Name: Implantação intracraniana com 3D subseqüentes In Vivo Bioluminescent imagem de Gliomas murino (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: Aprenda a criar um modelo intracraniano de gliomas em camundongos C57BL/6 usando células GL261 e imagem por bioluminescência in vivo. Esta técnica permite acompanhar o crescimento tumoral em tempo real.

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Nós gostaríamos de agradecer o Dr. Joshua B. Rubin pelo dom generoso de os plasmídeos para o sistema de lentivírus, assim como Rao Mahil para sugestão útil na preparação das células GL261-luc. Agradecemos a Estudantes Apoio à Pesquisa do tumor cerebral (SSBTR), The Barrow Neurological Foundation e da Fundação Wallace, por seu apoio generoso. Experimentos em animais foram realizados de acordo com as diretrizes e regulamentos estabelecidos pelo Institutional Animal Care e do Comitê Use do Hospital São José e Centro Médico.

<ol><li>Candolfi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+glioblastoma+models+in+preclinical+neuro-oncology%3A+neuropathological+characterization+and+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurooncol%22%5BJournal%5D)">Intracranial glioblastoma models in preclinical neuro-oncology: neuropathological characterization and tumor progression.</a> J Neurooncol. 85, 133-148 (2007).</li>
<li>Stafford, P., Abdelwahab, M. G., do, K. im, Preul, Y., Rho, M. C., M, J., Scheck, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ketogenic+diet+reverses+gene+expression+patterns+and+redudes+reactive+oxygen+species+levels+when+used+as+an+adjuvant+therapy+for+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Nutr+Metab%22%5BJournal%5D)">The ketogenic diet reverses gene expression patterns and redudes reactive oxygen species levels when used as an adjuvant therapy for glioma.</a> Nutr Metab. 7, (2010).</li>
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</ol>

Acesso livre para este artigo é patrocinado pela Caliper Life Sciences.

