Name: Propagação e detecção de um Clone Infecciosas Molecular da Maedi-visna vírus que expressa a proteína fluorescente verde (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-10-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 49 s
Description: Aprenda a propagar e detectar um clone infeccioso do vírus maedi-visna que expressa proteína verde fluorescente em células de plexo coroide de ovinos. Este método permite monitorar a replicação viral por microscopia de fluorescência e citometria de fluxo.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este trabalho foi financiado pelo Fundo de Pesquisa da Islândia e da Universidade da Islândia Fundo de Investigação.

1. Transfecção O clone molecular está contida em dois plasmídeos, p8XSp5-EGFP e p67r, de 12 kb e 4,5 kb, respectivamente. 9,10 <ol><li> Corte quantidades equimolares dos dois plasmídeos, ou seja, 4,4 mg de p8XSp5-EGFP e 1,6 mcg de p67r com XbaI e ligar antes de transfecção. </li><li> Para a ligadura, use uma unidade de Weiss de ligase em uma reação de 50 ul e incubar a 16 ° C durante a noite. </li><li> Quando a ligadura é completada, incubar a mistura de ligadura a 65 ° C por 15 min para inativação da ligase. Este passo pode ser omitido. </li><li> Dois dias antes de semente de transfecção, 10 6 células SCP num frasco de cultura de tecidos T25, e cultivar células por dois dias em 5 ml DMEM + 10% de soro de carneiro e glutamina 2mM sem antibióticos para uma monocamada de 90% confluência. Se as células não tiverem alcançado 90% confluência depois de dois dias, deixar as células a crescer um dia adicional. </li></ol> Nota: O soro de cordeiro pode ser substituído por soro fetal bovino (FBS). Nós usam rotineiramente cordeiro soro, uma vez que algumas cepas de MVV são inibidas por FBS; esta estirpe MVV não é inibida por FBS, no entanto. <ol start="5"><li> Quando as células estão prontos para a transfecção, as alterações médio e DMEM com soro 1% (soro ou cordeiro FBS) sem antibióticos. Usamos Lipofectamin 2000 (Invitrogen) para transfecção. </li><li> Diluir o DNA em 500μl médio Opti-MEM. </li><li> Diluir 20μl Lipofectamin 2000 em 500μl médio Opti-MEM e deixe em temperatura ambiente (RT) por 5 min. </li><li> Após a incubação de 5 minutos, misture o DNA diluído com Lipofectamine diluída 2000 (volume total = mL 1000). Misture delicadamente e incubar por 20-30 min em temperatura ambiente. </li><li> Adicione a mistura de transfecção (1 ml) para o frasco contendo células T25 SCP e médias empresas (5 ml). Mix movimentando-se suavemente. </li><li> Incubar a 37 ° C e 5% CO 2 durante a noite (18-24 h). </li><li> Mudar o dia do meio a seguir para DMEM com soro 1%, 2mM de glutamina, penicilina e estreptomicina 100IU 100IU. </li><li> Monitorar a produção de GFP em células SCP por microscopia fluorescente invertido. Eficiência de transfecção baixo pode ser esperado com essas células primárias, geralmente 5-15%. </li><li> Incubar mais tempo, a 37 ° C, 5% CO 2 por vários dias para permitir a propagação do vírus no frasco. Ele normalmente leva 7-14 dias para a infecção por completo. </li><li> Recolher o vírus por alíquotas do sobrenadante em tubos Eppendorf. Girar em uma microcentrífuga a 3000 rpm por 5 min para remover restos celulares. Transferir o sobrenadante contendo o vírus para novos tubos. Armazenar a -80 ° C. </li></ol> 2. Titulação do vírus <ol><li> Semente de 3x10 4 células SCP em 100 mL meio DMEM suplementado com soro de 10%, a glutamina 2mM, penicilina e estreptomicina 100IU/ml 100IU/ml, por bem em uma placa de 96 poços. Incubar a 37 ° C, 5% CO 2. </li><li> Se as células são confluentes no dia seguinte, a mudança médio e DMEM com soro 1%, a glutamina 2mM, penicilina e estreptomicina 100IU/ml 100IU/ml, 100 l em cada poço. </li><li> Diluir o vírus da seguinte forma: <ol><li> Adicionar 180 mL DMEM com soro 1%, 2mM de glutamina, penicilina e estreptomicina 100IU/ml 100IU/ml por poço de 4 x 10 poços em um fundo de 96 poços redondos ou V-bottom prato. </li><li> Para diluições em série de dez vezes em quatro vias, adicionar 20 mL de vírus a cada um dos 4wells na primeira coluna da placa, e usando uma pipeta de quatro canais, pipeta cima e para baixo para garantir que as amostras sejam bem misturados. Trocar a ponteira e transferir 20 l para os próximos quatro poços e assim por diante. Deixe o passado sem poços de vírus para controle negativo. </li></ol></li><li> Adicione 100 ml das diluições do vírus às células SCP e médias empresas. </li><li> Incubar a 37 ° C e 5% CO 2. Observe para GFP fluorescência e efeitos citopáticos por duas semanas. Efeitos citopáticos são constituídas por células arredondadas e tornando-se menos transparentes do que as células normais com os processos que se estende para fora, terminando com as multinucleares aparecendo e morte celular. </li><li> Calcule vírus título (TCID50), utilizando o método Reed Muench 11. </li></ol> 3. FACS análise de células infectadas Nota: Para o monitoramento rápido de replicação do vírus, as células infectadas podem ser examinadas por citometria de fluxo. <ol><li> Trypsinize células infectadas (10 ca 5), lavar com PBS 1x e ressuspender em 500μl de PBS. </li><li> Adicionar 500 mL de solução de paraformaldeído 4% (2% de concentração final), incubar a RT por 30 min. </li><li> Células sedimento em uma microcentrífuga a 3000 rpm por 5 min. </li><li> Lavar com PBS 2x5 min e analisar em um analisador FACScan. Contagem de 10.000 eventos. </li></ol> 4. Resultados representativos: Este vírus devem ser totalmente infecciosas e replicar a um título de 10 junho - 10 julho TCID 50 ml /. Células infectadas são fluorescentes e pode ser detected por citometria de fluxo e microscopia de fluorescência. Tipicamente, GFP pode ser detectada em mais de 60% das células em cultura de células infectadas por citometria de fluxo (Fig. 1). Da mesma forma, quando visualizados por microscopia de fluorescência, a maioria das células são fluorescentes (Fig. 2A e B). <img src="/files/ftp_upload/3483/3483fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. FACScan análise de células infectadas com o SCP KV1772-EGFP vírus após 7 dias de infecção. <img src="/files/ftp_upload/3483/3483fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Microscopia de contraste de fase de células infectadas com o SCP KV1772-EGFP após 7 dias de incubação (A). Mesmas células visualizadas por microscopia de fluorescência (B).

