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DOI: 10.3791/3395-v
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This study focuses on the quantitative measurement of gene regulatory activities of cis-regulatory elements (CREs) during Drosophila melanogaster metamorphic development. The methods involve generating transgenic lines with reporter transgenes to analyze gene expression patterns.
Variação fenotípica para características podem resultar de mutações em cis-regulatórias elemento (CRE) seqüências que controlam os padrões de expressão gênica. Métodos derivados para uso em Drosophila melanogaster pode comparar quantitativamente os níveis de padrões espaciais e temporais de expressão genética mediada por variantes modificadas ou que ocorre naturalmente CRE.
O objetivo geral deste procedimento é medir quantitativamente as atividades regulatórias gênicas dos elementos reguladores do CIS ou CRE ativo durante o desenvolvimento gastrometamórfico da drosophila melan. Comece com métodos de integração específicos do local para gerar linhas de CREs Transgenicamente Incorporadas como transgenes repórteres. Usando um microscópio estereoscópico, obtenha amostras transgênicas do estágio de desenvolvimento correto.
Remova as amostras do pub externo e monte-as em um microscópio de vidro. Deslize para registrar o nível e o padrão de expressão da proteína repórter fluorescente em amostras de montagem inteira por análise microscópica confocal. Finalmente, quantifique o nível de expressão da proteína repórter fluorescente para imagens confocais gravadas usando a ferramenta de software Image J.
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