Name: Enriquecimento das células NK do sangue humano com o Kit RosetteSep de StemCell Technologies (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 52 s
Description: Aprenda a isolar células NK do sangue humano por seleção negativa usando o kit RosetteSep. Este método garante alta pureza e viabilidade celular para pesquisas em imunologia.

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Um protocolo detalhado está incluído com cada cocktail isolamento Rosette setembro e está disponível online no site tecnologias StemCell 1.

<ol><li>Procedures and instruction manuals. , 
	
 <a target="_blank" href="http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx">http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx</a> Forthcoming.</li>
</ol>

As células isoladas usando esta técnica pode ser ainda separados em diferentes populações utilizando kits de separação outras células.

PBS suplementado com FCS a 2% e soluções Histopaque devem ser levados à temperatura ambiente antes do início do procedimento.

enriquecimento das células nk do sangue humano com o kit rosettesep de stemcell technologies

Enrichment of NK Cells from Human Blood with the RosetteSep Kit from StemCell Technologies

Natural killer (NK) são grandes granular linfócitos citotóxicos que pertencem ao sistema imune inato e desempenham um papel importante na luta contra o câncer e infecções, mas também estão implicados nos estágios iniciais da gravidez e da rejeição do transplante. Essas células estão presentes no sangue periférico, a partir do qual eles podem ser isoladas. As células podem ser isoladas por meio de seleção positiva ou negativa. Para a seleção positiva usamos anticorpos dirigidos a um marcador de superfície presente apenas nas células de interesse enquanto que para seleção negativa usamos cocktails de anticorpos direcionados para marcadores de superfície presentes em todas as células, mas as células de interesse. Esta última técnica apresenta a vantagem de deixar as células de juros livre de anticorpos, reduzindo assim o risco de ativação das células indesejáveis ​​ou diferenciação. Neste vídeo protocolo demonstramos como separar as células NK do sangue humano por seleção negativa, usando o kit RosetteSep de StemCell tecnologias. O procedimento envolve a obtenção de sangue periférico humano (sob uma placa de revisão institucional aprovado pelo protocolo para proteger os seres humanos) e misturá-lo com um coquetel de anticorpos que se ligam a marcadores ausente em células NK, mas presente em todas as outras células mononucleares presentes na periferia sangue (por exemplo, os linfócitos T, monócitos ...). Os anticorpos presentes no cocktail são conjugados a anticorpos direcionados para Glicoforina A eritrócitos por diante. Todas as células não desejadas e células vermelhas do sangue, portanto, ser preso em complexos. A mistura de cocktail de sangue e anticorpo é então diluída, sobrepostos em um gradiente Histopaque, e centrifugado. Células NK (&gt; 80% puro) pode ser coletada na interface entre o Histopaque eo plasma diluído. Cocktails similares estão disponíveis para o enriquecimento de populações de células, tais como linfócitos T humanas.

Células natural killer são uma pequena população de linfócitos. Aqui nós mostramos como isolar estas células do sangue humano por seleção negativa, usando um kit de StemCell Technologies. As células obtidas são viáveis ​​e intocada por anticorpos e, portanto, pronto para ser usado para uma série de procedimentos.

Enriquecimento das células NK do sangue humano com o Kit RosetteSep de StemCell Technologies

As células natural killer (NK) são linfócitos citotóxicos granulares volumosos que pertencem ao sistema imunitário inato e desempenham papéis fundamentais no combate ao cancro...

Olá, sou Christine Beaton. Sou pesquisadora assistente no laboratório de George Chen, do Departamento de Fisiologia e Biofísica da Universidade da Califórnia em Irvine. E hoje vou mostrar a vocês como selecionar negativamente células natural killer a partir de sangue humano utilizando os kits coquetel da Stem Cell Technologies.A razão pela qual utilizamos este kit da Stem Cell Technologies é que ele nos fornece uma pureza celular muito alta, e a seleção negativa nos permite obter células que não foram ligadas a um anticorpo. Assim, não ocorre nada inesperado com essas células. O funcionamento do kit Tsep consiste em anticorpos que se ligam a todas as células nas quais não estamos interessados no sangue.No meu caso, linfócitos T, linfócitos B, monócitos e, então, você tem anticorpos que irão ligar-se à glicoforina A nas hemácias; o que fizeram foi ligar um anticorpo contra um leucócito a um anticorpo contra uma hemácia. O que vai acontecer é que se formará um complexo com um leucócito indesejado ligado a múltiplas hemácias; como as hemácias têm maior densidade do que os leucócitos, quando você colocar sua mistura contendo o sangue e os anticorpos sobre um gradiente e realizar a cent

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Aqui nós descrevemos um método eficiente para expandir e purificar um grande número de células NK e avaliar a sua função.