<ol><li>Sigurdsson, B., Palsson, P. A., Grimsson, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visna%2C+a+demyelinating+transmissable+disease+of+sheep%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuropathol.+Exp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Visna, a demyelinating transmissable disease of sheep.</a> J. Neuropathol. Exp. Neurol. 14, 389-403 (1957).</li>
<li>Gorrell, M. D., Brandon, M. R., Sheffer, D., Adams, R. J., Narayan, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovine+lentivirus+is+macrophagetropic+and+does+not+replicate+productively+in+T+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Ovine lentivirus is macrophagetropic and does not replicate productively in T lymphocytes.</a> J. Virol. 66, 2679-2688 (1992).</li>
<li>Andresdottir, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+and+genetic+differences+between+lung-+and+brain-derived+isolates+of+maedi-visna+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Virus+Genes%22%5BJournal%5D)">Biological and genetic differences between lung- and brain-derived isolates of maedi-visna virus.</a> Virus Genes. 16, 281-293 (1998).</li>
<li>Georgsson, G., Houwers, D. J., Palsson, P. A., Petursson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+viral+antigens+in+the+central+nervous+system+of+visna-infected+sheep%3A+an+immunohistochemical+study+on+experimental+visna+induced+by+virus+strains+of+increased+neurovirulence%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Expression of viral antigens in the central nervous system of visna-infected sheep: an immunohistochemical study on experimental visna induced by virus strains of increased neurovirulence.</a> Acta Neuropathol. 77, 299-306 (1989).</li>
<li>Turelli, P., Guiguen, F., Mornex, J. F., Vigne, R., Querat, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((dUTPase-minus+caprine+arthritis-encephalitis+virus+is+attenuated+for+pathogenesis+and+accumulates+G-to-A+substitutions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">dUTPase-minus caprine arthritis-encephalitis virus is attenuated for pathogenesis and accumulates G-to-A substitutions.</a> J. Virol. 71, 4522-4530 (1997).</li>
<li>Petursson, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visna+virus+dUTPase+is+dispensable+for+neuropathogenicity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Visna virus dUTPase is dispensable for neuropathogenicity.</a> J. Virol. 72, 1657-1661 (1998).</li>
<li>Sigurdsson, B., Thormar, H., Palsson, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cultivation+of+visna+virus+in+tissue+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Gesamte+Virusforsch%22%5BJournal%5D)">Cultivation of visna virus in tissue culture.</a> Arch Gesamte Virusforsch. 10, 368-380 (1960).</li>
<li>Gudmundsdottir, H. S., Olafsdottir, K., Franzdottir, S. R., Andresdottir, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Construction+and+characterization+of+an+infectious+molecular+clone+of+maedi-visna+virus+that+expresses+green+fluorescent+protein%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Construction and characterization of an infectious molecular clone of maedi-visna virus that expresses green fluorescent protein.</a> J. Virol. Methods. 168, 98-102 (2010).</li>
<li>Andresson, O. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleotide+sequence+and+biological+properties+of+a+pathogenic+proviral+molecular+clone+of+neurovirulent+visna+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Nucleotide sequence and biological properties of a pathogenic proviral molecular clone of neurovirulent visna virus.</a> Virology. 193, 89-105 (1993).</li>
<li>Skraban, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Naturally+occurring+mutations+within+39+amino+acids+in+the+envelope+glycoprotein+of+maedi-visna+virus+alter+the+neutralization+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Naturally occurring mutations within 39 amino acids in the envelope glycoprotein of maedi-visna virus alter the neutralization phenotype.</a> J. Virol. 73, 8064-8072 (1999).</li>
<li>Reed, L. J., Muench, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+of+estimating+fifty+percent+endpoints%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Hygiene%22%5BJournal%5D)">A simple method of estimating fifty percent endpoints.</a> American Journal of Hygiene. 27, 493-497 (1938).</li>
<li>Berkowitz, R. D., Ilves, H., Plavec, I., Veres, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+transfer+systems+derived+from+Visna+virus%3A+analysis+of+virus+production+and+infectivity%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">Gene transfer systems derived from Visna virus: analysis of virus production and infectivity.</a> Virology. 279, 116-129 (2001).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

