Name: Encapsulamento de Cardiomyocytes em um hidrogel de fibrina para engenharia de tecidos cardíacos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 18 s
Description: Aprenda a encapsular cardiomyócitos de ratos neonatos em hidrogel de fibrina para engenharia de tecidos cardíacos. Este método permite avaliar a funcionalidade contrátil e viabilidade celular de construtos miocárdicos.

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Este trabalho foi financiado pelos Institutos Nacionais de Saúde - National Heart Lung, and Blood Institute (Award # R00HL093358 a LDB).

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<li>Grassl, E. D., Oegema, T. R., Tranquillo, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+fibrin-based+arterial+media+equivalent%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+biomedical+materials+research.+66+%28Part+A%22%5BJournal%5D)">A fibrin-based arterial media equivalent.</a> Journal of biomedical materials research. 66 (Part A. , 550-561 (2003).</li>
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</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

O encapsulamento dos cardiomiócitos de rato neonatal no resultado de fibrina géis de forma consistente e viável tridimensional in vitro modelo do sistema do miocárdio. Fibrina é um biomaterial preferido porque quando as células são aprisionadas, elas são metabolicamente ativa e capaz de compactação, remodelação e recriando uma matriz extracelular que é consistente com o tecido do coração nativo 12. Porque nós permitimos que os cardiomiócitos a alinhar-se neste ambiente, sua funcionalidade é mais característico do músculo cardíaco, resultando em maior força de contração em comparação com tecidos isotrópico 6. Para potenciais aplicações terapêuticas, é necessário encapsular células dentro de um material que promove tanto a viabilidade e funcionalidade. Os protocolos aqui apresentados demonstram uma forma eficiente e precisa para a criação de uma rede de fibrina para controlar o comportamento de células cardíacas em um microambiente tridimensional. Alguns problemas potenciais podem surgir durante a criação ea cultura dessas construções. Um potencial problema é a manutenção da viabilidade celular antes de encapsulamento, o que irá afectar significativamente a funcionalidade da construção. Esforço deve ser feito para limitar a morte celular após o isolamento, reduzindo o tempo entre o isolamento eo encapsulamento das células dentro do gel de fibrina. Construções deve ser fornecida mídia todos os dias em um horário rigoroso. Além disso, é importante para assegurar a homogeneidade em todas as soluções utilizadas. Se a mistura de fibrinogênio, trombina e células produz um ambiente heterogêneo, a capacidade das células para remodelar o ECM, mecanicamente casal e contrato é potencialmente obstruído. Também é importante para prevenir a formação de bolhas de ar durante a injeção das construções, a fim de evitar perturbações na continuidade da engenharia de tecidos. Uma maneira de aliviar esta questão é chamar mais gel do que é necessário para fazer a construção com a seringa e injetar lentamente. Por último, uma vez que a matriz de fibrina definiu e foi em meio de cultura por 24 horas, é essencial destacar a construir a partir dos lados do molde do anel para promover a compactação baseada em células do gel de fibrina. Mantendo a construir no meio do molde facilita a troca de gases e nutrientes. Aderência para os lados do molde do anel podem também romper o alinhamento desejado celular. É importante notar que a decapitação consciente é usado como método de eutanásia neste protocolo, que é um método aceitável no âmbito das orientações de ambos os Institutos Nacionais de Saúde ea Associação Médica Americana Veterinária. No entanto, algumas instituições recomendam usar anestésico seguido por decapitação em ratos neonatal. Nós escolhemos a decapitação consciente porque garante a quantidade mínima de tempo sob condições de hipóxia para o tecido do coração extirpado / células. Quantidades relativamente pequenas de hipóxia pode levar à isquemia e morte dos miócitos potencialmente miócito, que poderiam afetar significativamente os resultados deste protocolo.

