Name: Construindo um hidrogel de colágeno para a entrega de células-tronco carregado microesferas (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-06-01T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 39 s
Description: Aprenda a construir um hidrogel de colágeno com microesferas de quitosana para entrega de células-tronco adiposas. Este método mantém a multipotência celular e oferece aplicações promissoras em medicina regenerativa e terapias avançadas.

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DOZ é apoiado por uma subvenção concedida à Fundação de Genebra. SN foi apoiado por uma bolsa pós-doutorado da Iniciativa Engenharia de Tecidos Pittsburgh.

1. Isolando derivadas de tecido adiposo células-tronco (ASC) Nota: Todos os procedimentos foram realizados à temperatura ambiente, a menos que indicado de outra forma. <ol><li> Isolar adiposo epididimal e perirenal rato e lavar com solução de Hank estéril tamponada de sal (HBSS) contendo 1% de soro fetal bovino (FBS), como descrito anteriormente 6. </li><li> Picar o tecido e transferir 1-2 g em 25 mL de HBSS contendo FBS a 1% para um tubo de 50 mL e centrifugação a 500 g durante 8 minutos à temperatura ambiente. </li><li> Recolher o de flutuação livre camada de tecido adiposo e transferência para 125 mL balão Erlenmeyer e trata-se com 25 mL de colagenase tipo II (200 U / mL) em HBSS durante 45 min a 37 ° C num agitador orbital (125 rpm). </li><li> Cuidadosamente remover a fracção de líquido (abaixo de óleo e da camada adiposo) e filtrar sequencialmente através de um filtro 100-iM e 70 mícrons de nylon de malha. Centrifugar o filtrado a 500 g durante 10 min à temperatura ambiente, aspirar o supernatant, e lavar a pelete duas vezes com 25 ml de HBSS. </li><li> Ressuspender o sedimento de células em 50 mL de meio de crescimento (Meio MesenPRO RS Basal) suplementado com MesenPRO Suplemento de Crescimento RS, antibiótico-antimicótico (100 U / mL de penicilina G, 100 ug / mL de sulfato de estreptomicina, e 0,25 ug / mL Anfotericina B) , e 2 mM de L-glutamina e as células de pipeta em 2 T75 frascos (25 ml balão /). </li><li> Cultura da ASC em um 5% de CO 2 incubadora humidificada a 37 ° C (passagem 2-4 ASC são utilizados para todas as experiências). </li></ol> 2. Preparação de microesferas (CSM) Nota: Todos os procedimentos foram realizados à temperatura ambiente, a menos que indicado de outra forma. <ol><li> CSM são preparados por um processo de emulsificação de água-em-óleo, juntamente com uma técnica de coacervação iónica usando o nosso protocolo anterior 6. Emulsionar uma solução aquosa de quitosano (6 mL de 3% w / v de quitosano em ácido acético 0,5 M) em 100 ml de uma mistura de fase de óleo consistindo de sojaóleo, n-octanol (1:2 v / v) e 5% de sorbitano-mono-oleato de emulsionante (Span 80), utilizando sobrecarga (1700 rpm) e agitação magnética (1000 rpm), simultaneamente, em direcções opostas. Este método de dupla resultará uma mistura que micelas formadas no início antes de reticulação ocorre podem permanecer em solução e não assentam no fundo. Além disso, a barra de agitação magnética SIDA em DE-agregação de quitosano durante micela formação e rigidization. </li><li> A mistura é agitada continuamente durante aproximadamente 1 hora até uma emulsão de água-em-óleo estável é obtido. Reticulação iónica é iniciada com a adição de 1,5 mL de 1% de hidróxido de w / v de potássio em n-octanol min a cada 15 durante 4 h (24 ml no total). </li><li> Depois de se completar a reacção de reticulação, lentamente decantar a fase de óleo da mistura contendo CSM e imediatamente adicionar as esferas a 100 mL de acetona. Lave as esferas com acetona até que a fase de óleo é completamente removido. </li><li> Secam-se as esferas recuperados em um exsicador de vácuo e analyze inalterado. O tamanho médio de