Name: Uma Introdução à Vespas parasitas de Drosophila E Resposta Imune a antiparasitários (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-07T12:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 4 s
Description: Aprenda a cultivar vespas parasitas em larvas de Drosophila e dissecar glândulas linfáticas e corpos adiposos para análise imunológica. Este método permite visualizar respostas imunes in vivo.

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Somos gratos ao Prof Todd Schlenke para Trichopria drosófilas, Prof Ip Tony para linhagens de moscas transgénicas, e Carl Prof Hashimoto para anti-Spätzle anticorpos. Agradecemos membros presentes e passadas de laboratório para suas contribuições para esta apresentação. Este trabalho foi financiado pelas subvenções seguintes: a partir de NIH (S06 GM08168, RISE 41399-009, e-RR03060 G12), USDA (NRI / USDA CSREES 2006-03817 e 2009-35302-05277) e PSC-CUNY.

<ol><li>Schlenke, T. A., Morales, J., Govind, S., Clark, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrasting+infection+strategies+in+generalist+and+specialist+wasp+parasitoids+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Contrasting infection strategies in generalist and specialist wasp parasitoids of Drosophila melanogaster.</a> PLoS Pathog. 3, 1486-1501 (2007).</li>
<li>Chiu, H., Morales, J., Govind, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+immuno-electron+microscopy+localization+of+p40%2C+a+protein+component+of+immunosuppressive+virus-like+particles+from+Leptopilina+heterotoma%2C+a+virulent+parasitoid+wasp+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Virol%22%5BJournal%5D)">Identification and immuno-electron microscopy localization of p40, a protein component of immunosuppressive virus-like particles from Leptopilina heterotoma, a virulent parasitoid wasp of Drosophila.</a> J. Gen. Virol. 87, 461-470 (2006).</li>
<li>Gueguen, G., Rajwani, R., Paddibhatla, I., Morales, J., Govind, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VLPs+of+Leptopilina+boulardi+share+biogenesis+and+overall+stellate+morphology+with+VLPs+of+the+heterotoma+clade%5BTitle%5D)+AND+%22Virus+Res%22%5BJournal%5D)">VLPs of Leptopilina boulardi share biogenesis and overall stellate morphology with VLPs of the heterotoma clade.</a> Virus Res. 160, 159-165 (2011).</li>
<li>Paddibhatla, I., Lee, M. J., Kalamarz, M. E., Ferrarese, R., Govind, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+for+sumoylation+in+systemic+inflammation+and+immune+homeostasis+in+Drosophila+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Role for sumoylation in systemic inflammation and immune homeostasis in Drosophila larvae.</a> PLoS Pathog. 6, e1001234(2010).</li>
<li>Sorrentino, R. P., Carton, Y., Govind, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+immune+response+to+parasite+infection+in+the+Drosophila+lymph+gland+is+developmentally+regulated%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Cellular immune response to parasite infection in the Drosophila lymph gland is developmentally regulated.</a> Dev. Biol. , 243-265 (2002).</li>
<li>Sorrentino, R. P., Melk, J. P., Govind, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+contributions+of+dorsal+group+and+JAK-Stat92E+pathway+genes+to+larval+hemocyte+concentration+and+the+egg+encapsulation+response+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of contributions of dorsal group and JAK-Stat92E pathway genes to larval hemocyte concentration and the egg encapsulation response in Drosophila.</a> Genetics. 166, 1343-1356 (2004).</li>
<li>Jung, S. H., Evans, C. J., Uemura, C., Banerjee, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+lymph+gland+as+a+developmental+model+of+hematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The Drosophila lymph gland as a developmental model of hematopoiesis.</a> Development. 132, 2521-2533 (2005).</li>
<li>Krzemien, J., Crozatier, M., Vincent, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ontogeny+of+the+Drosophila+larval+hematopoietic+organ%2C+hemocyte+homeostasis+and+the+dedicated+cellular+immune+response+to+parasitism%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Ontogeny of the Drosophila larval hematopoietic organ, hemocyte homeostasis and the dedicated cellular immune response to parasitism.</a> Int. J. Dev. Biol. 54, 1117-1125 (2010).</li>