<table border="1"><tbody><tr><th> Nome do reagente </th><th> Companhia </th><th> Número de catálogo </th><th> Comentários </th></tr><tr><td> Cloreto de sódio </td><td> Sigma </td><td> S7653 </td><td> PBS </td></tr><tr><td> Cloreto de potássio </td><td> Sigma </td><td> P9333 </td><td> PBS </td></tr><tr><td> Fosfato de sódio dibásico </td><td> Sigma </td><td> S7907 </td><td> PBS </td></tr><tr><td> Fosfato de potássio monobásico </td><td> Sigma </td><td> P5655 </td><td> PBS </td></tr><tr><td> Glicose </td><td> Sigma </td><td> G5400 </td><td> Isolamento </td></tr><tr><td> hemostat </td><td> Multa Ferramentas Ciência </td><td> 91308-12 </td><td> Isolamento </td></tr><tr><td> pinça fina </td><td> Multa Ferramentas Ciência </td><td> 11251-20 </td><td> Isolamento </td></tr><tr><td> tesouras grandes </td><td> Multa Ferramentas Ciência </td><td> 91401-14 </td><td> Isolamento </td></tr><tr><td> micro-tesoura </td><td> Multa Ferramentas Ciência </td><td> 91501-09 </td><td> Isolamento </td></tr><tr><td> lidar com bisturi </td><td> Multa Ferramentas Ciência </td><td> 10008-13 </td><td> Isolamento </td></tr><tr><td> lâmina de bisturi </td><td> Fisher Scientific </td><td> 08-918-5A </td><td> Isolamento </td></tr><tr><td> Underpad banco absorvente </td><td> VWR </td><td> 56617-014 </td><td> Isolamento </td></tr><tr><td> drape estéril </td><td> Fisher Scientific </td><td> GM42526 </td><td> Isolamento </td></tr><tr><td> saco de autoclave </td><td> Pescador </td><td> 01-812-54 </td><td> Isolamento </td></tr><tr><td> compressa de gaze </td><td> Fisher Scientific </td><td> 13-761-52 </td><td> Isolamento </td></tr><tr><td> betadine </td><td> Purdue Produtos </td><td> 67618-150-01 </td><td> Isolamento </td></tr><tr><td> luvas estéreis </td><td> Fisher Scientific </td><td> 19-020 </td><td> Isolamento </td></tr><tr><td> pipeta de transferência estéril </td><td> Fisher Scientific </td><td> 9962 </td><td> Isolamento </td></tr><tr><td> colagenase </td><td> Worthington </td><td> CLS2 </td><td> Isolamento </td></tr><tr><td> Teflon haste 1 / 4 polegada de diâmetro </td><td> McMaster-Carr </td><td> 8546K11 </td><td> Parte do molde </td></tr><tr><td> Teflon ID tubo 1 / 4 de polegada, OD 1 / 2 polegada </td><td> McMaster-Carr </td><td> 8547K31 </td><td> Parte do molde </td></tr><tr><td> Silicone O-Ring ID 1 / 4 de polegada, OD 1 / 2 polegada </td><td> McMaster-Carr </td><td> 9396K204 </td><td> Parte do molde </td></tr><tr><td> Teflon tubo de 1 / 4 ID polegadas, 5 / 16 polegadas OD </td><td> McMaster-Carr </td><td> 52355K14 </td><td> Parte do molde </td></tr><tr><td> Seringas Kendall monoject 6cc </td><td> Fisher Scientific </td><td> 05-561-41 </td><td> Parte do molde </td></tr><tr><td> BD seringa 3cc </td><td> Fisher Scientific </td><td> 309585 </td><td> Parte do molde </td></tr><tr><td> Fibrinogênio bovino </td><td> Sigma </td><td> F8630 </td><td> Construir </td></tr><tr><td> A trombina bovina </td><td> Sigma </td><td> T7513 </td><td> Construir </td></tr><tr><td> 1 M HEPES </td><td> Sigma </td><td> H0887 </td><td> Construir </td></tr><tr><td> Cloreto de sódio </td><td> Sigma </td><td> S7653 </td><td> Construir </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> 10569 </td><td> Construir </td></tr><tr><td> PLURONIC F-127 </td><td> Sigma </td><td> P2443 </td><td> Construir </td></tr><tr><td> Cloreto de cálcio </td><td> Sigma </td><td> 383147 </td><td> Construir </td></tr><tr><td> 0,2 micron filtro </td><td> Fisher Scientific </td><td> SCGVT05RE </td><td> Construir </td></tr><tr><td> 40 micron filtros celular </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-363-547 </td><td> Construir </td></tr><tr><td> 0,45 micron filtro de tampa de garrafa </td><td> Corning </td><td> 430627 </td><td> Construir </td></tr><tr><td> de vidro pré-filtro </td><td> Millipore </td><td> AP2007500 </td><td> Construir </td></tr><tr><td> 18G 1 1 / 2 polegada de comprimento agulha </td><td> Fisher Scientific </td><td> 14-826-5D </td><td> Construir </td></tr><tr><td> 21G agulha de 1 polegada </td><td> Fisher Scientific </td><td> 14-826C </td><td> Construir </td></tr><tr><td> construção de frascos </td><td> Fisher Scientific </td><td> 2116 </td><td> Construir </td></tr><tr><td> Penicilina-estreptomicina </td><td> Invitrogen </td><td> 15140 </td><td> Mídia </td></tr><tr><td> soro de cavalo </td><td> Sigma </td><td> H1138 </td><td> Mídia </td></tr><tr><td> Soro fetal bovino </td><td> Invitrogen </td><td> 16000 </td><td> Mídia </td></tr><tr><td> ácido aminocapróico </td><td> Acros Organics </td><td> 103305000 </td><td> Mídia </td></tr><tr><td> ácido ascórbico </td><td> Sigma </td><td> A5960 </td><td> Mídia </td></tr><tr><td> insulina </td><td> Sigma </td><td> I9278 </td><td> Mídia </td></tr><tr><td> Paraformaldeído, 16% </td><td> Microscopia Eletrônica de Ciências </td><td> 15710 </td><td> Histologia </td></tr><tr><td> Temperatura de corte ideal (OCT) </td><td> Ted Pella </td><td> 27050 </td><td> Histologia </td></tr><tr><td> 2-metilbutano </td><td> Pescador </td><td> 03551-4 </td><td> Histologia </td></tr><tr><td> Anticorpo primário do mouse MYH1/2/4/6 </td><td> Santa Cruz Biotechnology </td><td> SC-32732 </td><td> Histologia </td></tr><tr><td> Coelho Conexina 43 anticorpo primário </td><td> Tecnologia de sinalização celular </td><td> 3512 </td><td> Histologia </td></tr><tr><td> Dylight 549-burro conjugado anticorpo anti-rato-secundário </td><td> Jackson Laboratories ImmunoResearch </td><td> 715-505-151 </td><td> Histologia </td></tr><tr><td> Dylight 488-conjugados de anticorpos anti-coelho Donke secundário </td><td> Jackson Laboratories ImmunoResearch </td><td> 711-485-152 </td><td> Histologia </td></tr><tr><td> Vivo / morto ensaio </td><td> Invitrogen </td><td> L-3224 </td><td> Análise </td></tr></tbody></table>

