Name: Detecção e isolamento de células de melanoma circulantes usando Fluxometria Fotoacústica (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 52 s
Description: Aprenda a detectar e isolar células de melanoma circulantes usando fluxometria fotoacústica sem marcadores. Este método permite identificação precoce de metástase em amostras de sangue de pacientes oncológicos.

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Agradecemos o apoio do Departamento de Engenharia Biológica e Christopher S. Life Bond Centro de Ciências da Universidade de Missouri. Reconhecemos apoio financeiro da Missouri Life Sciences Research Board 09-1034 e NIH R21CA139186-0. Também agradecemos ao Programa Life Sciences Research Opportunity Graduação da Universidade de Missouri, a Universidade de Missouri Núcleo Citologia Molecular e da Universidade de Missouri Faculdade de Engenharia de apoio financeiro.

1. Preparação de amostras de sangue <ol><li> Desenhe aproximadamente 10 mL de sangue total de um paciente de cancro Estágio IV em dois tubos sob vácuo 5 mL. </li><li> Centrifugar os tubos durante 10 minutos a 3.000 rotações por minuto (rpm). </li><li> A amostra de sangue será separado em três camadas diferentes: a camada inferior compreende os eritrócitos, a camada intermediária, também chamada de buffy coat, contém leucócitos e células de melanoma, ea camada superior contém plasma e plaquetas. Remover o plasma tanto quanto possível, sem perturbar o buffy coat. </li><li> ML lugar 250 de 1077 Histopaque em dois tubos de um Wintrobe mL. </li><li> Usando um 9 &quot;Pasteur Pipeta, extraia o plasma restante, o revestimento buffy inteiro, e até mesmo a camada superior de eritrócitos, certificando-se de recolher &lt;mL 500. </li><li> Coloque a solução em cima da camada de Histopaque e centrifugar os tubos Wintrobe em 15 mL tubos cônicos por 10 minutos a 3000 rpm. </li><li> O sangue será novamenteseparado, mas desta vez os eritrócitos serão separados pelo Histopaque, permitindo a fácil extração do buffy coat. Use um 9 &quot;Pasteur Pipeta para obter o buffy coat todo e colocá-lo em um tubo eppendorf 2 ml. </li><li> Suspender a buffy coat em 1,5 mL de PBS com 2% v / v de Tween 20. </li></ol> 2. Construção câmara de fluxo <ol><li> Obtenção de um cilindro de acrílico, 20 mm de diâmetro externo, 17 mm de diâmetro interno, e 8 mm de altura. Perfurar três buracos de 5 mm de diâmetro através do lado do cilindro em ângulos de 90 graus um do outro. Corte três pedaços de tubo de polímero (1,6 mm de diâmetro interno, 5 mm de diâmetro externo), e colocá-los nos orifícios perfurados. </li><li> Estiramento Parafilm na parte inferior do anel de acrílico para fazer um selo à prova d&#39;água. O parafilme forma uma bacia rasa com o anel de acrílico e irá realizar a solução de acrilamida que formam uma câmara de fluxo. </li><li> Suspender um fio de 1,6 mm de diâmetro através dos pedaços de tubos que estão em frenteo outro, certificando-se que o fio por si só é visível através do meio do ringue. Preencher a terceira peça de tubo com um fio de diâmetro 1,6 mm e posição do tubo 1 mm de