<li>Martinez-Agosto, J. A., Mikkola, H. K., Hartenstein, V., Banerjee, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hematopoietic+stem+cell+and+its+niche%3A+a+comparative+view%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">The hematopoietic stem cell and its niche: a comparative view.</a> Genes Dev. 21, 3044-3060 (2007).</li>
<li>Lemaitre, B., Hoffmann, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+host+defense+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">The host defense of Drosophila melanogaster.</a> Annu. Rev. Immunol. 25, 697-743 (2007).</li>
<li>Schlegel, A., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lessons+from+%22lower%22+organisms%3A+what+worms%2C+flies%2C+and+zebrafish+can+teach+us+about+human+energy+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Lessons from "lower" organisms: what worms, flies, and zebrafish can teach us about human energy metabolism.</a> PLoS Genet. 3, e199(2007).</li>
<li>Ferrandon, D., Jung, A. C., Criqui, M., Lemaitre, B., Uttenweiler-Joseph, S., Michaut, L., Reichhart, J., Hoffmann, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+drosomycin-GFP+reporter+transgene+reveals+a+local+immune+response+in+Drosophila+that+is+not+dependent+on+the+Toll+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">A drosomycin-GFP reporter transgene reveals a local immune response in Drosophila that is not dependent on the Toll pathway.</a> EMBO J. 17, 1217-1227 (1998).</li>
<li>Bruckner, K., Kockel, L., Duchek, P., Luque, C. M., Rorth, P., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+PDGF%2FVEGF+receptor+controls+blood+cell+survival+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">The PDGF/VEGF receptor controls blood cell survival in Drosophila.</a> Dev. Cell. 7, 73-84 (2004).</li>
<li>Tokusumi, T., Shoue, D. A., Tokusumi, Y., Stoller, J. R., Schulz, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+hemocyte-specific+enhancer-reporter+transgenes+for+the+analysis+of+hematopoiesis+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">New hemocyte-specific enhancer-reporter transgenes for the analysis of hematopoiesis in Drosophila.</a> Genesis. 47, 771-774 (2009).</li>
<li>Tokusumi, T., Sorrentino, R. P., Russell, M., Ferrarese, R., Govind, S., Schulz, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+lamellocyte+transcriptional+enhancer+located+within+the+misshapen+gene+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Characterization of a lamellocyte transcriptional enhancer located within the misshapen gene of Drosophila melanogaster.</a> PLoS One. 4, e6429(2009).</li>
<li>Morales, J., Chiu, H., Oo, T., Plaza, R., Hoskins, S., Govind, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biogenesis%2C+structure%2C+and+immune-suppressive+effects+of+virus-like+particles+of+a+Drosophila+parasitoid%2C+Leptopilina+victoriae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Biogenesis, structure, and immune-suppressive effects of virus-like particles of a Drosophila parasitoid, Leptopilina victoriae.</a> J. Insect Physiol. 51, 181-195 (2005).</li>
<li>Bettencourt, R., Asha, H., Dearolf, C., Ip, Y. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemolymph-dependent+and+-independent+responses+in+Drosophila+immune+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">Hemolymph-dependent and -independent responses in Drosophila immune tissue.</a> J. Cell Biochem. 92, 849-863 (2004).</li>
<li>Melk, J. P., Govind, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+analysis+of+Ganaspis+xanthopoda%2C+a+larval+parasitoid+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Developmental analysis of Ganaspis xanthopoda, a larval parasitoid of Drosophila melanogaster.</a> J. Exp. Biol. 202, 1885-1896 (1999).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Interesse em vespas parasitas de Drosophila está surgindo como técnicas moleculares para decodificar genomas inteiros se tornar eficiente e rentável. No entanto, em relação aos seus excepcionalmente bem estudadas anfitriões, muitos aspectos fascinantes da biologia vespa permanecem obscuros. Estes incluem questões relacionadas com a gama de hospedeiros, imunossupressão, superparasitismo e comportamento. O foco desta apresentação foi demonstrar os efeitos da infecção nos tecidos imunes a mosca. As técnicas de dis...