A GFP expressar clone molecular de MVV aqui apresentados deve ser útil para analisar as interações da célula hospedeira e patogenicidade do MVV tanto in vitro como in vivo. O vírus obtidos após 7-14 dias de replicação, sem dúvida, adquiriu algumas mutações devido à imprecisão da transcriptase reversa. No entanto, existem limitações para o uso deste clone como um vetor único ciclo. Uma delas é que o uso do clone é restrita a células de ovelhas e cabras de origem. A eficiência de transfecção destas células usando nossa co...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Gibco </td><td> 10938025 </td></tr><tr><td> Opti-MEM </td><td> Gibco </td><td> 51985018 </td></tr><tr><td> Lipofectamine 2000 </td><td> Invitrogen </td><td> 11668019 </td></tr></tbody></table>

propagação e detecção de um clone infecciosas molecular da maedi-visna vírus que expressa a proteína fluorescente verde

Propagating and Detecting an Infectious Molecular Clone of Maedi-visna Virus that Expresses Green Fluorescent Protein

Maedi-visna (MVV) é um lentivírus de ovelhas, fazendo com que lentamente progressiva pneumonia intersticial e encefalite 1. As células-alvo primário do MVV in vivo são consideradas das duas linhagem de monócitos. Determinadas estirpes de MVV pode replicar em outros tipos de células, no entanto 3,4. A proteína verde fluorescente é um marcador comumente usado para estudar lentivírus em células vivas. Temos inserido o gene EGFP no gene para dUTPase de MVV. O gene dUTPase está bem conservado em cepas mais lentivírus de ovinos e caprinos e tem se mostrado importante na replicação do CAEV 5. No entanto, dUTPase foi mostrado para ser dispensáveis ​​para a replicação do clone molecular de MVV utilizados neste estudo in vitro e in vivo 6. Replicação MVV é estritamente confinada às células de ovelhas ou cabras origem. Nós usamos uma linhagem de células primárias do plexo coróide de ovelhas (células SCP) para transfecção e propagação do vírus 7. O MVV fluorescentes é totalmente infecciosas e expressão EGFP é estável durante pelo menos seis passagens 8. Há boa correlação entre as medidas de TCID 50 e EGFP. Este vírus deve ser útil para a detecção rápida de células infectadas em estudos de tropismo celular e patogenicidade in vitro e in vivo 8.

Nós descrevemos um clone molecular da Maedi-visna vírus que expressa a GFP e é totalmente infecciosas. Replicação deste vírus pode ser detectado por meio de microscopia de fluorescência e citometria de fluxo.

Propagação e detecção de um Clone Infecciosas Molecular da Maedi-visna vírus que expressa a proteína fluorescente verde

O vírus Maedi-visna (MVV) é um lentivírus de ovinos, causador de pneumonia intersticial e encefalite progressivamente lentas1. As principais células-alvo do MVV em ...