distância do fio suspenso. Estes fios evitar acrilamida de entrar na tubulação. Após a acrilamida se solidifica, os fios serão extraídos, deixando um caminho de fluxo cilíndrico e um lugar para a posição de uma fibra óptica se concentra no caminho de fluxo. </li><li> Adicionar 5 mL de acrilamida preparado [20 acrilamida g (Sigma Aldrich), 0,7 g bisacrylamide (Sigma Aldrich), 100 mL de água destilada] para um copo pequeno. Medir 0,02 g de persulfato de amônio (Sigma) e adicioná-lo no copo. Misture com uma barra de agitação por 3 minutos. Adicionar 20 mL tetramethylethylenediamene (Fisher Scientific) para o copo. Rapidamente despeje a mistura no anel de acrílico, enchendo até o topo. Após alguns segundos, a solução de gel, fazendo um molde de câmara de fluxo. Com cuidado, puxe os fios para fora, tomando cuidado para não perturbar o gel de acrilamida. O fluxo de chamber agora está pronto para usar. </li></ol> 3. Fluxometria fotoacústica set-up <ol><li> Acusticamente um par de polivinilideno de fluoreto transdutor acústico piezoelétrico (Panametrics) para uma câmara de fluxo, utilizando gel de ultra-som diretamente acima do caminho de fluxo. </li><li> Usando uma baioneta Neill-Concelman (BNC) cabo, conectar o transdutor para a entrada de um receptor de banda larga RITEC-640A (filtro passa-baixa: out, highpass filtro: 1 MHz, Impedância de entrada: 50 Ohms, amplificação: 35 dB). Conecte a saída do filtro ao osciloscópio (Tektronix TDS 2024B). Para acionar o osciloscópio, um fotodíodo (Thorlabs), é criada perto do transdutor e é conectado ao osciloscópio através de um cabo BNC. </li><li> A t-connector (Small Parts) é ligado a um braço da câmara de fluxo. Duas bombas de seringa (Braintree Científica) estão ligados a outros ramos do conector. Uma seringa contém ar, enquanto o outro irá conter a suspensão de células preparadas na parte 1. Definir o fluxo para100 L / minuto. </li><li> Extraia o tubo pequeno da câmara de fluxo até que uma pequena bolsa de ar de formas, e inserir um 1 milímetro de diâmetro do núcleo de fibra óptica com uma abertura de 0,37 numérica nesse slot. Encha o bolso com água para reduzir os sinais de interface e aumentar a quantidade de luz laser aplicada ao caminho de fluxo. Devido à abertura numérica da fibra óptica e curta distância para o caminho do fluxo, o laser só vai irradiar um slug de amostra em um dado momento, garantindo que a amostra diretamente na frente do laser é a mesma amostra criando sinais fotoacústica. A energia do laser deve ser cerca de 28 mJ / cm 2, com um tamanho de ponto, de 7 mm 2. </li><li> Vire ambas as bombas de seringa por diante. Quando os dois fluidos imiscíveis chegar ao entroncamento que vai ser particionado em lesmas homogênea e passar ao lado do transdutor. </li><li> Irradiar a amostra flui com um nanossegundo pulsada a laser para gerar ondas fotoacústica nas células de melanoma. Como a melanina é uma broadbe ópticas de absorção, qualquer comprimento de onda do laser visível pode ser usado. </li><li> Se um sinal aparece no osciloscópio quando uma lesma está no topo do transdutor, a lesma contém melanoma, e