O inóculo de células é infundida a uma profundidade de 2,6 mm da superfície do cérebro depois de criar uma bolsa de 0,4 mm. Para assegurar a colocação adequada e profundidade da agulha um raio-X pode ser tomada através de um C-Arm ou outro dispositivo de imagem semelhante de raios-X intensificando, no entanto, este é opcional. Complicações da cirurgia podem surgir se o animal não está devidamente sedado, altura em que o animal pode se mover durante a infusão de células. Isto pode causar vazamento de mistura de células ou sangramento da trilha da agulha. Vazamento de células provoca o crescimento de células tumorais ectópica. Também é importante para não perfurar o ventrículo o que pode ser feito se o burrhole medial é feita para o 2,3 mm descritos no protocolo 4. Colocação adequada da propagação agulha e celular foi testada através da infusão de um mouse com 2 mL azul de metileno e dissecando o tecido cerebral para verificar a localização do corante infundida. Neste protocolo temos utilizado a Spectrum IVIS in vivo imagens de sistema e tele Vivendo software de imagem (v 4.0) projetado para uso com este instrumento. (Caliper Life Sciences). Qualquer comparável in vivo do sistema de imagem e ferramentas de análise de imagem pode ser usada para obter resultados semelhantes. Estes sistemas oferecem algumas vantagens sobre a ressonância tradicional magnética (MRI) para acompanhar o crescimento de um tumor experimental intracraniana. O mais óbvio é o custo relativo dos dois instrumentos - máquinas de ressonância magnética animais são muito mais caros e, normalmente, necessitam dos serviços de um técnico especializado MRI. In vivo de imagens, como o que foi descrito aqui pode ser feito pelo usuário final. Os dados bioluminescência é quantitativa, enquanto quantificação de dados de MRI é demorado e um pouco inexata. Além disso, imagens de ressonância magnética mostram edema e inflamação, além de células tumorais e pode ser difícil separar tumor do efeito do tratamento. Por estas razões a obtenção de medições precisas volumétrica do tumor em crescimento pode ser um desafio. Bioluminescência requer ATP, Portanto somente as células tumorais que vivem contribuir para os dados de tamanho do tumor. Apesar disso, existem algumas vantagens de MRI se uma máquina está disponível. As células não precisam ser rotulados com um marcador bioluminescente para ser visualizado por MRI. A capacidade de visualizar peri-tumoral edema pode ser uma vantagem para alguns protocolos experimentais. A força das duas tecnologias é que o uso de uma não exclui a utilização do outro, portanto os dados podem ser obtidos no crescimento do tumor, bem como a presença de peri-tumoral edema e inflamação do mesmo animal, quando as duas tecnologias estão disponíveis para o pesquisador.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente ou fornecimento </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários </td></tr><tr><td> GL261-luc2 Bioware Ultra </td><td> Caliper Life Sciences </td><td> GL261-luc2 </td><td></td></tr><tr><td> Modificado Dulbecco Eagle Medium (DMEM) </td><td> Invitrogen </td><td> 10313039 </td><td></td></tr><tr><td> Geneticin (G418) </td><td> Gibco (Invitrogen) </td><td> 11811-023 </td><td></td></tr><tr><td> Soro fetal bovino (FCS) </td><td> Invitrogen </td><td> 26140079 </td><td></td></tr><tr><td> Fosfato Buffered Saline (PBS) </td><td> Invitrogen </td><td> 70011044 </td><td></td></tr><tr><td> Ratos C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr </td><td> NCI-Frederick </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Lágrimas AKWA Pomada Oftálmica Lubrificante </td><td> Akorn Inc </td><td> 17478-062-35 </td><td></td></tr><tr><td> Ketaset (cloridrato de cetamina) </td><td> Wyeth </td><td> 11570775 </td><td></td></tr><tr><td> Sedazine (cloridrato de xilazina) </td><td> Wyeth </td><td> 10031894 </td><td></td></tr><tr><td> Instrumento estereotáxica Pequenos Animais </td><td> Kopf Instruments </td><td> 900 </td><td></td></tr><tr><td> UltraMicroPump com SYS-MICRO4 Controlador </td><td> Precision Instruments mundo </td><td> UMP3-1 </td><td> Se não estiver disponível, é possível para infundir manualmente </td></tr><tr><td> 10μl seringa com 26 gauge agulha chanfrada </td><td> Precision Instruments mundo </td><td> SGE010RNS </td><td></td></tr><tr><td> Adison Pinça </td><td> Precision Instruments mundo </td><td> 500092 </td><td></td></tr><tr><td> Penfield Dissector </td><td> Codman </td><td> 65-1015 </td><td></td></tr><tr><td> 16g 1 ½ Precision Glide Needle </td><td> Beckton, Dickinson and Company (BD) </td><td> 305198 </td><td></td></tr><tr><td> Cabo da lâmina cirúrgica </td><td> BD </td><td> 371030 </td><td></td></tr><tr><td> Lâmina tamanho 15 </td><td> BD </td><td> 371315 </td><td></td></tr><tr><td> Sutura Vicryl 4-0 </td><td> Ethicon </td><td> VCP496G </td><td></td></tr><tr><td> Cera de osso </td><td> Medline </td><td> DYNJBW25 </td><td></td></tr><tr><td> Iodo-povidine Sticks Swab </td><td> Medline </td><td> MD93901 </td><td></td></tr><tr><td> D-Luciferina sal de potássio </td><td> Caliper Life Sciences </td><td> 122796 </td><td></td></tr><tr><td> Forâneo (isoflurano) </td><td> Baxter </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> OPMI Microscópio Pentero </td><td> Carl Zeiss, Inc. </td><td></td><td> Qualquer microscópio cirúrgico será suficiente </td></tr><tr><td> Xenogen Spectrum IVIS com sistema de anestesia opcional </td><td> Caliper Life Sciences </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

implantação intracraniana com 3d subseqüentes in vivo bioluminescent imagem de gliomas murino