partícula CSM, área de superfície por miligrama e da unidade de volume cúbico foi determinada utilizando analisador de tamanho de partícula. </li><li> Para as experiências subsequentes, lavar CSM três vezes com água estéril para remover os sais residuais e esterilizar com álcool absoluto. </li></ol> 3. Determinando o número de grupos amino livres no CSM Nota: Todos os procedimentos foram realizados à temperatura ambiente, a menos que indicado de outra forma. <ol><li> Determinar o número de grupos amino livres presentes na CSM após reticulação iónica usando o ensaio de ácido benzenossulfónico trinitro (TNBS), de Bubins e Ofner 7. Incubar 5 mg de microesferas com 1 mL de 0,5% de solução de TNBS em um tubo de vidro de 50 mL durante 4 h, a 40 ° C e hidrolisar com a adição de 3 mL de HCl 6N a 60 ° C durante 2h. </li><li> Arrefecer as amostras à temperatura ambiente, e extrair os TNBS livres por adição de 5 mL de água desionizada e 10 mL de acetatoéter. </li><li> Aquecer uma alíquota de 5 ml da fase aquosa para 40 ° C num banho de água durante 15 min para evaporar qualquer éter residual, arrefecer até à temperatura ambiente, e diluir com 15 mL de água. </li><li> Medir a absorvância a 345 nm com um espectrofotómetro com solução TNBS sem quitosana como em branco eo quitosano utilizado para a preparação CSM para determinar o número total de grupos amino. Estimar o número de grupos amino livres da MSC em relação ao quitosano. </li></ol> 4. Carregando ASC no CSM Nota: Todos os procedimentos foram realizados à temperatura ambiente, a menos que indicado de outra forma. <ol><li> Equilibrar 5 mg de CSM esterilizado de seção 2,5 em HBSS estéril durante a noite e adicionar um poro tamanho 8 mícrons membrana inserção placa de cultura (24-bem placa). </li><li> Após o CSM se estabeleceram para a membrana, aspirar cuidadosamente os HBSS e adicionam-se 300 uL de meio de crescimento para o interior da inserção e 700 uL de meio de crescimento para the fora da pastilha. </li><li> Ressuspender o ASC na concentração apropriada (1 x 10 4 a 4 x 10 4) em 200 uL de meio de crescimento e de sementes ao longo do CSM dentro do inserto placa de cultura. O volume final de meio de cultura dentro da inserção, após a semeadura, é de 500 uL. </li><li> Incubar a seeded ASC à CSM por 24 h em um 5% de CO 2 incubadora humidificada a 37 ° C. </li></ol> 5. Determinação da porcentagem de ASC Carregando e viabilidade celular em CSM Nota: Todos os procedimentos foram realizados à temperatura ambiente, a menos que indicado de outra forma. <ol><li> Após a incubação, recolher o CSM ASC-carregado num tubo de microcentrífuga de 1,5 ml estéril, sem perturbar as células que migraram para a membrana de inserção. </li><li> Remover o meio residual e adicionar 250 uL de meio de crescimento fresco para o tubo. </li><li> Para cada tubo 25 uL de MTT [3 - (4,5-dimethylthiozole-2-il) -2,5-difeniltetrazólio]solução (5 mg / mL) e incubar durante 4 h em um 5% de CO 2 incubadora humidificada a 37 ° C. </li><li> Após a incubação, o meio de remover, adicionar 250 uL de sulfóxido de dimetilo, e vórtice a mistura durante 2-5 minutos para solubilizar o formazan complexo. </li><li> Centrifugar a CSM em 2700 X g durante 5 min, e determinar a absorvância sobrenadante medida a 570 nm 630 nm, utilizando como referência. </li><li> Determinar o número de células associado com o MSC em relação ao valor de absorvância obtidos a partir de um número conhecido de ASC viável. </li></ol> 6. Caracterizando ASC-CSM-incorporado gel de colágeno Nota: Todos os procedimentos foram realizados à temperatura ambiente, a menos que indicado de outra forma. <ol><li> Mistura ASC-carregado CSM (5 mg contendo ≈ 2 x 10 4 células) com colagénio de tipo 1 (7,5 mg / mL), extraído a partir de tendão da cauda de rato de acordo com o método de Bornstein 8 e fibrilam