deve ser monitorado através do sistema até cair em um frasco de coleta. </li></ol> 4. Imunocitoquímica <ol><li> Pegue as lesmas capturado a um 4 Cytospin Centrífuga (Thermo Scientific), a fim de corrigi-los a lâminas de vidro. Colocar as lâminas de vidro em Cytofunnels (Shandon Cytofunnel EZ único com Brown Filtro Cartão Thermo Scientific) e colocá-los na 4 Cytospin centrífuga. Coloque 100 mL de 1% albumina bovina (Sigma) em PBS em cada funil e, em seguida, centrifugar a 600 rpm por 3 minutos para ajudar as células capturadas ater ao lâminas de vidro. </li><li> Após a centrifugação, adicionar as amostras de célula para a Cytofunnels e centrifugar a 600 rpm por 3 minutos. Em seguida, pulverizar a slides com um fixador de etanol à base. </li><li> Lavar as lâminas em PBS por 10 minutos duas vezes. </li><li&gt; Para bloquear a ligação não específica, incubar cada slide com uma mistura de 10 mL de soro de cabra (Sigma) e 90 mL de PBS por 1 hora em temperatura ambiente. </li><li> Após a incubação, decanta os slides e incube com a solução de anticorpo primário por 1 hora em câmara úmida à temperatura ambiente. Cada slide deve conter 1% MART-1 anticorpos produzidos em coelho, um CD-45% de anticorpos criados em mouse, soro de cabra 10%, e PBS 89%. </li><li> Após a incubação, lavar as lâminas em PBS por 10 minutos três vezes. </li><li> As lâminas são incubadas em uma solução de anticorpo secundário, que tem fluoróforo ligado aos anticorpos. A mistura contém 0,05% de cabra anti-coelho de anticorpos, 0,05% de anticorpos de cabra anti-rato, soro de cabra 0,1% e PBS 99%. As lâminas são incubadas no escuro por uma hora em temperatura ambiente. </li><li> Após a incubação, decanta as lâminas de lavagem em PBS por 5 minutos, três vezes. </li><li> A mancha de um núcleo, incubar as células com 0,1 g / mL de DAPI (Invitrogen) para1 minuto. Decantar o slides e lavar em PBS. </li><li> Monte uma lamela sobre a amostra de células usando 20 mL de uma mídia baseada em resina de montagem por slide. Selar a lamela com unhas polonês claro para preservar o slide. Agora os slides estão prontos para ser fotografada com um microscópio de fluorescência. </li></ol> 5. Resultados representativos: <img src="/files/ftp_upload/3559/3559fig1.jpg" alt="Figura 1"/> Figura 1. As formas de onda fotoacústica partir de células brancas do sangue e células de melanoma são mostrados aqui. As células brancas do sangue, não tendo nenhuma pigmentação inerente, não produzem ondas de fotoacústica e se manifestar como uma linha reta de ruídos eletrônicos (à esquerda). As células de melanoma pigmentada produz uma onda robusta fotoacústica (direita). <img src="/files/ftp_upload/3559/3559fig2.jpg" alt="Figura 2"/> Figura 2. Após a coloração imunocitoquímica, células de melanoma cultivadas mostram sinais de DAPI em blue enquanto MART1 é destaque em verde. <img src="/files/ftp_upload/3559/3559fig3.jpg" alt="Figura 3"/> Figura 3. Sobrepondo imagens para DAPI e MART1, como na Figura 2, com CD45 como um indicador de leucócitos, esta figura mostra células de melanoma entre várias células brancas do sangue.