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

O mouse glioma 261 (GL261) é reconhecido como um sistema modelo in vivo que recapitula muitas das características de glioblastoma multiforme humano (GBM). A linhagem de células foi originalmente induzida pela injeção intracraniana de 3-metil-cholantrene em uma linhagem C57BL / 6 do mouse singeneicos 1 e, portanto, imunologicamente competentes camundongos C57BL / 6 pode ser usado. Enquanto usamos GL261, o protocolo a seguir podem ser usados ​​para a implantação e monitoramento de qualquer modelo de mouse intracraniana tumor. GL261 células foram projetadas para expressar estavelmente firefly luciferase (GL261-luc). Criamos também o mais brilhante linha GL261-luc2 celular por transfecção estável do gene luc2 expressa do promotor CMV. Camundongos C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr (variante albina de C57BL / 6) do National Cancer Institute, Frederick, MD foram utilizados para eliminar a atenuação da luz causada por pele negra e pele. Com o uso de C57BL albino / 6 ratos; em imagem in vivo utilizando o espectro IVIS in vivo imo envelhecimento do sistema é possível a partir do dia da implantação (Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA). O GL261 e GL261-luc-luc2 linhagens celulares mostraram o mesmo comportamento em vivo como o dos pais GL261 células. Algumas das características compartilhadas histológico presente em GBMS humano e este modelo de camundongo incluem: necrose tumoral, pseudopalisades, neovascularização, invasão, hipercelularidade e inflamação 1. Antes da implantação animais foram anestesiados com uma injeção intraperitoneal de cetamina (50 mg / kg), xilazina (5 mg / kg) e buprenorfina (0,05 mg / kg), colocado em um aparelho estereotáxico e foi feita uma incisão com um bisturi sobre o linha média do crânio. A burrhole foi feito posterior ao bregma 0,1 milímetros e 2,3 milímetros para a direita da linha média. A agulha foi inserida a uma profundidade de 0,4 milímetros de 3mm e retirado a uma profundidade de 2,6 milímetros. Dois mL de GL261-luc ou GL261-luc2 células (10 7 células / ml) foram infundidos ao longo de três minutos. O burrhole foi fechadacom bonewax ea incisão foi suturada. Após a implantação estereotáxica as células bioluminescentes são detectáveis ​​a partir do dia da implantação e do tumor podem ser analisadas usando o recurso de reconstrução de imagem 3D do instrumento IVIS Spectrum. Animais recebem uma injeção subcutânea de 150μg luciferina / kg de peso corporal 20 min antes da imagem. Carga tumoral é quantificado usando bioluminescência médio do tumor ao longo do tempo. Tumor-rolamento camundongos foram observados diariamente para avaliar a morbidade e foram sacrificados quando um ou mais dos seguintes sintomas estão presentes: insuficiência letargia, de deambular, postura arqueada, a falta de noivo, resultando em anorexia&gt; perda de 10% do peso. Os tumores eram evidentes em todos os animais em necropsia.

Implantação intracraniana de GL261 células em camundongos C57BL / 6 produz gliomas malignos que recapitulam muitas das características de glioblastoma multiforme humano. Usamos GL261 células expressando estavelmente luciferase para nos permitir usar<em&gt; In vivo</em&gt; Imagem para acompanhar a progressão do tumor. A cirurgia e 3D<em&gt; In vivo</em&gt; Imagens são demonstradas.

Implantação intracraniana com 3D subseqüentes In Vivo Bioluminescent imagem de Gliomas murino

O glioma 261 (GL261) de camundongo é reconhecido como um sistema de modelo in vivo que recapitula muitas das características do glioblastoma multiforme (GBM) humano. O ...