O objetivo geral deste procedimento é propagar e detectar um clone infeccioso de Mildy versus sem vírus que expressa a proteína verde fluorescente. Esta proteína verde fluorescente foi clonada no gene da capa do D utp Ace no genoma do vírus Myy Ner.O clone infeccioso está contido em dois plasmídeos. Primeiro, os dois plasmídeos que carregam as sequências myy Ner são cortados com a enzima de restrição xpa um e ligados. Em seguida, células do plexo coroide de ovelha são transfectadas com o construto.Por fim, as células infectadas pelo vírus myy vino são detectadas por microscopia fluorescente e citometria de fluxo. Olá, sou Stefano Neron do Instituto TER de Patologia Experimental da Universidade da Islândia. Hoje vamos mostrar um procedimento para propagar e detectar um clone molecular infeccioso do meu vírus vascular que expressa a proteína verde fluorescente.O clone molecular está contido nos plasmídeos P oito XSP cinco EGFP e P seis sete ou de 12 quilobases e 4,5 quilobases, respectivamente. Corte quantidades equimolares dos dois plasmídeos, ou seja, 4,4 microgramas de P oito XSP cinco EGFP e 1,6 microgramas de P seis sete ou com XPA um e ligue antes da transfeção. Quando a ligação estiver concluída, incube a mistura de ligação a 65 graus Celsius por 15 minutos. Dois dias antes da transfeção, semeie 10 elevado a seis células SCP em um frasco de cultura de tecidos T 25 e cultive as células por dois dias em cinco mililitros de DMEM acrescido de 10% de soro de cordeiro e dois milimolares de glutamina, sem antibióticos, até uma confluência de monocamada de 90%.Se as células não atingirem 90%CO após dois dias, deixe as células crescerem por mais um dia. O soro de cordeiro pode ser substituído pelo soro bovino fetal FBS. Usamos rotineiramente soro de cordeiro porque alguns sorotipos do MVV são inibidos pelo FBS.No entanto, esta linhagem de MVV não é inibida pelo soro bovino fetal (FBS). Quando as células estiverem prontas para transfeção, troque o meio por DMEM contendo 1% de soro de bezerro ou FBS, sem antibióticos. Utilizamos Lipofectamine 2000 para a transfeção: dilua o DNA em 500 microlitros de meio opti MEM, dilua 20 microlitros de Lipofectamine 2000 em 500 microlitros de meio opti MEM e deixe em temperatura ambiente por cinco minutos.Após a incubação de cinco minutos, combine o DNA diluído com o lipofectamina 2000 diluído em um volume total de 1000 microlitros. Misture suavemente e incube por 22 a 30 minutos. À temperatura ambiente, adicione a mistura de transfeção ao frasco T25 contendo as células SCP e o meio, misturando com movimentos suaves de balanço.Incubar a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono durante a noite. No dia seguinte, trocar o meio por DMEM com 1% de soro, dois milimolares de glutamina, 100 UI por mililitro de penicilina e 100 UI por mililitro de estreptomicina. Monitorar a produção de GFP e das células SCP por microscopia fluorescente invertida.Espera-se baixa eficiência de transfeção com essas células primárias, geralmente entre cinco a 15%. Incubar adicionalmente a 37 graus Celsius, 5% dióxido de carbono por vários dias para permitir a disseminação do vírus no frasco. Geralmente leva de sete a 14 dias para infecção completa. Coletar o vírus por Ali, transferindo o sobrenadante para tubos menores.Centrifugue em um microcentrífuga a 3000 ×g por cinco minutos para remover