<ol><li>Pantel, K., Brakenhoff, R., Brandt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+clinical+relevance+and+specific+biological+properties+of+disseminating+tumour+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Cancer%22%5BJournal%5D)">Detection clinical relevance and specific biological properties of disseminating tumour cells.</a> Nature Reviews Cancer. 8, 329-340 (2008).</li>
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<li>Viator, J. A., Gupta, S. K., Goldschmidt, B. S., Bhattacharyya, K., Raghuraman, R., Shukla, R., Dale, P. S., Boote, E., Katti, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+gold+nanoparticle+enhanced+prostate+cancer+cells+using+photoacoustic+flowmetry+with+optical+reflectance%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Nanotech%22%5BJournal%5D)">Detection of gold nanoparticle enhanced prostate cancer cells using photoacoustic flowmetry with optical reflectance.</a> J. Biomed. Nanotech. 6, 187-191 (2010).</li>
</ol>

John A. Viator é fundador e presidente da Viator Technologies Inc, uma empresa criada para comercializar tecnologias fotoacústica para a melhoria da saúde humana.

Detecção de CTCs ainda é um campo de pesquisa intensiva com muito poucas aplicações clínicas devido ao problema difícil de isolar as células do tumor raro. Muitas outras técnicas estão sendo avaliadas para CTC detecção, incluindo RT-PCR, captura célula microfluídica, captura imunomagnética, e outros métodos 8-12. No entanto, a detecção fotoacústica da mostra CMCs promessa como é rótulo livre e fornece um meio rápido e preciso para capturar pequenas partículas de luz absorvente. O protocolo descrito para isolar as células brancas do sangue é altamente eficiente, mas um baixo número de glóbulos vermelhos existem na amostra. Estas células rouge contaminando também absorvem a luz laser, mas a um nível bastante reduzido. Para garantir os glóbulos vermelhos não interferem com o nosso sistema de detecção de melanoma, cinco amostras de pacientes saudáveis ​​foram introduzidas através do sistema e não deu um sinal, indicando que as células vermelhas do sangue estão presentes em baixas concentrações o suficiente paraser desconsiderada. Uma série de estudos de concentração foram realizados com células de melanoma cultivadas eo sistema de fluxo fotoacústica mostrou sensível até 1 célula / mL (dados não publicados). Estes estudos estão em curso e em breve incluirá ensaios utilizando amostras de doentes de câncer. Esta técnica fotoacústica também está sendo avaliado para uso em não-pigmentadas CTCs, como de mama e câncer de próstata, anexando cromóforos exógenos. Temos realizado um trabalho preliminar usando nanopartículas de ouro sobre o câncer cells13. Estes testes mostraram que as nanopartículas podem proporcionar a absorção óptica necessária para gerar ondas fotoacústica. O desafio técnico é demais para anexar tais partículas de células de câncer seletivamente.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> ABCD1234 </td><td></td></tr></tbody></table>

detecção e isolamento de células de melanoma circulantes usando fluxometria fotoacústica

Detection and Isolation of Circulating Melanoma Cells using Photoacoustic Flowmetry

Células tumorais circulantes (CTCs) são as células que se separaram de um tumor macroscópico e difundir através dos sistemas de sangue e da linfa aos tumores secundários de sementes 1,2,3. CTCs são indicadores de doença metastática e sua detecção em amostras de sangue podem ser usados ​​para diagnosticar o câncer e monitorar a resposta do paciente à terapia. Desde CTCs são raros, compreendendo cerca de uma célula tumoral entre bilhões de células sanguíneas normais em pacientes com câncer avançado, a sua detecção e enumeração é uma tarefa difícil. Nós explorar a presença de pigmento na maioria das células do melanoma para gerar fotoacústica, ou laser induzida ondas ultra-sônicas em um citômetro de fluxo personalizado para a detecção de células de melanoma circulantes (CMCs) 4,5. Este processo implica separar uma amostra de sangue total usando centrifugação e obter a camada de células brancas do sangue. Se presente no sangue total, CMCs vai separar com as células brancas do sangue, devido à densidade semelhante. Estas células são ressuspendidas emtampão fosfato (PBS) e introduzido o medidor de vazão. Ao invés de um fluxo contínuo de suspensão de células do sangue, que induziu duas fluxo da fase a fim de capturar essas células para posterior estudo. Em dois fluxo de fase, dois líquidos imiscíveis em um sistema microfluídicos se encontram em uma junção e forma alternada slugs de 6,7 líquidos. PBS suspensão glóbulos brancos e lesmas ar microlitro forma que são seqüencialmente irradiado com luz laser. A adição de um surfactante para a fase líquida permite a formação slug uniforme e que o usuário pode criar diferentes lesmas porte, alterando as taxas de fluxo de duas fases. Lesmas do ar e lesmas de PBS com células brancas do sangue não contém absorvedores de luz e, portanto, não produzem ondas fotoacústica. No entanto, lesmas de células brancas do sangue que contêm mesmo CMCs única absorvem a luz laser e produzir ondas acústicas de alta freqüência. Essas lesmas que geram ondas fotoacústica são seqüestrados e recolhidos para a coloração citoquímica para verificção de CMCs.

Nós desenvolvemos um citômetro de fluxo, utilizando ultra-som para detectar a laser induzida circulando células de melanoma como um indicador precoce de doença metastática.

Detecção e isolamento de células de melanoma circulantes usando Fluxometria Fotoacústica

As células tumorais circulantes (CTCs) são aquelas células que se separaram de um tumor macroscópico e se disseminaram através dos sistemas sanguíneo e linfático para semear...