Expansão, Purificação e Avaliação Funcional de Células NK do sangue periférico

Este vídeo demonstra o método para analisar o metabolismo energético em células NK humanas ativadas usando um analisador de fluxo extracelular. Diferentes inibidores dos complexos da cadeia de transporte de elétrons afetam a síntese de ATP, que é medida por meio da taxa de consumo de oxigênio ou OCR, fornecendo informações sobre o metabolismo celular e a bioenergética.

Monitoramento em tempo real do metabolismo energético em células NK humanas usando um analisador de fluxo extracelular

Este protocolo descreve o desenvolvimento, a expansão, e in vivo de imagens de células NK derivadas de hESCs e iPSCs.

Desenvolvimento, expansão e<em&gt; In vivo</em&gt; Monitorização das células NK humanas de células estaminais embrionárias humanas (hESCs) e e induziu células-tronco pluripotentes (iPSCs)

Um método simples e de confiança é descrito aqui para analisar um conjunto de funções das células NK, tais como desgranulação, produção de citocina e quimiocina dentro de diferentes subconjuntos de células NK.

Ensaio de citometria de fluxo baseada para a monitorização das funções das células NK

O objetivo deste estudo foi a formulação de tecnologias que permitem a transdução de gene bem sucedido na primária natural killer (NK) as células. O dextran-mediada Lentivirus transdução de humanos ou rato primário NK células os resultados, em maior eficiência de expressão do gene. Este método de transdução gene vastamente irá melhorar a manipulação genética de células NK.

Dextran aumenta a eficiência de Lentivirus transdução das células NK primário murino e humano

Um método baseado em citometria de fluxo para determinar quantitativamente a atividade citotóxica de células humanas de assassino natural é mostrado aqui.

Um ensaio de citotoxicidade baseados em citometria de fluxo para a avaliação da atividade das células NK humana

Aqui, apresentamos um protocolo para produzir em massa-silenciamento murino células NK usando um sistema de diferenciação de alimentador-livre para estudo mecanicista em vitro e em vivo.

Um novo sistema alimentador-livre para produção em massa de murino Natural Killer Cells In Vitro

Um protocolo para estudar eventos orientados pela FcγRIIIa por anticorpos terapêuticos em células assassinas naturais humanas é descrito aqui. Esta plataforma de estimulação artificial permite o interrogatório de funções de efeitos a jusante, como degranulação, produção de quimiocina/citocina, e caminhos de sinalização mediados pelas porções fcγriiia e fc de anticorpos envolvidos na vinculação.

Avaliação de Eventos celulares assassinos naturais humanos impulsionados pelo engajamento da FcγRIIIa na presença de anticorpos terapêuticos

O presente protocolo mostra como diferenciar células CD3−/CD45+CD56+ com citotoxicidade leve de células-tronco potenciais expandidas humanas (hEPSCs) em condições de cultura 3D e 2D. Isso permite a validação fenotípica de rotina sem a destruição do microambiente complexo.

Geração de células assassinas naturais a partir de células-tronco de potencial expandido humano

Aqui, apresentamos um método para diferenciar e expandir células assassinas naturais que expressam o receptor de antígeno quimérico derivado de iPSC humano (CAR) com morte aprimorada contra várias malignidades. Este protocolo demonstra a diferenciação e expansão de células CAR-NK derivadas de iPSC otimizadas para natural killer (NK) e a medição da atividade antitumoral contra várias linhagens de células tumorais.

Avanços em células-tronco pluripotentes induzidas por humanos que expressam o receptor natural killer do antígeno quimérico derivado de células-tronco

Aprenda a isolar células NK do sangue humano por seleção negativa usando o kit RosetteSep. Este método garante alta pureza e viabilidade celular para pesquisas em imunologia.

Enriquecimento das células NK do sangue humano com o Kit RosetteSep de StemCell Technologies

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