debris celulares. Transfira o sobrenadante contendo o vírus para novos tubos.Armazene a menos 80 graus Celsius sementes com três vezes 10 à quarta células SCP em 100 microlitros de meio DMEM suplementado com 10% de soro, 2 milimolar de glutamina, 100 UI por mililitro de penicilina e 100 UI por mililitro de estreptomicina por poço.Em uma placa de 96 poços, incubar a 37 graus Celsius, 5% de dióxido de carbono. Se as células estiverem confluentes no dia seguinte, trocar o meio por DMEM com 1% de soro. Tendo 100 microlitros em cada poço, diluir o vírus da seguinte maneira.Adicione 180 microlitros de DMEM com 1% de soro por poço a quatro vezes 10 poços em uma placa de 96 poços com fundo redondo ou fundo em V para diluição seriada decimal em quádruplo. Adicione 20 microlitros de vírus a cada um dos quatro poços na primeira coluna da placa. E, utilizando uma pipeta de quatro canais, pipete para cima e para baixo para garantir que as amostras sejam completamente misturadas.Altere as ponteiras da pipeta e transfira 20 microlitros para os próximos quatro poços e assim por diante. Deixe os últimos poços sem vírus como controle negativo. Adicione 100 microlitros da diluição do vírus às células SEP e ao incubador com meio.37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono. Observe por fluorescência GFP e efeitos citopáticos durante duas semanas. Os efeitos citopáticos consistem no arredondamento das células e na redução de sua transparência em comparação com células normais, com prolongamentos citoplasmáticos estendidos, culminando no aparecimento de células multinucleadas e morte celular.Calcule a titulação do vírus utilizando o método de Reed-Muench para monitoramento rápido da replicação do vírus. Células infectadas podem ser examinadas por citometria de fluxo com tripsina. Olhos ao redor de 10 elevado a cinco células infectadas.Lave uma vez com PBS e RESUSPENDA em 500 microlitros. PBS acrescente 500 microlitros de solução de paraformaldeído a 4%, obtendo uma concentração final de 2%, e incube em temperatura ambiente por 30 minutos. Peline as células a 3000 ×g ou PMM durante cinco minutos.Lave com PBS duas vezes por cinco minutos e analise em um analisador de triagem FACS. Conte 10.000 eventos. O clone molecular que expressa GFP do meu vírus apresentado aqui pode ser útil para analisar as interações vírus-hospedeiro e a patogenicidade do meu neurovírus, tanto in vivo quanto in vitro.Embora não tenha sido demonstrado que meu neurovírus possa afetar células humanas, é importante observar todas as precauções de nível de biossegurança, tanto as células quanto o plasmídeo podem ser obtidos em nosso laboratório. Boa sorte com seus experimentos.

propagating-detecting-an-infectious-molecular-clone-maedi-visna-virus

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Este experimento visualizado é um guia para a utilização de um clone fluorescentes molecular do HIV para viver experiências imagem confocal.

Visualizando transferência de células-célula de HIV usando Clones fluorescente de HIV e Microscopia Confocal ao vivo

Nós desenvolvemos um vetor lentiviral que possui, além da LTR Tat-responsivo, o elemento Rev-resposta (RRE), que pode regular a expressão do gene repórter de uma forma HIV-1 Tat e Rev-dependente. O vetor permite a detecção específica de HIV replicar em células vivas através da expressão da GFP.