O objetivo geral deste procedimento é criar um modelo intracraniano de gliomas que possa ser quantitativamente acompanhado ao longo do tempo por meio de imagem in vivo. Isso é realizado primeiramente colhendo células de glioma luminescentes, cultivando-as e preparando uma suspensão celular de um a dois vezes 10⁷ células por mililitro. O segundo passo do procedimento é a implantação estereotáxica das células colhidas no lobo frontal direito do cérebro do camundongo.Em seguida, realiza-se a injeção subcutânea de Luciferina no animal e a geração de uma curva cinética da expressão da Luciferina. Utilizando o sistema de imagem in vivo IVUS Spectrum, a etapa final do procedimento é realizar imagens seriadas dos animais e acompanhar o crescimento do tumor. Em última análise, podem ser obtidos resultados que mostram o crescimento das células tumorais e a localização tridimensional do tumor por meio de um sinal bioluminescente detectável utilizando o sistema de imagem in vivo IVUS Spectrum.A principal vantagem dessa técnica em relação aos métodos existentes, como a ressonância magnética, é que a imagem de bioluminescência identifica apenas células tumorais viáveis e não requer um técnico especializado em ressonância magnética. Além disso, permite que os animais sejam imageados simultaneamente em um período de tempo mais curto. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área de neuro-oncologia, como qual é a eficácia de terapias inovadoras para tumores cerebrais.In vivo, embora este método possa fornecer informações sobre tumores cerebrais, ele também pode ser aplicado a outros sistemas orgânicos, como cânceres de pulmão, próstata e hepáticos. Para se preparar para este procedimento, carregue pelo menos três microlitros do inóculo de células de glioma em uma seringa de 10 microlitros e 50 milímetros com agulha biselada de 26 graus.Certifique-se de que as células não estejam agrupadas, pois pode ser necessário recarregar a seringa. O camundongo anestesiado é colocado no estereotáxico e a cabeça do camundongo é fixada usando o prendedor bucal conforme mostrado nesta imagem. Coloque a seringa carregada no microinjetor.Para iniciar o procedimento cirúrgico, faça uma incisão na pele utilizando uma lâmina nº 15 e pinça dentada. Faça uma incisão de 10 a 15 milímetros entre os olhos do animal, movendo-se em direção às orelhas do animal, expondo o bgma. Certifique-se de identificar corretamente o bgma para.Pode ser facilmente confundida com a área sinusal que está distal ao bma. Com uma agulha de 16 polegadas e um comprimento de uma polegada e meia, faça um orifício de trepanação a 0,1 milímetro posterior à sutura coronal e a 2,3 milímetros à direita da linha média, aplicando uma leve pressão sobre a agulha enquanto gira até que o crânio seja penetrado e o cérebro seja exposto. Mova a agulha de injeção utilizando o microinjetor até que ela toque levemente a superfície do cérebro. A partir dessa posição, avance a agulha a uma profundidade de três milímetros.Mantenha a agulha no lugar por três minutos. Em seguida, retire a agulha 0,4 milímetro para uma profundidade total de 2,6 milímetros abaixo da superfície do cérebro. Isso cria um pequeno bolsão onde as células serão infundidas, garantindo posicionamento e profundidade adequados.Imagens de raios X das profundidades da agulha podem ser obtidas usando um braço em C; infunda a suspensão celular ao longo de três minutos usando o microinjetor ajustado para um volume de 2000 nanolitros com uma taxa de infusão de 667 NANOLITERS por minuto. Após a infusão, mantenha a agulha no local por dois minutos para prevenir vazamento no sítio de infusão. Em seguida, retire lentamente a agulha completamente.Após a retirada da agulha, cubra o orifício de trepanação com cera óssea utilizando um dissector Penfield. Por fim, feche a incisão com sutura Vicryl 4-0, certificando-se de que não fiquem grandes espaços abertos na pele. In vivo.A imagem de bioluminescência é realizada com o sistema de imagem IVIS Spectrum. Inicie o software Living Image e inicialize o sistema de imagem IVIS Spectrum clicando no botão inicializar sistema IVIS localizado no canto inferior direito do painel de controle. Selecione o modo de imagem luminiscente no canto superior esquerdo do painel de controle para determinar o tempo ideal de imagem de bioluminescência.Após a injeção de Lucifer no animal, é necessário realizar primeiramente um estudo cinético com o animal sedado na câmara de imagem. Tire a primeira imagem aproximadamente cinco minutos após a injeção de Lucifer para gerar uma curva cinética da expressão luciferiana. Crie uma sequência para capturar imagens a cada três minutos durante até uma hora.Clique no botão de configuração de sequência no painel de controle. No painel de controle, especifique as configurações para a primeira imagem de bioluminescência da sequência, começando com ganho médio e exposição automática.Recomenda-se determinar o tempo de exposição ideal. Selecione o botão de atraso no editor de sequência e especifique um tempo de atraso de três minutos entre cada aquisição. Clique em adicionar; os parâmetros de aquisição no editor de sequência