Modelo do rato de endometriose cirurgicamente induzida pela Auto-transplante de tecido uterino

O objetivo geral deste procedimento é induzir cirurgicamente endometriose em camundongos por meio da transferência autóloga de tecido uterino para a cascata arterial do mesentério intestinal. Isso é realizado primeiramente ligando, removendo e expondo o endométrio do útero. O segundo passo do procedimento consiste em criar três implantes endometrioides a partir do endométrio exposto, utilizando uma furadeira de biópsia de dois milímetros.

O terceiro passo do procedimento é suturar os três implantes endometrióides às artérias na cascata arterial do mesentério intestinal. O passo final do procedimento é fechar a parede abdominal e a pele e permitir que o animal recupere as lesões endometrióides. Os espécimes ressecados de camundongos assemelham-se aos de mulheres com endometriose, conforme determinado pela análise histológica e pelos padrões de expressão gênica e proteica.

De modo geral, indivíduos novos neste método enfrentarão dificuldades por três razões principais. Primeiro, os tecidos de camundongo são muito pequenos. Segundo, o mesentério intestinal é facilmente danificado, e terceiro, pontos cirúrgicos colocados com muita firmeza resultarão em necrose intestinal.

Inicie reunindo todo o equipamento cirúrgico necessário para uma cirurgia asséptica bem-sucedida, incluindo soluções para analgesia e anestesia. Após anestesiar o animal com isoflurano inalado, confirme a anestesia completa pela ausência de resposta a um estímulo de pinçamento no dedo do pé; para prevenir ressecamento durante a cirurgia, aplique pomada oftálmica nos olhos e, em seguida, rape a área cirúrgica usando tesouras pequenas. Desinfete o local cirúrgico com três passagens alternadas de solução de clorexidina e etanol a 70%, e depois cubra o animal com um campo estéril.

Realize uma pequena incisão mediana utilizando tesoura pequena ou lâmina de bisturi, terminando de 0,5 a 1,0 centímetro cranialmente à abertura vaginal. Disseque cuidadosamente a parede corporal da parede abdominal para facilitar o fechamento do local cirúrgico. Após a dissecação romba, faça uma pequena incisão mediana na parede abdominal.

Em seguida, usando pinças pequenas, localize suavemente o corno uterino esquerdo. O útero está dorsal ao intestino, que é o que normalmente é visível ao entrar pela primeira vez no local da incisão; levante levemente o corno uterino e deslize uma pinça aberta sob ele para servir como um afastador. Também é útil observar, neste momento, a aparência dos ovários e do útero.

Para auxiliar na determinação do ciclo estral. Deslize duas peças de seis a oito centímetros de fio de seda preto trançado 5-0 sob o corneto uterino esticado. Ligue com firmeza o corneto na junção utero-tubária.

Apenas acomode até o tubo uterino e na junção uterocervical. Usando um nó quadrado em cada localização, deixe as pontas da sutura sem cortar. Remova o segmento do cornete uterino entre as duas ligaduras e coloque o tecido em uma placa de Petri de vidro contendo aproximadamente 100 microlitros de PBS com penicilina e estreptomicina.

Corte as extremidades do fio de seda por último. Se o fio se soltar ou houver sangramento, localize o coto e dê outro nó ou não use tesoura pequena. Remova a gordura do corno uterino.

Abra o corneto uterino inserindo uma lâmina de uma pequena tesoura no lúmen. Deslize suavemente a tesoura ao longo do corneto uterino enquanto segura o corneto com pinça. Na placa de Petri de vidro, use um punch de biópsia de dois milímetros para recortar três implantes de tamanho igual, tomando cuidado para que não sequem.

Coloque uma gaze estéril imediatamente acima do local da incisão e umedeça-a completamente com PBS estéril contendo penicilina e estreptomicina. É importante manter a hidratação durante todas as etapas seguintes com pinça pequena e lisa. Localize suavemente o ceco e mova-se em direção oral ao longo do intestino delgado.

Puxe uma pequena seção de quatro a cinco centímetros do intestino e organize-a como um leque sobre a gaze previamente umedecida, de modo que a cascata arterial do mesentério intestinal fique claramente visível. Certifique-se de manter o intestino úmido em todos os momentos com solução salina estéril. Coloque um implante sobre uma agulha e, em seguida, use sutura preta autógena n° 6 para fixar suavemente o implante a uma artéria localizada aproximadamente a 0,5 centímetros do intestino.

Use apenas um. Arremesse a pinça e não aperte o sutura muito forte. Fazer isso pode resultar em perda do fluxo sanguíneo e subsequente necrose do intestino.

Complete dois nós com um laço, arremesse cada um e corte o fio cirúrgico a cerca de dois milímetros do implante, hidrate o intestino. Em seguida, movendo-se em direção rostral. Puxe os próximos três a quatro centímetros do intestino e reposicione suavemente a seção que já contém um implante.

Pule uma ou duas artérias a partir do local anterior de implante e sutura o próximo implante; repita o procedimento para o terceiro implante. Por fim, suture a parede abdominal e feche a pele com clipes cirúrgicos. Após o fechamento do local cirúrgico e a administração de analgésicos, coloque o animal com a face ventral voltada para baixo na gaiola, parcialmente sobre uma placa aquecida com água recirculante, até que o animal se recupere.

Para recuperar as lesões endometrioides, localize os pontos pretos no mesentério intestinal. Meça o comprimento e a largura de cada lesão endometrioide usando paquímetro. Disseque as lesões endometrioides, tomando cuidado para não perfurá-las.

Remova qualquer tecido não endométrioide da lesão. Agite suavemente as três lesões endométricas preenchidas com líquido antes de remover o ponto. Remova cuidadosamente o ponto e fure duas das lesões endométricas.

Pese-os novamente antes de prosseguir para o processamento do tecido. Em seguida, resseque e pese o corno uterino remanescente. A análise histológica da endometriose em mulheres e no modelo murino apresentado aqui indica que a lesão endometrioide contém glândulas e estroma endometriais. Lesões endometrióticas em camundongos também contêm macrófagos carregados de hemossiderina, que são uma característica comum da endometriose em mulheres. Lesões endometrioides removidas de camundongos três dias após a indução apresentam-se inflamadas e hemorrágicas, como mostrado à esquerda, após duas a quatro semanas de crescimento.

Lesões endometrióticas no modelo murino são císticas, semelhantes a cistos cheios de líquido e rodeadas por aderências peritoneais, em comparação com o peso da lesão na indução. Lesões cheias de líquido foram 306% e 862% maiores, e lesões em forma de lança foram 51% e 172% maiores, respectivamente, um e dois meses após a indução. Lesão endometrioide cheia de líquido e em forma de lança.

Os pesos permanecem consistentes um mês após a indução em cinco experimentos diferentes realizados segundo este procedimento. Este modelo pode ser utilizado para responder perguntas sobre a fisiopatologia da endometriose e para explorar terapêuticas inovadoras para o tratamento da dor e da infertilidade associadas a esta doença.