O objetivo do experimento a seguir é detectar a presença de câncer antes da formação de tumores secundários. Isso é alcançado primeiramente obtendo e separando amostras de sangue de pacientes com melanoma em estágio quatro. Como segundo passo, o sangue é introduzido em uma câmara de fluxo fotoacústica, o que permite a detecção e o isolamento de células de melanoma.Em seguida, as células capturadas são submetidas à imagem para confirmar a presença de melanoma detectado. Os resultados demonstram a capacidade do sistema de detectar e isolar com precisão e rapidez células de melanoma com base em formas de onda fotoacústicas e técnicas de imagem celular. A principal vantagem do nosso método em comparação com métodos existentes de detecção de células de melanoma circulantes, como R-T-P-C-R, biomas Triagem Magnética de Células e outros métodos, é que o nosso método é livre de marcadores e permite a captura de células de melanoma circulantes sem alterar sua superfície ou fixá-las a um substrato.Para preparar uma amostra para a detecção de câncer metastático, comece coletando aproximadamente 10 mililitros de sangue total de um paciente com câncer em estágio quatro. Em dois tubos vacutainer de cinco mililitros, centrifugue as amostras por 10 minutos a 3000 RPM. A amostra de sangue se separará em três camadas distintas. A camada inferior é composta pelos eritrócitos.A camada intermediária, também chamada de camada de buffy coat, contém leucócitos e células de melanoma, e a camada superior contém plasma e plaquetas. Remova o máximo possível de plasma sem perturbar o buffy coat. Adicione 250 microlitros de His Opaco 10 77 a tubos de 2 mililitros.Utilizando uma pipeta pasteur de nove polegadas, extraia o plasma remanescente, todo o buffy coat e a camada superior de eritrócitos, certificando-se de coletar menos de 500 microlitros. Transfira a solução para os tubos Eppendorf previamente preparados.O sangue irá separar novamente, mas desta vez os eritrócitos serão separados pelo hispa, permitindo a extração fácil da camada de buffy coat. Utilize uma pipeta Pesa de nove polegadas para isolar todo o buffy coat e coloque-o em um tubo eppendorf de dois mililitros. Em seguida, suspenda-o em 1,5 mililitro de PBS com 2% volume por volume entre 20.Para construir uma câmara de fluxo, comece com um cilindro de acrílico de oito milímetros de comprimento, com diâmetro externo de 20 milímetros e diâmetro interno de 17 milímetros. Em seguida, faça três furos de cinco milímetros de diâmetro através da lateral do cilindro, em ângulos de 90 graus entre si. Depois, corte três pedaços de tubo polimérico e insira-os nos furos feitos.Estique o filme para- para cobrir a parte inferior do anel de acrílico, formando um selo impermeável. O filme para- formará uma espécie de bacia rasa com o anel de acrílico e conterá a solução de acrilamida que formará a câmara de fluxo. Suspenda um fio com diâmetro de 1,6 milímetro através das peças de tubo diretamente opostas uma à outra, certificando-se de que apenas o fio seja visível pelo centro do anel e dentro da terceira peça de tubo.Insira um fio com diâmetro de 1,6 milímetro e posicione o tubo a um milímetro de distância do fio suspenso. Esses fios impedem que a acrilamida entre no tubo. Prepare cinco mililitros de acrilamida.Em seguida, despeje rapidamente a mistura no anel de acrílico, preenchendo-o até o topo. Após alguns segundos, a solução formará um gel. Para fabricar um molde de câmara de fluxo, retire cuidadosamente os fios, certificando-se de não perturbar o gel de acrilamida, deixando um caminho de fluxo cilíndrico e um local para posicionar uma fibra óptica focalizada sobre o caminho de fluxo.A câmara de fluxo agora está pronta para uso com gel de ultrassom acusticamente. Acople um transdutor acústico piezoelétrico de fluoreto de polivinilideno a uma câmara de fluxo diretamente acima do percurso de fluxo. Usando um cabo bayonet neo cons ou BNC, conecte o transdutor à entrada de um receptor de banda larga.Conecte a saída do filtro ao osciloscópio