Uma técnica simplificada para a produção de um modelo de ferida isquêmica

O objetivo geral do experimento a seguir é possibilitar a criação de feridas isquêmicas, não apenas em coelhos normais, mas também em coelhos com resistência reduzida, como idosos ou diabéticos. Todas as técnicas atualmente utilizadas para a criação de feridas isquêmicas são altamente invasivas e, até o momento, nenhuma dessas técnicas pode ser usada em animais diabéticos. Este procedimento usa cirurgia minimamente invasiva que começa com três pequenas incisões na pele sobre os três feixes vasculares.

O próximo passo é isolar e proteger a veia central e o feixe vascular do mimo para que a circulação sanguínea no ouvido seja reduzida, mas não totalmente eliminada. Finalmente, os vasos, nervos e tecidos subcutâneos restantes são todos cortados ou ligados através das incisões na pele. A isquemia auricular é confirmada pela ausência de pulso arterial, aparência auricular, diferença de temperatura e saturação subcutânea de oxigênio.

Esta cirurgia minimamente invasiva pode parecer difícil de realizar, mas na verdade é muito fácil. A principal vantagem dessa técnica é que ela tem muito pouca ruptura na pele. Desde que publicamos essa técnica pela primeira vez em 2007, recebemos muitas perguntas.

Desde então, simplificámos ainda mais este procedimento. Para tornar ainda mais fácil de fazer sem usar um microscópio, Comece pesando o coelho selecionado, anestesiar o coelho, usando uma mistura de cetamina e xilazina. Monitore os sinais vitais do coelho, três feixes vasculares que suprem a orelha podem ser identificados no lado dorsal.

Estes são o feixe central, que é o maior com colaterais conectando-se a outras embarcações. O feixe de mimo, no qual a artéria geralmente é muito pequena ou ausente, e o feixe craniano. No lado ventral, a pele distal não recebe suprimento sanguíneo dos vasos proximais.

Em vez disso, os feixes de vasos na orelha dorsal têm numerosos ramos penetrantes através da cartilagem para fornecer suprimento de sangue para a pele ventral distal. Em alguns coelhos, um vaso subcutâneo muito pequeno também ocorre no lado ventral, que fornece sangue para não mais do que um terço da pele ventral. Em uma incisão cutânea circunferencial aberta, não há essencialmente sangramento de uma incisão ventral.

Antes de prosseguir, certifique-se de que o coelho não responda aos estímulos da dor usando uma pitada do dedo do pé e reflexo ocular, proteja os olhos do animal aplicando lágrimas artificiais. Ungüento. Mantenha o coelho aquecido durante a cirurgia com uma almofada de aquecimento. Em seguida, usando Betadine e álcool, esfregue as orelhas e as peles ao redor do coelho, de modo que apenas as duas orelhas fiquem expostas.

Um ouvido será isquêmico enquanto o outro serve como controle. Os instrumentos utilizados para a cirurgia são uma faca cirúrgica com lâmina número 15, dois pares de captadores, um para a pele e outro para outros tecidos moles. Três pinças de mosquito, um ou dois pares de microtesouras curvas, uma tesoura pequena para cortar suturas e tecidos duros, um porta-agulha e alguns punções de aço inoxidável.

Comece a cirurgia identificando os três pedículos vasculares de acordo com as artérias e veias. Usando uma lâmina número 15. Faça cuidadosamente uma incisão vertical na pele no pedículo vascular central.

Isole a veia central dos tecidos circundantes e proteja-a. Esta etapa circunda. A veia central para retração.

Disseque o nervo central livre. Normalmente está no lado mimado da veia. O nervo é cortado com uma tesoura.

Dissecar a artéria central livre. Normalmente é do lado cranial e mais profundo que a veia, amarra a artéria e a divide. Limpe os tecidos ao redor da veia central sobre a cartilagem da orelha.

Uma segunda incisão na pele é feita sobre o pedículo do mimo. Para preservar o pacote. Os vasos são dissecados livremente e cercados para proteção.

Isso é especialmente útil quando a veia é grande, como neste coelho. Faça um túnel entre esta e a primeira incisão. Corte os tecidos subcutâneos sobre a cartilagem.

Uma terceira incisão na pele é feita sobre o feixe craniano. Todo esse feixe é ligado e separado. A pele sobre o terceiro feixe é cortada.

Esta veia fica muito próxima da pele, por isso não corte muito profundamente. Todo o feixe de vasos é então dissecado livremente, amarrado e separado. Usando uma faca e uma tesoura, faça um túnel subcutâneo.