<table border="1"><tbody><tr><td> Materiais </td><td> Tipo </td><td> Companhia </td><td> Número de Catálogo </td></tr><tr><td> Materiais para manutenção da cultura de insetos </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Levedura </td><td> Seca ativa </td><td> Fisher Scientific </td><td> S802453 </td></tr><tr><td> Fly alimentos </td><td> O fubá de milho, açúcar </td><td></td><td> Receita padrão </td></tr><tr><td> Mel </td><td> Trevo </td><td> Holandês Ouro </td><td></td></tr><tr><td> Frascos </td><td> Frascos de polipropileno (estreito) </td><td> Fisher Scientific </td><td> AS514 </td></tr><tr><td> Fechamento dos frascos </td><td> Tampão de algodão </td><td> Fisher Scientific </td><td> AS212 </td></tr><tr><td> Fechamento dos frascos </td><td> Zumbido ficha </td><td&gt; Genesee Científico </td><td> AS273 </td></tr><tr><td> Incubadora refrigerada </td><td> Precision 815 </td><td> Thermo Scientific </td><td> 3721 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Materiais para a preparação da amostra </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> CO tanque 2 </td><td> Grau seco osso </td><td> TW Smith </td><td> UN1013 </td></tr><tr><td> Espátula </td><td> Espátula Micro (14 cm) </td><td> Fisher Scientific </td><td> 21-401-15 </td></tr><tr><td> Teste Pyrex placas local </td><td> 9-bem dissecar placa de 85 mm x 100 mm </td><td> Thomas Scientific </td><td> 7812G17 </td></tr><tr><td> Pipetas Pasteur </td><td> Cal de soda </td><td> J &amp; H Berge </td><td> 71-5200-05 </td></tr><tr><td> Fórceps </td><td> Estilo # 5 </td><td> Sigma </td><td> T-4662 </td></tr><tr><td> Etanol </td><td> 190 USP prova </td><td> Fisher Scientific </td><td> 04-355-221 </td></tr><tr><td> Formaldeído </td><td> 37% w / w </td><td> Fisher Scientific </td><td> F79-1 </td></tr><tr><td> Anticorpo secundário Cy3 AffiniPure de burro anti-coelho IgG (H + L) </td><td> 1:50 excitação de 546 nm, 565 nm de emissão </td><td> Jackson Immuno Research Laboratories, Inc. </td><td> 711-165-152 </td></tr><tr><td> Antifade (N-propil-galato) </td><td> 4 ug / ml em glicerol a 50% em PBS 1X </td><td> Biomedicals MP </td><td> 10274790 </td></tr><tr><td> Glicerina </td><td></td><td> Fisher Scientific </td><td> G33-1 </td></tr><tr><td> Hoechst 33258 </td><td> 0,2 ug / ml de excitação 352 nm, emissão 461 nm </td><td> Molecular Probes </td><td> H-1398 </td></tr><tr><td> Rodamina faloidina </td><td> 200 unidades / ml (6,6iM de excitação) 540 nm, emissão 565 nm </td><td> Molecular Probes </td><td> R415 </td></tr><tr><td> Alexa Fluor 488 faloidina </td><td> 300 unidades / ml de excitação de 495 nm, emissão 518 nm </td><td> Molecular Probes </td><td> A12379 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Descartáveis </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Esguicho </td><td> Fisherbrand </td><td> Fisher Scientific </td><td> 03-409-22A </td></tr><tr><td> Kimwipes </td><td> Kimberly Clark </td><td> Fisher Scientific </td><td> 06-666A </td></tr><tr><td> Toalha de papel </td><td> 1 ply C-Fold </td><td> Franzir </td><td> 901-7CFTB2400 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Microscopia </td><td> &amp;nbsp; </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Estereomicroscópio Leica </td><td> MZFLIII </td><td> Império Imaging Systems, Inc. </td><td> 10446208 </td></tr><tr><td> Stereomicroscope Zeiss </td><td> Stemi 1000 ou 2000-C </td><td> Carl Zeiss </td><td> 000000-1006-126 </td></tr><tr><td> Fonte de Luz - LED </td><td> Iluminador Gooseneck </td><td> Fisher Scientific </td><td> 12563501 </td></tr><tr><td> Etapa </td><td> Transmitido caixa de luz com placa </td><td> Carl Zeiss </td><td> 455137000 </td></tr><tr><td> Zeiss de varredura a laser microscópio confocal </td><td> LSM 510 </td><td> Carl Zeiss </td><td></td></tr><tr><td> Microscópio Zeiss composto </td><td> Axioplan 2 na posição vertical </td><td> Carl Zeiss </td><td></td></tr></tbody></table><table border="1"><tbody><tr><td> Cepas de vespas </td><td> Fly Estirpes </td></tr><tr><td> Leptopilina victoriae 16 </td><td> yw </td></tr><tr><td> Leptopilina boulardi 17 1 </td><td> UAS-GFP Dorsal-17 </td></tr><tr><td> Leptopilina heterotoma 2 </td><td> SerpentHemoGal4 13 </td></tr><tr><td> Leptopilina heterotoma 14 1 </td><td> MSNF9-moCherry 14 </td></tr><tr><td> Trichopria drosófilas </td><td> MSNF-GFP 15 </td></tr><tr><td> Ganaspis xanthopoda 18 </td><td> yw Serpente Gal4 UAS GFP-Dorsal/Basc 4 </td></tr><tr><td></td><td> yw; Drosomycin-GFP/CyO y + 12 </td></tr></tbody></table>