para acionar o equipamento. Posicione um fotodiodo próximo ao transdutor e utilize um cabo B NNC para conectá-lo ao osciloscópio. Retire o tubo fino da câmara de fluxo até que se forme um pequeno bolso de ar e acople-o ao transdutor.Em seguida, insira a fibra óptica e preencha o compartimento com água para reduzir os sinais de interface e aumentar a quantidade de luz laser aplicada ao percurso de fluxo. Devido à abertura numérica da fibra óptica e à curta distância até o percurso de fluxo, o laser irradiará apenas uma porção do amostra por vez, garantindo que a amostra diretamente à frente do laser seja a mesma que gera os sinais fotoacústicos.Em seguida, conecte um conector em T a um braço da câmara de fluxo e duas bombas de seringa aos outros ramos do conector. Uma seringa contém ar, enquanto a outra conterá a suspensão celular previamente preparada. Em seguida, inicie ambas as bombas de seringa.Quando os dois fluidos admissíveis atingirem a junção em T, eles serão particionados em glóbulos homogêneos e fluirão passando pelo transdutor. Irradie a amostra em fluxo com um laser de pulso nanométrico para gerar ondas fotoacústicas nas células de melanoma. Como a melanina é um absorvedor óptico de banda larga, qualquer comprimento de onda de laser visível pode ser utilizado.Um sinal que aparece no osciloscópio quando um coágulo está sobre o transdutor indica que o coágulo contém melanoma. Acompanhe-o pelo sistema antes de depositá-lo em um frasco de coleta. Para preparar amostras para imunocitoquímica, coloque lâminas de vidro nos funis citológicos e carregue-os na citocentrífuga para centrifugação, a fim de ajudar as células capturadas a aderirem às lâminas de vidro.Coloque 100 microlitros de BSA 1% em PBS em cada funil. Em seguida, centrifugue a 600 RPM por três minutos. Após a centrifugação, adicione as amostras celulares aos funis do CyTOF e, então, centrifugue a 600 RPM por três minutos.Pulverize as lâminas com um fixador à base de etanol. Em seguida, lave as lâminas em PBS por 10 minutos, duas vezes, para bloquear a ligação não específica. Incube cada lâmina com uma mistura de 10 microlitros de soro de cabra e 90 microlitros de PBS por uma hora à temperatura ambiente.Após a incubação, despreze o líquido dos lâminas e adicione a solução de anticorpo primário. Cada lâmina deve conter 1% de soro de coelho, 1% de anticorpo anti-CD45 de rato e 10% de soro de cabra em PBS, e deve ser incubada por uma hora em câmara umidificada à temperatura ambiente. Em seguida, lave as lâminas em PBS por 10 minutos, três vezes.Em seguida, incubar as lâminas com os anticorpos secundários fluorescentes apropriados no escuro por uma hora à temperatura ambiente, depois drenar as lâminas. Em seguida, lavá-las em PBS durante cinco minutos, três vezes, para coloração dos núcleos; incubar as células com 0,1 microgramas por mililitro de DPI por um minuto. Depois, drenar as lâminas e lavar em PBS.Por fim, utilizando um meio de montagem à base de resina, monte uma lamínula sobre a amostra celular, selando-a com esmalte incolor e realize a imagem com um microscópio fluorescente. As formas de onda fotoacústicas provenientes de células sanguíneas brancas e células de melanoma são mostradas aqui à esquerda. As células sanguíneas brancas, que não possuem pigmentação inerente, não produzem ondas fotoacústicas e se manifestam como uma linha plana de ruído eletrônico à direita.No entanto, as células de melanoma pigmentadas produzem uma onda fotoacústica intensa. Após a imunocitoquímica, coloração química, células de melanoma cultivadas apresentam sinais pontilhados em azul, sendo que uma célula marcada é destacada em verde sobrepondo as imagens de DPI e mart um com CD45 como indicador de leucócitos. Esta figura mostra células de melanoma entre vários glóbulos brancos após seu desenvolvimento.Nossa técnica abrirá caminho para pesquisadores na área de detecção de câncer explorarem o fenômeno da metástase, a fim de aprimorar a detecção do câncer e, em última instância, curar sua disseminação fatal.