são então adicionados à tabela.Repita este passo para cada imagem da sequência uma vez que a curva for estabelecida. O tempo ideal de aquisição de imagem pode ser determinado pelo traçado da intensidade do sinal versus o tempo, a fim de obter o sinal mais forte e preciso. Os animais devem ser submetidos à aquisição de imagem no momento de maior contagem de fótons in vivo, o que ocorre cerca de 25 minutos após a injeção de Luciferina, conforme mostrado por esta curva.Para adquirir a imagem de um animal experimental, utilize a opção automática em tempo de aquisição. Isso permite que o software determine o bin e o tempo ideal para a aquisição da imagem. Salve os arquivos do programa e os comentários subsequentes das imagens no diretório do computador do usuário.Para iniciar a imagem 3D, use o assistente de imagem para selecionar a sonda repórter de vaga-lume. Na janela de bioluminescência delit, selecione próximo e seis seleções espectrais a serem adquiridas aparecerão na tela; selecione adquirir sequência e as imagens serão capturadas usando as configurações respectivas na guia de topografia da superfície. Na paleta de ferramentas, recorte a fotografia para ajustá-la ao contorno do animal.Para criar uma malha reconstruída da topografia da superfície do animal, acesse a aba de reconstrução 3D do DLI na paleta de ferramentas e selecione as aquisições de imagem apropriadas para a reconstrução do sinal. Certifique-se de que músculo esteja listado em propriedades do tecido e firefly no espectro da fonte. Clique em reconstruir na aba analisar e a reconstrução 3D da superfície do animal e a reconstrução correspondente da fonte do sinal deverão aparecer.A análise dos dados pode ser iniciada após a aquisição da imagem e seu salvamento; acesse o arquivo do programa clicando no botão procurar e selecionando o arquivo. As informações da imagem podem ser encontradas em visualizar informações da imagem. Quantifique a intensidade do sinal selecionando a região de interesse ou o botão de ferramentas de ROI.Certifique-se de que a imagem seja analisada no modo de fóton selecionando a opção fóton. Na lista suspensa no canto superior esquerdo do painel de controle de imagem, selecione o botão ROI de medição na lista suspensa tipo e escolha a forma de ROI de interesse. As opções incluem círculo, quadrado e ou grade.Defina a posição da ROI arrastando a seleção da forma da ROI para a região que contém o sinal de bioluminescência. Certifique-se de cobrir todas as áreas de intensidade na imagem adquirida. Por fim, clique no botão medir para calcular a intensidade do sinal da ROI.O rótulo da ROI é exibido. A intensidade do implante celular bem-sucedido é evidente quando as células implantadas são detectáveis por imagem de bioluminescência no dia da cirurgia, independentemente de as células terem sido transfectadas com o gene luc ou luc2. Este gráfico acompanha o crescimento da célula tumoral GL261-luc em um camundongo albinos C57BL/6; a bioluminescência foi medida a cada três dias e representada como contagem de fótons in vivo versus dias após o implante.As fotografias mostram a bioluminescência em diferentes pontos temporais. A coloração indica a bioluminescência, que é proporcional ao número de células tumorais. Os animais são eutanasiados quando ocorre doença ou mau estado de bem-estar.Embora não seja uma parte padrão dessas análises, o cérebro pode ser dissecado e a luciferina pode ser adicionada topicamente para obter a imagem ex vivo. Isso deve ser feito imediatamente após a eutanásia do animal, pois a reação de bioluminescência requer ATP. Este gráfico compara as contagens de fótons obtidas de tumores resultantes de células GL 2 6 1 lux versus células GL 2 6 1 L dois. Os resultados de uma média de cinco animais mostram que o gene L dois proporciona um nível mais elevado de bioluminescência.A próxima figura mostra múltiplas vistas de uma reconstrução tridimensional da implantação intracraniana de células GL 2 6 1 L dois, registradas simultaneamente com o esqueleto e o cérebro do camundongo. Também foi realizada uma comparação cinética entre injeções subcutâneas e intraperitoneais: três minutos após a injeção de Lucifer, o camundongo foi sedado e submetido à imagem a cada três minutos durante até uma hora, e depois a cada seis minutos, a fim de gerar uma curva cinética de bioluminescência. Como mostrado aqui, uma via de administração subcutânea de Lucifer, indicada em vermelho, é superior à injeção intraperitoneal, indicada em preto, e o momento ideal para imagens dos animais é aproximadamente 25 minutos após a injeção de Lucifer.Uma vez dominada, a técnica cirúrgica pode ser realizada em uma hora, se for executada corretamente. Após este procedimento, outros métodos, como ressonância magnética ou imagem fluorescente, podem ser realizados para responder perguntas adicionais. Por exemplo, se há edema presente ao redor do tumor ou quais outras alterações moleculares ou bioquímicas estão ocorrendo dentro e ao redor do tumor.Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como realizar um implante intracraniano e a imagem tridimensional in vivo de células de glioma murino.