uma introdução à vespas parasitas de<em&gt; drosophila</em&gt; e resposta imune a antiparasitários

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

A maioria das espécies conhecidas de vespas parasitoides ataca as fases larval ou pupal de Drosophila. Enquanto Trichopria drosophilae infecta as fases pupais do hospedeiro (Fig. 1A-C), fêmeas do gênero Leptopilina (Fig. 1D, 1F, 1G) e Ganaspis (Fig. 1E) atacam as fases larvais. Utilizamos esses parasitas para estudar a base molecular de uma corrida armamentista biológica. As vespas parasitas possuem grande valor como agentes de controle biológico. A maioria delas carrega fatores de virulência e outros que modificam a fisiologia e a imunidade do hospedeiro. A análise das vespas de Drosophila está fornecendo informações sobre como interações específicas entre espécies moldam as estruturas genéticas de comunidades naturais. Esses estudos também servem como modelo para compreender a fisiologia imunológica dos hospedeiros e como reações imunes coordenadas são frustradas por essa classe de parasitas.
A cutícula larval/pupal atua como a primeira linha de defesa. O ovipositor da vespa é uma estrutura afiada, semelhante a uma agulha, que entrega eficientemente os ovos no hemocélio do hospedeiro. Após a oviposição, ocorre uma reação de cicatrização no local da lesão na cutícula (Fig. 1C, cabeças de seta). Algumas vespas podem inserir dois ou mais ovos no mesmo hospedeiro, embora apenas o desenvolvimento de um único ovo prossiga com sucesso. Ovos supranumerários ou larvas em desenvolvimento são eliminados por um processo ainda não compreendido. Por esse motivo, essas vespas são denominadas parasitoides solitárias.
Dependendo da linhagem da mosca e da espécie de vespa, o ovo da vespa tem um de dois destinos. Ele é encapsulado, bloqueando seu desenvolvimento (surgimento do hospedeiro; Fig. 2 esquerda); ou o ovo da vespa eclode, desenvolve-se, muda de exoesqueleto e cresce até se tornar um adulto (surgimento da vespa; Fig. 2 direita). L. heterotoma é uma das espécies mais bem estudadas de vespas parasitas de Drosophila. Trata-se de uma "generalista", o que significa que pode utilizar a maioria das espécies de Drosophila como hospedeiras1. L. heterotoma e L. victoriae são espécies irmãs e produzem partículas semelhantes a vírus que interferem ativamente na resposta de encapsulação2. Diferentemente de L. heterotoma, L. boulardi é um parasita especialista e o espectro de espécies de Drosophila que utiliza é relativamente limitado1. Linhagens de L. boulardi também produzem partículas semelhantes a vírus3, embora diferem significativamente em sua capacidade de sucesso em D. melanogaster1. Algumas dessas linhagens de L. boulardi são difíceis de cultivar em D. melanogaster1, já que o hospedeiro frequentemente consegue encapsular seus ovos. Assim, é importante conhecer ambas as partes envolvidas em protocolos experimentais específicos.