As três incisões interrompem todos os tecidos subcutâneos, músculos, nervos e pequenos ramos vasculares. Use dissecções afiadas e contundentes adicionais para limpar a base, deixando a cartilagem nua com cerca de cinco a 10 milímetros de largura. O sangramento pode ser controlado pela pressão da gaze.

O eletrocautério é desnecessário. A pele dentro da orelha não é cortada, pois não carrega muito sangue. O aspecto importante desse procedimento é garantir a dissecção adequada do túnel subcutâneo enquanto protege os vasos.

Este não deve ser um procedimento tão difícil. Após a hemostasia, as três incisões cutâneas são fechadas com quatro ou cinco suturas oh e verificadas novamente para garantir que as incisões cutâneas estejam devidamente fechadas e que nenhum sangramento seja observado Para testes de drogas em feridas, quatro. Feridas circulares de espessura total da pele podem ser criadas no lado ventral de cada orelha com um punção de aço inoxidável de seis milímetros.

A distância entre as feridas é de pelo menos 20 a 30 milímetros. A pele e o pericôndrio dentro do punção são removidos, mas a cartilagem não é danificada. Depois que as feridas forem criadas em ambas as orelhas, cubra-as com gaze temporariamente e transfira o coelho para uma sala de procedimentos para aplicação do medicamento.

Depois que as feridas forem limpas de quaisquer coágulos sanguíneos, aplique medicamentos de teste e controle. As feridas são cobertas com curativo oclusivo para evitar a dessecação. Ao comparar dois medicamentos, aplique cada medicamento em uma ferida proximal e distal.

Isso controla as taxas de diferença de cicatrização de feridas na orelha distal e proximal no pós-operatório. A orelha isquêmica geralmente se torna fria e cianótica com uma sensação reduzida distal à incisão. O edema I leve pode se apresentar por alguns dias, mas desaparece por si só e nenhum tratamento é necessário.

O pulso da artéria central está ausente. O movimento da orelha é reduzido, mas não totalmente eliminado porque alguns músculos ainda estão presos à base da orelha. Se o túnel for feito corretamente, uma reentrância clara pode ser vista entre as incisões.

Um adesivo de fentanil é fixado na pele das costas para aliviar a possível dor pós-operatória. A temperatura da pele é medida em cada orelha diariamente com um termômetro. A circulação sanguínea é medida no ouvido usando um medidor de tensão de oxigênio transcutâneo ou um medidor de fluxo doppler a laser.

Após uma semana, as suturas das incisões cutâneas podem ser removidas a partir de 2007. O procedimento foi usado em mais de 70 coelhos. Isso inclui 23 coelhos diabéticos e quatro idosos.

As diferenças de temperatura entre a orelha não isquêmica e a isquêmica variaram de um a 10 graus Celsius, com a maioria dos coelhos na faixa de dois a seis graus Celsius. A diferença de temperatura foi maior nos primeiros dias após a cirurgia e diminuiu gradativamente após o 15º dia, mas ainda se manteve ao final de um mês. Seis amostras de tecido foram retiradas de cada orelha e os teores de fosfato de alta energia foram medidos por HPLC, tanto um PT quanto uma energia total.

As concentrações foram maiores nas orelhas normais do que nas orelhas isquêmicas. Os tempos de cicatrização da ferida foram sempre maiores para a orelha isquêmica do que para a orelha não isquêmica em animais não diabéticos e diabéticos em 15 coelhos não diabéticos. O tempo médio de cicatrização foi de 17,8 dias na orelha não isquêmica versus 21,8 dias na orelha isquêmica.

Em 10 animais diabéticos de 12 meses, o tempo médio de cicatrização foi de 18,3 dias na orelha não isquêmica em comparação com 29,1 dias na orelha isquêmica. Em todos os animais, incluindo coelhos diabéticos, as incisões na pele cicatrizaram normalmente sem complicações em coelhos. Com 24 meses de tempo diabético, as feridas ventrais têm maior tendência a infeccionar.

Esse recurso o torna mais próximo das feridas diabéticas humanas. Uma amostra histológica mostra a cicatrização do túnel subcutâneo no qual o músculo está ausente e é substituído por tecidos fibrosos. No entanto, a pele está intacta.

Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de tratar os animais de maneira humana. Uma vez dominada, essa técnica pode ser feita em menos de uma hora. Usamos essa técnica em mais de 70 coelhos, incluindo 23 coelhos diabéticos sem complicações, como sangramento ou infecção.

É um procedimento muito seguro seguir este procedimento. Outros métodos, como isquemia adicional, danos nos nervos e inoculação bacteriana, podem ser realizados para responder a perguntas adicionais, como úlceras vasculares, úlceras de pressão e neuropatia diabética.