encapsulamento de cardiomyocytes em um hidrogel de fibrina para engenharia de tecidos cardíacos

Encapsulation of Cardiomyocytes in a Fibrin Hydrogel for Cardiac Tissue Engineering 

A cultura de células em um ambiente de hidrogel tridimensional é uma técnica importante para o desenvolvimento de construções para a engenharia de tecidos, bem como estudar as respostas celulares em condições diversas da cultura in vitro. O ambiente tridimensional reproduz com mais exatidão o que as células observar in vivo devido à aplicação de estímulos mecânicos e químicos em todas as dimensões 1. Tridimensional hidrogéis podem ser feitas a partir de polímeros sintéticos como PEG-DA 2 e PLGA 3 ou um número de proteínas que ocorrem naturalmente, como o colágeno 4, 5 ou ácido hialurônico fibrina 6,7. Hidrogéis criado a partir de fibrina, uma proteína do sangue que ocorre naturalmente coagulação, pode polimerizar para formar uma malha que é parte da cura do corpo ferida processos naturais 8. Fibrina é célula-degradáveis ​​e potencialmente autólogo 9, tornando-se um andaime ideal temporário para engenharia de tecidos. Aqui nós descrevemos em detalhe o isolamento dos cardiomiócitos neonatal a partir de três dias os filhotes de rato velho e preparação das células para encapsulamento em construções de hidrogel de fibrina para engenharia de tecidos. Miócitos neonatal são uma fonte de células comuns utilizados para estudos in vitro na formação de tecido cardíaco e engenharia 4. Fibrina gel é criado pela mistura do fibrinogênio com a trombina enzima. A trombina cliva fibrinopeptídeos FPA e FPB de fibrinogênio, revelando os sítios de ligação que interagem com outros monómeros 10. Essas interações causam os monômeros para auto-montar em fibras que formam a malha de hidrogel. Porque o timing dessa reação enzimática pode ser ajustado alterando a relação de trombina ao fibrinogênio, ou a razão de cálcio para a trombina, pode-se molde de injeção constrói com um número de diferentes geometrias 11,12. Além disso podemos gerar o alinhamento do tecido resultante da forma como restringir o gel durante a cultura 13. Após o cultivo da engenharia construções de tecido cardíaco durante duas semanas sob condições estáticas, as células cardíacas começaram a remodelar a construir e pode gerar uma força de contração em condições de estimulação elétrica 6. Como parte deste protocolo, também descrevem métodos para analisar a engenharia de tecidos do miocárdio após o período de cultura, incluindo a análise funcional da força ativa gerada pelo músculo cardíaco construir sobre a estimulação elétrica, bem como métodos para determinar a viabilidade celular final (Live-Morto ensaio) e coloração imuno para examinar a expressão de proteínas e morfologia típica importante para a contração (Miosina Cadeia Pesada ou MHC) e acoplamento celular (Conexina 43 ou Cx43) entre os miócitos.

Descrevemos o isolamento de cardiomiócitos neonatal e na preparação das células para encapsulamento em construções de hidrogel de fibrina para engenharia de tecidos. Descrevemos métodos para analisar a engenharia de tecidos do miocárdio após o período de cultura, incluindo a força ativa gerada com a estimulação elétrica e viabilidade celular e coloração imuno.

Encapsulamento de Cardiomyocytes em um hidrogel de fibrina para engenharia de tecidos cardíacos

O cultivo de células em um ambiente de hidrogel tridimensional é uma técnica importante para o desenvolvimento de constructos para engenharia de tecidos, bem como para o estudo de...

