Diagnóstico da tuberculose pulmonar com o teste Xpert MTB / RIF

O objetivo geral deste procedimento é detectar simultaneamente, em até duas horas, micobactérias, tuberculose e resistência à rifampicina em escarro expelido ou em sedimentos de escarro concentrado. Inicie com um protocolo simples e altamente eficaz de descontaminação da amostra. Em seguida, transfira cada amostra processada para um cartucho descartável de uso único, denominado M-T-B-R-I-F, que contém reagentes para PCR e onde ocorre o processo de PCR.

Carregue as cartuchas em um sistema Gene Expert DX e inicie a PCR aninhada ultra sensível HEMI para a detecção simultânea de Mycobacterium tuberculosis e resistência à rifampicina. Por fim, leia os resultados do teste e os comunique ao médico. O ensaio Expert MTPR destina-se ao uso com espécimes de pacientes com suspeita clínica de tuberculose pulmonar e que atendam aos critérios descritos no texto da companhia.

Observe que não deve ser utilizado para monitorar os efeitos da terapia medicamentosa. Crystal. Um técnico do meu laboratório demonstrará agora o protocolo conforme o padrão dois das normas internacionais para o tratamento da tuberculose. Colete dois espécimes para exame bacteriológico de cada paciente suspeito de ter tuberculose pulmonar.

Atribua um módulo do sistema Gene Expert DX para cada espécime-teste, identificando cada cartucho pelo ID do espécime. Em seguida, para cada ensaio de amostra, transfira um mililitro de escarro para um tubo cônico de 15 mililitros com tampa de rosca, utilizando outra pipeta estéril de transferência. Adicione dois mililitros do reagente de amostra M-T-B-R-I-F.

Troque a tampa com vigor. Agite o tubo de 10 a 20 vezes. Em seguida, mantenha o tubo em posição vertical por cinco minutos à temperatura ambiente após agitá-lo vigorosamente.

Novamente, equilibre à temperatura ambiente por 10 minutos. Verifique se todas as amostras estão ED, sem grumos visíveis de escarro. Primeiro, rotule os cartuchos com o ID da amostra de cada sedimento de escarro; para cada amostra de sedimento, adicione 1,5 mililitros do reagente para amostra M-T-B-R-I-F e transfira 0,5 mililitros para um tubo cônico de 15 mililitros com tampa de rosca. Substitua a tampa, vortex por 30 segundos e coloque o tubo em posição vertical por cinco minutos após um segundo.

Agite por vórtex e mantenha o tubo em posição vertical por 10 minutos. Inspecione as amostras liquefeitas para verificar a ausência de grumos de escarro. Compare o rótulo dos tubos com os cartuchos correspondentes.

Não abra o cartucho até que esteja pronto para realizar o teste e utilize o cartucho dentro de 30 minutos após abrir a tampa. Usando a pipeta estéril de transferência, aspire a amostra liquefeita até que o menisco esteja acima da marca mínima. Carregue a amostra lentamente no cartucho.

Feche a tampa do cartucho. Inicie o teste dentro de 30 minutos após adicionar a amostra ao cartucho. Primeiro ligue o computador e depois o instrumento na bancada.

Duplique o clique no ícone do Gene Expert DX. Faça login no software do sistema. Selecione criar teste para abrir a caixa de diálogo de leitura do código de barras da cartela.

Em seguida, digite o ID da amostra e escaneie o código de barras no cartucho. Quando a janela de criação do teste aparecer, clique em iniciar teste e insira a senha na caixa de diálogo. Agora, abra a porta do módulo do instrumento e carregue o cartucho.

Feche a porta para iniciar o teste. Quando a luz verde se apagar, o teste estará concluído. Assim que o sistema liberar o travamento da porta, abra a porta do módulo e remova a cartucho.

Por fim, descarte os cartuchos usados nos recipientes apropriados para resíduos. Cada cartucho de teste inclui reagentes para a PCR em tempo real do complexo Mycobacterium tuberculosis e resistência à rifampicina, bem como os controles experimentais apropriados. O controle de verificação da sonda verifica a reidratação dos reagentes, o preenchimento do tubo de PCR no cartucho, a integridade da sonda e a estabilidade do corante.

A curva de processamento da amostra serve como controle positivo para um processamento adequado das bactérias-alvo e também indica a presença de quaisquer inibidores de PCR. Os iniciadores são projetados para diferenciar entre a sequência selvagem conservada e mutações na região central do gene RPOB associadas à resistência à RIF. Os valores de CT são inversamente proporcionais à concentração do molde de M-T-B-D-N-A-alvo na amostra em teste.

A caixa de diálogo do resultado do teste conclui que o DNA alvo de MTB foi detectado e que a resistência à RIF não foi detectada nesta amostra do paciente. O DNA alvo de MTB foi detectado em níveis baixos, com indicação de resistência à rifampicina. Ambos os controles SPC e PCC atendem aos critérios de aceitação estabelecidos.

Este resultado do ensaio é considerado inválido, pois o controle positivo de amplificação (SPC) é negativo e não há produtos de PCR. Ocorreu falha no processamento da amostra ou houve inibição da PCR. Repita o ensaio.

Como você viu no teste em vídeo, o método é padronizado e requer apenas infraestrutura laboratorial moderada e treinamento. Portanto, acredito que o ensaio especializado M-T-B-R-F tem o potencial de levar testes diagnósticos padronizados, sensíveis e altamente específicos para tuberculose e resistência à rifampicina a ambientes universais de atendimento primário.