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Implantação estereotáxica intracraniana e<em&gt; Em vivo</em&gt; Imaging Bioluminescent de xenoenxertos de tumores em um Sistema Modelo de Rato Glioblastoma Multiforme

Fonte: Clark, A.J., et al. Imagem de bioluminescência de um modelo animal imunocompetente para glioblastoma. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra imagens de bioluminescência para rastrear a progressão do glioblastoma em um modelo de camundongo imunocompetente, usando células tumorais que expressam luciferase e luciferina para quantificar o crescimento do tumor de forma não invasiva.

Imagem de bioluminescência de um modelo de camundongo imunocompetente para glioblastoma

Nós estabelecemos um modelo de glioblastoma ortotópico cortical em camundongos para microscopia de dois fótons intravital que recapitula as restrições biofísicas normalmente no jogo durante o crescimento do tumor. Uma janela de vidro crônica substituir o crânio acima do tumor permite o acompanhamento da progressão do tumor ao longo do tempo por meio de microscopia de dois fótons.

Um Glioblastoma Rato modelo ortotópico Manter restrições Cérebro parênquima físicas e Adequado para intravital dois fótons Microscopia

As células de glioma GL261 fornecem um modelo animal imunocompetente útil de glioblastoma. Os objetivos deste protocolo são demonstrar técnicas adequadas para monitorar o crescimento do tumor intracraniano usando imagens de bioluminescência in vivo e verificar a utilidade das células GL261 modificadas com luciferase para estudar a imunologia tumoral e abordagens imunoterapêuticas para o tratamento do glioblastoma.

Bioluminescência imagem de um modelo animal para imunocompetentes Glioblastoma

Ortotópico intracraniana injeção de células de tumor tem sido usada na pesquisa do câncer para estudar a biologia do tumor de cérebro, progressão, evolução e resposta terapêutica. Aqui nós apresentamos fluorescência molecular tomografia computadorizada de xenografts tumor, que fornece em tempo real imagens intravital e quantificação de um tumor massa em modelos pré-clínicos glioblastoma.

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A microdissecção a laser (LMD) é uma técnica sensível e altamente reprodutível que pode ser usada para descobrir caminhos que mediam a heterogeneidade e invasão do glioma. Aqui, descrevemos um protocolo otimizado para isolar áreas discretas do tecido glioma usando LMD a laser seguido de análise transcritiva.

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Descrevemos o transplante intraparenquimal de células progenitoras neurais transduzidas com um vetor de repórter duplo expressando proteína fluorescente verde-luciferase (GFP) no cérebro do camundongo. Após o transplante, o sinal de luciferase é repetidamente medido usando bioluminescência in vivo e células enxertadas expressas por GFP identificadas em seções cerebrais usando microscopia de fluorescência.

Transplante intracerebral e rastreamento de bioluminescência in vivo de células progenitoras neurais humanas no cérebro do camundongo

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O objetivo desse protocolo é fornecer aos pesquisadores uma técnica altamente reprodutível para implantações intracranianas.

Implantação intracraniana estereotáxica de linhagens celulares de xenoenxerto derivadas de Glioblastoma em Pacientes

Aprenda a criar um modelo intracraniano de gliomas em camundongos C57BL/6 usando células GL261 e imagem por bioluminescência in vivo. Esta técnica permite acompanhar o crescimento tumoral em tempo real.

Implantação intracraniana com 3D subseqüentes In Vivo Bioluminescent imagem de Gliomas murino

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