Além dos tecidos de barreira (cutícula, intestino e traqueia), as larvas de Drosophila possuem respostas imunes sistêmicas celulares e humorais que decorrem das funções das células sanguíneas e do corpo gorduroso, respectivamente. A oviposição por L. boulardi ativa ambos os braços imunes1,4. As células sanguíneas são encontradas em circulação, em populações sésseis sob a cutícula segmentada e na glândula linfática. A glândula linfática é um pequeno órgão hematopoiético localizado na face dorsal da larva. Aglomerados de células hematopoiéticas, denominados lóbulos, estão dispostos segmentalmente em pares ao longo do vaso dorsal, que se estende ao longo do eixo anterior-posterior do animal (Fig. 3A). O corpo gorduroso é um grande órgão multifuncional (Fig. 3B). Ele secreta peptídeos antimicrobianos em resposta a infecções microbianas e metazoárias.
A infecção por vespas ativa a sinalização imune (Fig. 4)4. Ao nível celular, ela induz a divisão e diferenciação de células sanguíneas. Em defesa própria, agregados e cápsulas se desenvolvem no hemocélio de animais infectados (Fig. 5)5,6. Células sanguíneas ativadas migram em direção ao ovo da vespa (ou larva da vespa) e começam a formar uma cápsula ao seu redor (Fig. 5A-F). Algumas células sanguíneas se agregam para formar nódulos (Fig. 5G-H). Uma análise cuidadosa revela que a infecção por vespas induz os lóbulos mais anteriores da glândula linfática a se dispersarem em suas periferias (Fig. 6C, D).
Apresentamos dados representativos com componentes da via de transdução de sinal Toll, Dorsal e Spätzle (Figs. 4,5,7), e seu gene alvo Drosomycin (Fig. 6), para ilustrar como alterações específicas na glândula linfóide e no hemocela podem ser estudadas após infecção por vespas. Os protocolos de dissecação descritos aqui também permitem obter os ovos de vespas (ou estágios em desenvolvimento de vespas) do hemolinfa do hospedeiro (Fig. 8).

Parasitóide (parasita) vespas constituem uma classe importante de inimigos naturais de insetos, incluindo muitos<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt;. Vamos introduzir as técnicas para propagar estes parasitas em<em&gt; Drosophila</em&gt; Spp. e demonstrar como analisar seus efeitos sobre os tecidos imunes de<em&gt; Drosophila</em&gt; Larvas.

Uma Introdução à Vespas parasitas de<em&gt; Drosophila</em&gt; E Resposta Imune a antiparasitários

A maioria das espécies conhecidas de vespas parasitoides ataca os estágios larval ou pupal de Drosophila. Enquanto a Trichopria drosophilae infecta os estágios pupais do hospedeiro (Fig. ...

Os objetivos gerais deste procedimento são demonstrar como manter culturas de vespas parasitoides em hospedeiros drosófilas e como dissecar glândula linfática e corpo gorduroso. Isso é realizado primeiramente cultivando vespas em larvas de drosófila. Em seguida, os animais são dissecados para isolar as glândulas linfáticas das larvas, o que envolve remover a cutícula e retirar os corpos gordurosos e outras estruturas menores para isolar as glândulas linfáticas.Da mesma forma, os corpos gordurosos em si podem ser isolados usando um procedimento semelhante com imunocitoquímica e microscopia de fluorescência. A expressão gênica e as alterações específicas das células são visualizadas nos tecidos imunes. Após a infestação por vespas, estudamos um sistema único de infecção e imunidade que utiliza a larva de *Drosophila* e sua vespa parasita.Nosso laboratório é um dos poucos onde são mantidos cultivos vivos de parasitoides de drosófila. Assim, somos frequentemente solicitados a compartilhar nossas técnicas. Parasitoides são inimigos naturais de muitos insetos.A espécie que estudamos ataca as fases larvais de muitas espécies de drosófila. No laboratório, utilizamos *Drosophila melanogaste

