilizado em contextos com recursos limitados.Aqui bem à minha frente temos um dispositivo microfill composto por PDMS, que é o polimetilsiloxano. O dispositivo, o canal propriamente dito, tem altura de 50 micrômetros e o volume total no dispositivo é de 10 microlitros. Este é, portanto, um dispositivo extremamente preciso que será usado para capturar linfócitos T auxiliares.Basicamente, o padrão diagnóstico para pacientes com HIV. Assim, a superfície do dispositivo microfluídico já foi preparada com proteína e anticorpos positivos para CD4 na seringa. Neste momento, temos apenas tampão biológico PBS com pH de 7,4, e agora iremos fluir isso pelo canal para remover o anticorpo positivo para CD4 em excesso.Nesta etapa, a taxa não precisa ser controlada, pois estamos apenas tentando remover o excesso de material, e na verdade não importa qual seja nossa taxa. Aqui é onde estarão as entradas do dispositivo

cd4-t-lymphocyte-capture-using-a-disposable-microfluidic-chip-for-hiv

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Biology

Biologia

Captura de célula usando um dispositivo micro

Este experimento visualizado é um guia para a utilização de um clone fluorescentes molecular do HIV para viver experiências imagem confocal.

Visualizando transferência de células-célula de HIV usando Clones fluorescente de HIV e Microscopia Confocal ao vivo

Nós desenvolvemos um vetor lentiviral que possui, além da LTR Tat-responsivo, o elemento Rev-resposta (RRE), que pode regular a expressão do gene repórter de uma forma HIV-1 Tat e Rev-dependente. O vetor permite a detecção específica de HIV replicar em células vivas através da expressão da GFP.

Marcação específica de HIV-1 células positivas utilizando um Vector Rev-dependente Lentivirus Expressando a Proteína Verde Fluorescente

Um chip microfluídico integrado termoplástico tem sido desenvolvido para utilização como um diagnóstico molecular. O chip realiza a extracção dos ácidos nucleicos, a transcriptase reversa, e PCR. Os métodos para fabricar e executando o chip encontram-se descritos.

Fabricação de chips microfluídicos e método para detectar a gripe

Neste artigo apresentamos um chip microfluídico para análise única célula. Ele permite a quantificação de proteínas intracelulares, enzimas, co-factores, e os segundos mensageiros, por meio de ensaios fluorescentes ou imunoensaios.

Um chip microfluídico para a Versátil Análise Química de células individuais

Este protocolo descreve os métodos na construção de um modelo humanizado de camundongo medula óssea/fígado/timo com imunidade projetada baseada em células-tronco contra a infecção pelo HIV.

De células-tronco Baseado Imunidade Engineered contra infecção por HIV no modelo humanizado mouse

Descrito é uma metodologia para quantificar a expressão dos 96 genes e 18 proteínas de superfície por células únicas ex vivo, permitindo a identificação de diferencialmente expressaram genes e proteínas em células infectadas por vírus em relação as células não infectadas. Aplicamos a abordagem de estudo CD4 infectadas SIV+ T células isoladas de macacos rhesus.

Célula única quantificação de mRNA e expressão de proteínas de superfície em CD4 infectados por vírus de imunodeficiência simiana+ T células isoladas de macacos Rhesus

Apresenta-se aqui um protocolo para uma abordagem de imagem de fluorescência, multiplex immunofluorescente cell-based detection of DNA, RNA and protein (MICDDRP), um método capaz de visualização simultânea de fluorescência unicelular de proteínas virais e ácidos nucleicos de diferentes tipos e filamentos. Essa abordagem pode ser aplicada a uma gama diversificada de sistemas.

Imagem de fluorescência multiplexada de célula única para visualizar ácidos nucleicos virais e proteínas e monitorar HIV, HTLV, HBV, HCV, Zika Virus e Influenza Infection

Aqui, apresentamos um protocolo no qual células únicas são monitoradas para eventos agudos e infecção produtiva pelo HIV-1 em um dispositivo nanofluido. Os dados de imagem definem interações entre receptores de receptores de vírus e dinâmicas de caminhos de sinalização. Este é o primeiro método para a cultura e imagem longitudinal de alta produtividade para estudar a cinética e as interações moleculares.

Caracterização unicelular de influxo de cálcio e infecção pelo HIV-1 usando uma plataforma optofluidica multiparmétrica

O chip microfluídico clínico é uma importante técnica de análise biomédica que simplifica o pré-processamento de amostras de sangue de pacientes clínicos e cora por imunofluorescência as células tumorais circulantes (CTCs) in situ no chip, permitindo a rápida detecção e identificação de uma única CTC.

Plataforma de chip microfluídico clínico para o isolamento de células tumorais circulantes versáteis

As células tumorais circulantes (CTCs) são críticas para o estudo da progressão e metástase do câncer. Este artigo apresenta um protocolo integrado de alto rendimento para enriquecimento de CTC e sequenciamento de CTC única, melhorando a eficiência de captura e a pureza da CTC, reduzindo os custos de contaminação e sequenciamento, avançando assim na pesquisa de oncologia de precisão e aplicações clínicas.

Tecnologia de Classificação de Células Tumorais Circulantes de Alto Rendimento e Tecnologia de Sequenciamento de Célula Única Baseada em Microfluídica

Aprenda a captura de linfócitos T CD4+ usando um chip microfluídico descartável de PDMS para diagnóstico de HIV. Este método permite quantificar células T auxiliares com precisão em ambientes com recursos limitados.

CD4 + T-linfócitos Captura Usando um chip descartável microfluídicos para HIV

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