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Este vídeo descreve a técnica de isolamento de células-tronco de melanoma CD133 negativas e positivas de uma linhagem celular primária de melanoma usando classificação de células ativadas por magnetismo. As CSCs de melanoma CD133 positivo são estudadas para entender os mecanismos da tumorigênese do melanoma.

Isolamento de células-tronco de melanoma: um método para obter células de melanoma CD133 positivas e negativas usando classificação de células ativadas por magnetismo

Neste vídeo, apresentamos uma detecção fotoacústica por citometria de fluxo de células de câncer de ovário contendo nanopartículas em uma câmara de fluxo circulante in vitro. Esta técnica não invasiva identifica com sucesso as células tumorais circulantes em um sistema de fluxo utilizando um agente de contraste.

Citometria de fluxo fotoacústica in vitro: uma técnica fotoacústica de fluxo não invasiva para detectar células cancerígenas de ovário circulantes com nanopartículas

Fonte: Kalva, S. K., et al., Tomografia fotoacústica de mesa baseada em diodo laser pulsado para monitoramento de lavagem e lavagem de corante na vasculatura cortical de ratos. J. Vis. Exp. (2019)Este vídeo demonstra o procedimento para usar imagens fotoacústicas para observar alterações nos vasos corticais de um rato anestesiado. O processo inclui imagens de linha de base, injeção de corante e análise de absorção e depuração de corante durante a lavagem e lavagem.

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Este artigo descreve a preparação do tecido acabado de melanoma obtidas em culturas primárias de células, e como para remover contaminações de eritrócitos e fibroblastos a partir de células tumorais. Finalmente, descrevemos como...

Cultura de Células e Isolamento paciente Derivado de CD133<sup&gt; +</sup&gt; Células-tronco de câncer putativos Melanoma

Descrevemos dois métodos complementares usando o indicador de ciclo celular de ubiquitinação de fluorescência (FUCCI) e análise de imagem ou citometria de fluxo para identificar e isolar células nas regiões internas de G1 presas e externas de proliferação de esferoides 3D.

Análise baseada em Citometria de Fluxo Imaging- e da Posição celular eo ciclo celular em 3D melanoma Spheroids

Aqui apresentamos um protocolo para estimar materiais e superfície propriedades ópticas que utilizam o efeito fotoacústico combinado com reflexão interna total. Esta técnica evanescentes photoacoustics baseados em campo pode ser usado para criar um sistema de metrologia fotoacústica para estimar índices de espessuras, a granel e de refração película fina 'materiais, e explorar suas propriedades ópticas.

Evanescente Campo photoacoustics Baseado: Avaliação da Propriedade óptica a Surfaces

Aqui, nós apresentamos um protocolo para detectar mutações somáticas do tumor no ADN de circulação atual nos líquidos biológicos pacientes (biofluids). Nosso método baseado da reacção em cadeia digital do polymerase da gota (dpcr)-permite a quantificação da freqüência alélicas da mutação de tumor (MAF), facilitando um complemento minimamente invasor ao diagnóstico e à monitoração temporal da resposta do tumor.

Deteção e monitoração do ADN de circulação associado do tumor em Biofluids pacientes

Um protocolo é apresentado para detectar células tumorais ovarianas circulantes utilizando um sistema de fluxo fotoacústico feito medida e nanopartículas de sulfeto de cobre cobertas de ácido fólico.

Detecção de câncer de ovário usando citometria de fluxo fotoacústico

Este artigo descreve um fluxo de trabalho de técnicas empregadas para testar novos mediadores candidatos de metástase de melanoma e seus mecanismos de ação.

Uma plataforma robusta de descoberta para a identificação de novos mediadores de metástase de melanoma

Este protocolo fornece um guia passo a passo para projetar um painel de anticorpos de imunofluorescência multiplex para imagens baseadas em código de barras de DNA de tecidos murinos de melanoma FFPE. Também descrevemos um pipeline de análise de imagem usando ferramentas de código aberto para gerar insights proteômicos espaciais sobre o microambiente imunológico do tumor de melanoma murino.

Imagem de imunofluorescência multiplex baseada em código de barras de DNA para analisar amostras FFPE de melanoma murino geneticamente reprogramado

Aprenda a detectar e isolar células de melanoma circulantes usando fluxometria fotoacústica sem marcadores. Este método permite identificação precoce de metástase em amostras de sangue de pacientes oncológicos.

Detecção e isolamento de células de melanoma circulantes usando Fluxometria Fotoacústica

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