O objetivo geral deste procedimento é encapsular cardiomiócitos de ratos neonatos em um hidrogel FI para engenharia de tecidos cardíacos. Isso é realizado primeiramente isolando os corações de filhotes de ratos neonatos com dois a três dias de idade. Em seguida, os corações são digeridos em colagenase.Para separar as células cardíacas da matriz extracelular, as células cardíacas são então encapsuladas em um hidrogel de fibrina. Por fim, os constructos são cultivados por duas semanas. Em última análise, os resultados mostram que os constructos têm a capacidade de gerar uma força de contração de aproximadamente 1,3 mili Newtons em resposta à estimulação elétrica.Além disso, a estrutura alinhada do constructo pode ser observada por meio de coloração histológica de proteínas de miócitos. Constructos cardíacos engenheirados podem servir como uma terapia potencial para infarto do miocárdio, permitindo a reparação ou substituição de tecido cicatrizado por tecido engenheirado, melhorando assim a função cardíaca após lesão ou doença. Esses constructos podem servir como um sistema modelo in vitro valioso para o estudo dos efeitos de diversos estímulos sobre forças contráteis e o desenvolvimento cardíaco normal e fisiopatológico.Após preparar o meio e esterilizar os instrumentos cirúrgicos para cada pessoa, coloque um absorvente descartável sobre a bancada dentro da câmara de fluxo laminar, na superfície de trabalho, e cubra-o com um campo estéril. Coloque os instrumentos cirúrgicos estéreis e uma compressa de gaze quatro por quatro sobre o campo estéril. Sem tocar nos instrumentos, abra uma lâmina de bisturi estéril número 20 e coloque-a sobre o campo.Após decapitar um filhote, limpe o tórax com gaze embebida em Betadine. Prenda o filhote apertando as escápulas juntas. Realize uma toracotomia parcial para expor o coração, aumentando a pressão aplicada nas escápulas, o que forçará o coração a passar além das costelas.Para a dissecação da escápula, passe a lâmina do bisturi atrás do coração para seccionar os grandes vasos e remover o órgão. Coloque o coração sobre gelo em uma placa de Petri contendo PBS com glicose. Após o isolamento dos corações, remova qualquer sangue residual e tecido conjuntivo lavando-os em PBS com glicose gelado.Remova o terço superior de cada coração, de modo que os dois terços inferiores permaneçam. Para isolar somente a maior parte do tecido ventricular, coloque o tecido em uma nova placa de Petri com PBS gelado contendo glicose. Usando microtesouras e pinças estéreis, pique cuidadosamente os corações em pedaços de aproximadamente um milímetro cúbico.Transfira o tecido para um tubo cônico de 50 mililitros e remova todo o tampão, exceto 10 mililitros. Adicione sete mililitros de solução de colagenase. Agite a mistura de tecido com colagenase a 37 graus Celsius por sete minutos.Pipete suavemente 10 vezes para fragmentar os pedaços de tecido. Deixe os pedaços sedimentarem e, em seguida, aspire o líquido e descarte-o. Adicione sete mililitros de colagenase aos pedaços de tecido e realize uma nova digestão por sete minutos.Para cada etapa restante, pipete suavemente 10 vezes para fragmentar os pedaços de tecido. Após a sedimentação, retire o sobrenadante e colete-o em um tubo cônico separado de 50 mililitros, adicione sete mililitros de colagenase aos pedaços de tecido e realize uma nova digestão por sete minutos. A cada tubo de sobrenadante, adicione 10 mililitros de solução de parada com uma pipeta serológica diferente após cada adição de sobrenadante da digestão.Para preparar moldes de géis de fibrina, consulte a parte escrita do protocolo. Coloque os mandris previamente construídos dentro das carcaças de seringas de seis cc, utilizando a seringa de três cc como êmbolo para obter um selo hermético entre as juntas tóricas e as arruelas de teflon. Para produzir um mililitro de gel de fibrina, prepare a solução F em um tubo cônico adicionando 112 microlitros do estoque de fibrinogênio a 558 microlitros de heaps 20 milimolares.Tampão em solução salina a 0,9% em um tubo cônico separado. Crie uma solução T adicionando 17 microlitros do estoque de trombina e 1,3 microlitros de solução de cálcio normal dois a 135 microlitros de DMEM. Em um terceiro tubo cônico, centrifugue as células e re-suspenda-as numa concentração de 29,4 milhões de células por mililitro, ou seis vezes a concentração final desejada de células no constructo.Em geral, indivíduos novos neste método terão dificuldade com a etapa de fabricação do constructo. Após misturar as soluções de fibrinogênio e trombina, a polimerização do fibrina ocorre rapidamente. Assim, os indivíduos devem trabalhar com rapidez para garantir uma solução homogênea, ao mesmo tempo em