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Wolbachia em Drosophila infecção bacteriana

Fopius arisanus é um parasitóide de ovos-larvas de moscas da fruta Tephritid que é utilizado com sucesso no controle biológico dessas pragas importantes tropical. Descrevemos aqui um protocolo otimizado para a criação de F. arisanus em pequena escala, utilizando materiais facilmente disponíveis.

Um protocolo Optimizado para Criação Fopius arisanus, Um parasitóide de Frutas Tephritid Flies

Para entender uma ligação entre a resposta imune e comportamento, nós descrevemos um método para medir o comportamento locomotor...

Medição quantitativa da resposta imune e do sono em<em&gt; Drosophila</em

Drosophila melanogaster é um excelente organismo modelo para estudar o sistema imunológico inato e as consequências fisiológicas de infecções e doenças. Este protocolo descreve como fornecer infecções bacterianas robustas e quantitativamente repetíveis a D. melanogaster e como medir subsequentemente a gravidade da infecção e quantificar a resposta imune do hospedeiro.

Infecção bacteriana sistêmica e Imune Defesa Phenotypes em<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Este método demonstra como visualizar a invasão do patógeno em células de inseto com modelos tridimensionais (3D). Hemócitos de larvas de Drosophila foram infectados com patógenos virais ou bacterianos, ou ex vivo ou no vivo. Hemócitos infectados foram, em seguida, fixa e manchados para a imagem latente com um microscópio confocal e subsequente reconstrução celular 3D.

Extração de hemócitos de larvas de Drosophila melanogaster para infecção microbiana e análise

Este protocolo descreve métodos para oralmente expor e infectar a mosca de fruta Drosophila melanogaster com patógenos bacterianos e para medir o número de bactérias infecciosas galpão após infecção do intestino. Ainda mais, descrevemos o efeito de mutantes imunes na mosca sobrevivência após infecção bacteriana oral.

Infecção bacteriana e oral Shedding em Drosophila melanogaster.

Este protocolo descreve um ensaio in vivo de fagocitose no adulto Drosophila melanogaster para quantificar o fagócito reconhecimento e apuramento das infecções microbianas.

Avaliar a resposta imune celular de mosca da fruta, Drosophila melanogaster, usando um ensaio de fagocitose em Vivo

As moscas adultas de Drosophila melanogaster têm sido amplamente utilizadas como organismos modelo para investigar os mecanismos moleculares subjacentes às respostas imunes inatas antimicrobianas e estratégias de infecção microbiana. Para promover o estágio da larva D. melanogaster como um sistema modelo adicional ou alternativo, uma técnica de injeção larval é descrita.

Melanogaster drosophila Protocolo de injeção de larvas

Ganaspis brasiliensis-a larval parasitoide de Drosophila suzukii (uma praga global de cultura de frutas invasivas)-- foi aprovado ou é considerado para introdução na Europa e nos Estados Unidos para o controle biológico desta praga. Este artigo fornece protocolos para a criação em pequena escala e em larga escala deste parasitoide.

Métodos de Criação do Parasitoide Ganaspis brasiliensis, um Agente promissor de controle biológico para a Drosophila suzukii invasiva

O objetivo deste protocolo é facilitar a análise funcional das interações parasitoide–hospedeiro em Asobara japonica e Drosophila melanogaster. Por meio de métodos otimizados de criação, um ensaio de infecção com oviposição única e knockdown gênico mediado por RNAi.

Protocolos para Criação Eficiente e Análise Funcional da Vespa Endoparasitoide Asobara japonica e seu hospedeiro Drosophila melanogaster

Aprenda a cultivar vespas parasitas em larvas de Drosophila e dissecar glândulas linfáticas e corpos adiposos para análise imunológica. Este método permite visualizar respostas imunes in vivo.

Uma Introdução à Vespas parasitas de

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