Marcação específica de HIV-1 células positivas utilizando um Vector Rev-dependente Lentivirus Expressando a Proteína Verde Fluorescente

Source: Jamieson, T. R., et al. Detection of SARS-CoV-2 Neutralizing Antibodies using High-Throughput Fluorescent Imaging of Pseudovirus Infection. J. Vis. Exp. (2021)This video demonstrates the procedure for infecting mammalian cells with green fluorescent protein (GFP)-encoding pseudovirus, monitoring viral replication and spread by fluorescence microscopy, and collecting virus-containing supernatant for downstream applications.

Production and Collection of Pseudovirus Particles Using Mammalian Cell Culture

Um protocolo rápido e modular para a geração de vírus recombinantes de vaccinia expressando proteínas fluorescentes marcadas simultaneamente usando o método de seleção dominante transitória é descrito aqui.

Metodologia para a Geração Eficiente de Proteínas do Vírus da Vaccinia marcadas fluorescentes

Descreve-se a utilização de um vírus vaccinia repórter fluorescente que permite a medição em tempo real da infectividade viral e a expressão do gene através da expressão específica da fase de fluoróforos espectralmente distintos repórter. Detalhamos um método baseado em placa para identificar com precisão a fase em que a replicação do vírus é afetada em resposta a pequena inibição molécula.

Repórter Vaccinia vírus para quantificar Função Viral em todas as fases da Expressão Gênica

Uma abordagem simplificada para a triagem para a expressão de proteínas de membrana recombinantes em Escherichia coli com base na fusão de proteína fluorescente verde é apresentada.

Verde Fluorescente à base de proteínas Expressão Rastreio de Proteínas de Membrana em<em&gt; Escherichia coli</em

Aqui, descrevemos um método simples de injeção intracerebroventricular e intravascular de partículas virais ou microesferas fluorescentes no cérebro de camundongos neonatais. O padrão de localização do vírus e das nanopartículas pode ser detectado por avaliação microscópica ou por hibridização in situ.

Intracerebroventricular e intravascular A injeção de Viral partículas e fluorescentes microesferas no cérebro Neonatal

Os vírus da influenza A (IAVs) são patógenos respiratórios contagiosos que causam epidemias anuais e pandemias ocasionais. Aqui, nós descrevemos um protocolo para rastrear infecções virais in vivo usando uma novela recombinante luciferase e fluorescência-expressando o bi-repórter IAV (BIRFLU). Esta abordagem fornece aos pesquisadores uma excelente ferramenta para estudar IAV in vivo.

Um luciferase-vírus da gripe do repórter fluorescente para A imagem latente viva e a quantificação da infecção viral

Este protocolo descreve a dinâmica das infecções virais usando recombinação expressante (r)SARS-CoV-2 e um sistema de imagem in vivo (IVIS) em camundongos transgênicos K18 hACE2 para superar a necessidade de abordagens secundárias necessárias para estudar infecções sars-cov-2 in vivo.

Imagem ao vivo e quantificação da infecção viral em K18 hACE2 Camundongos transgênicos usando o recombinante SARS-CoV-2

Vírus pseudotipados (PVs) são virions defeituosos de replicação que são usados para estudar interações vírus-hospedeiro em condições mais seguras do que manusear vírus autênticos. Apresentado aqui é um protocolo detalhado que mostra como os PVs SARS-CoV-2 podem ser usados para testar a capacidade de neutralização do soro dos pacientes após a vacinação COVID-19.

Vírus pseudotipados como uma ferramenta molecular para monitorar respostas imunes humorais contra SARS-CoV-2 via ensaio de neutralização

Aprenda a propagar e detectar um clone infeccioso do vírus maedi-visna que expressa proteína verde fluorescente em células de plexo coroide de ovinos. Este método permite monitorar a replicação viral por microscopia de fluorescência e citometria de fluxo.

Propagação e detecção de um Clone Infecciosas Molecular da Maedi-visna vírus que expressa a proteína fluorescente verde

Explorar mais vídeos