que evitam a incorporação de bolhas de ar no hidrogel durante a injeção na forma de moldagem.Quando estiver pronto para moldar o constructo de gel de fibrina, prepare uma seringa de um mililitro com uma agulha de 18 gauge e uma polegada e meia. Tenha também à mão uma agulha de 21 gauge e uma polegada. Para preparar um mililitro de solução de gel de fibrina, adicione 667 microlitros da solução F em um tubo cônico de 50 mililitros, seguido por 167 microlitros da solução celular.E, por último, 167 microlitros da solução T. Pipete cuidadosamente a mistura para não introduzir bolhas de ar. Neste momento, a reação já começou e a injeção do construto deve ser realizada imediatamente.Use a seringa e uma agulha de 18 gauge para aspirar a solução de fibrina. Tenha cuidado para não inverter a seringa, a fim de evitar que bolhas entrem na agulha. Substitua a agulha de 18 gauge por uma agulha de 21 gauge.Toque suavemente na seringa para expelir quaisquer bolhas de ar. Em seguida, insira a seringa no molde entre a rolha que envolve, seguindo o sulco na junta de vedação de teflon em forma de O, e injete a solução no molde. Incline o molde para garantir o preenchimento completo.Em seguida, preencha os moldes restantes. Envolva os moldes com filme plástico em grupos de três e coloque-os no incubador ou forno a 37 graus Celsius. Incube os géis por 20 minutos para permitir tempo suficiente para que a fibrina polimerize completamente.Encha cada frasco de cultura com 21 mililitros de meio para constructo miocárdico por constructo. Utilize a cápsula estéril de seringa de três cc como êmbolo para forçar o mandril com o constructo em uma placa de Petri grande com DMEM. Em seguida, coloque o constructo no frasco de amostra.Incube os frascos a 37 graus Celsius por duas semanas. Para iniciar a análise de um grampo de constructo de fibrina, conecte as pinças de jacaré do cabo proveniente do estimulador aos fios dos eletrodos no banho. Ligue a placa de aquisição de dados, o gerador de pulsos e o transdutor de força.Configure o transdutor de força na configuração 5G e nivele-o. Abra um programa personalizado de laboratório que exiba e salve os dados do transdutor de força. Crie um novo arquivo de texto vazio na pasta de dados para cada amostra; usando pinças, remova o conjunto do suporte mandibular deslizando suavemente o anel do conjunto do suporte de teflon e colocando-o sobre o pino metálico fixo no sistema de medição de força.Banho de meio. Use a pinça para empurrar e levantar a construção ao redor do pino do transdutor de força. Coloque a outra extremidade da construção sobre o braço do transdutor e aperte até que o transdutor indique a leitura.1,0 G de força no estimulador cardíaco. Ajuste a tensão do pulso para 20 volts, a duração para seis milissegundos e a frequência para um hertz. Inicie o estímulo elétrico pressionando o botão de ativação da saída.Inicie a gravação até que a forma de onda se torne regular. Analise a forma de onda no MATLAB para determinar a taxa de contração e a taxa de relaxamento. O constructo de fibrina com cardiomiócitos inicialmente cobre toda a largura do molde.Após duas semanas de cultivo, contrai-se até cerca de um quinto da largura inicial. O estímulo elétrico do constructo gera dados de força de contração conforme mostrado aqui. Espera-se forças de contração de aproximadamente 1,3 milinewtons.A viabilidade celular do constructo depende da distância das células em relação à superfície do constructo que está em contato com o meio de cultura, devido às limitações de difusão de oxigênio para o interior do constructo. Na superfície do constructo, observa-se alta viabilidade celular utilizando microscopia confocal. A estrutura alinhada do constructo é observada por meio da coloração da cadeia pesada da miosina em vermelho e da conexina 43, que é necessária para o acoplamento celular entre miócitos, em verde.Uma vez dominado, todo o protocolo deve levar aproximadamente cinco horas. A parte do isolamento de I levará aproximadamente três horas, enquanto a parte da fabricação do constructo levará cerca de duas horas. Ao realizar este procedimento, é importante manter sempre a agulha voltada para baixo para evitar a incorporação de bolhas de ar na rede de fibrina.Além disso, inclinar o molde manterá sempre o orifício da agulha no ponto mais alto durante a injeção, o que garantirá que a moldagem do molde seja completamente preenchida com a solução de fibrina. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como encapsular cardiomiócitos em hidrogéis de fibrina com formato de anel, primeiro isolando os cardiomiócitos de ratos neonatos e, em seguida, moldando por injeção a solução de fibrina em moldes cilíndricos de fácil montagem.

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Métodos para a preparação de um gel matriz injetável a partir de tecido decelularizado e injetá-lo em rato...

Biologicamente fabricação de materiais derivados injetável para Engenharia de Tecidos do Miocárdio

Este protocolo é focado na utilização a capacidade inerente de células estaminais para tomar cue a partir de sua matriz circundante extracelular e ser induzidas a diferenciar-se em múltiplos fenótipos. Este manuscrito métodos estende nossa descrição e caracterização de um modelo utilizando um hidrogel de camada dupla, composto de PEG-fibrina e colagénio, ao mesmo tempo, co-diferenciar células-tronco...

Engenharia de um hidrogel de camada dupla para controlar a diferenciação ASC

Este modelo de sistema começa a partir de um gel de fibrina miofibroblastos povoada que pode ser usado para estudar colagénio endógeno (re) organização em tempo real de uma forma não destrutiva. O modelo de sistema é muito sintonizável, como ele pode ser usado com diferentes fontes de células, aditivos médio, e pode ser facilmente adaptada às necessidades específicas.

Engenharia baseada em fibrina construções de tecido de miofibroblastos e de aplicação de restrições e tensão para induzir a organização das células e colágeno (Re)

Implantação de um biograft para tratar infarto do miocárdio induzido por ligadura LAD em um modelo de roedor tem convencionalmente necessárias duas cirurgias de coração aberto. A fim de reduzir a mortalidade e proporcionar as condições óptimas para a fixação de Biomatrizes sólidos gelatinosos e associados a células, procedimentos minimamente invasivos têm sido desenvolvidos.

Terapia Celular para insuficiência cardíaca em Rat: Double toracotomia para infarto do miocárdio e Epicárdica implante de células e Biomatrix

Este protocolo visa aliviar a limitação do enxerto celular deficiente para o tratamento de infartos do miocárdio com células-tronco por meio do uso de um sistema de hidrogel e uma cola à base de fibrina. Com essa abordagem, o contato célula a tecido pós-infarto pode ser mantido, aumentando o potencial terapêutico de agentes benéficos no local da lesão.

Um hidrogel Construir e fibrina à base de cola Approach to Deliver Therapeutics em um Infarto do Miocárdio modelo murino.

Este protocolo descreve a decellularization completa do miocárdio humano preservando seus componentes de matriz extracelular. Transformação dos resultados da matriz extracelular na produção de micropartículas e um hidrogel de auto-montagem de tilacoides.

Processamento do tecido cardíaco humano em direção a matriz extracelular auto montagem hidrogel para In Vitro e In Vivo de aplicações

Aqui apresentamos um método rápido, fácil e baixo custo para a fabricação de moldes de polidimetilsiloxano personalizado que podem ser usados para a produção de tecidos de engenharia baseada em hidrogel com geometrias complexas. Adicionalmente descrevemos os resultados de avaliações mecânicas e histológicos realizados na engenharia tecidos cardíacos produzidos utilizando esta técnica.

Custom Engineered moldes de cultura de tecidos de Masters gravados a Laser

A terapia baseada em células-tronco emergiu como uma estratégia eficiente para reparar tecidos cardíacos feridos após o infarto do miocárdio. Fornecemos uma aplicação in vivo ideal para transplante de células-tronco usando hidrogéis de gelatina que são capazes de ser enzimaticamente intercessos.

Transplante intramial de hidrogéis injetáveis de carregamento de MSC após infarto do miocárdio em um modelo murino

O objetivo deste protocolo é explicar e demonstrar o desenvolvimento de um modelo microfluido tridimensional (3D) de tecido cardíaco humano altamente alinhado, composto por cardiomiócitos derivados de células-tronco co-cultivados com fibroblastos cardíacos (CFs) dentro de um hidrogel biomimético, à base de colágeno, para aplicações em engenharia de tecido cardíaco, triagem de medicamentos e modelagem de doenças.

Desenvolvimento de tecido cardíaco humano organizado 3D dentro de uma plataforma microfluida

Um método reprodutível é apresentado para gerar tecidos miocárdicos 3D combinando scaffolds de escrita eletrospinning (MEW), policaprolactona (PCL) e hidrogéis de fibrina com cardiomiócitos e fibroblastos derivados de hiPSC. Essa técnica oferece controle preciso sobre a arquitetura do andaime e pode ser aplicada em testes pré-clínicos de medicamentos e modelagem de doenças cardíacas.

Geração de tecido miocárdico humano 3D usando escrita eletrogiratória por fusão de andaimes de policaprolactona e células cardíacas derivadas de hiPSC

Aprenda a encapsular cardiomyócitos de ratos neonatos em hidrogel de fibrina para engenharia de tecidos cardíacos. Este método permite avaliar a funcionalidade contrátil e viabilidade celular de construtos miocárdicos.

Encapsulamento de Cardiomyocytes em um hidrogel de fibrina para engenharia de tecidos cardíacos

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