depois de ajustar o pH para 6,8 utilizando 2 N de NaOH. </li&gt; <li> Adicionar a mistura de colagénio-ASC-CSM fibrilada para uma placa de 12 poços e incubar durante 30 min a uma em 5% de CO 2 incubadora humidificada a 37 ° C. </li><li> Depois de fibrilação completa, incubar os géis de colagénio-ASC-CSM-se até 14 dias, em um 5% de CO 2 incubadora humidificada a 37 ° C. </li><li> Libertação e migração de células de CSM no gel foram observadas utilizando técnicas de microscopia padrão. </li></ol> 7. Os resultados representativos No presente estudo, nós desenvolvemos uma estratégia in vitro para proporcionar células-tronco de microesferas de quitosano (CSM) em um gel de colagénio andaime. CSM poroso de tamanho uniforme (175-225 um de diâmetro) e composição foram preparados e utilizados como transportadores de células (Figura 2). Após a incubação com a ASC CSM, as células ligado a uma concentração de 2 x 10 4 cells/5mg de MSC. As células foram capazes de espalhar sobre a microesfera, enquanto estende filopodiosnas fendas porosas do microesfera (Figura 3). Uma vez que a célula CSM-carregado foram misturadas com o gel de colagénio, as células imediatamente começou a migrar para os géis (Figura 4). <img alt="Tabela 1" src="/files/ftp_upload/3624/3624table1.jpg" /> Tabela 1. Vantagens biológicos para o uso de quitosano e de colagénio em um sistema de entrega de células estaminais. <img alt="A Figura 1" src="/files/ftp_upload/3624/3624fig1.jpg" /> Figura 1. Esquemático que representa a estratégia geral para a utilização dupla de ASC-CSM andaimes de colagénio carregados. Figuras 2, 3 e 4 são anotadas no interior da esquemática para auxiliar com a interpretação das imagens. <img alt="A Figura 2" src="/files/ftp_upload/3624/3624fig2.jpg" /> Figura 2. Representação esquemática representando o processo de semear as células estaminais para quitosano. O process envolve co-cultura com ASC CSM em um 8 - mM tamanho dos poros da membrana de inserção placa de cultura. Após 24 horas, as microesferas são removidos do inserto e estão prontos para incorporação numa matriz biomaterial. <img alt="A Figura 3" src="/files/ftp_upload/3624/3624fig3.jpg" /> Figura 3. Caracterização morfológica de CSM-carregado com ASC. O painel A representa uma micrografia de luz de ASC-carregado CSM, enquanto o painel B mostra o mesmo campo de visão, sobreposto com uma imagem obtida por microscopia de fluorescência confocal. ASC foram pré-carregado com calceína AM (verde). O painel C mostra uma imagem de uma imagem SEM de uma microesfera descarregado, enquanto o painel D mostra células carregadas no microesfera (asteriscos). A imagem MET em E painel mostra uma secção transversal de uma microesfera descarregado. Uma multidão de poros e fendas estão localizados ao longo da microesfera. Painel F mostra uma microesfera transversalmente com as células (setas) ligado e estendendo filopodia na CREvícios. Ampliações originais: A &amp; B = 70X; C = 500x, D = 2.000 x; E &amp; F = 2.500 x. <img alt="A Figura 4" src="/files/ftp_upload/3624/3624fig4.jpg" /> Figura 4. A migração de ASC a partir do CSM para o colagénio tridimensional andaime. Os painéis A e B representam a CSM com células migrando do microesfera e para dentro da matriz de colagénio no dia 3 (A setas,). O painel B mostra uma cultura semelhante depois de 12 dias. Microscopia electrónica de transmissão (TEM) imagens são representadas em C, D e E. Os asteriscos em C e D mostram uma microesfera que tem sido transversalmente com as células de migrar para longe da microesfera (setas). Maior ampliação de painel D está representado na painel E, e mostra filopodia célula ligado às fibrilas de colagénio (inserção). Aumento original: A &amp; B = 100x; C &amp; D = 6.000 x; E = 20.000 x, inset = 150.000 x. <img alt="A Figura 5" src="/files/ftp_upload/3624/3624fig5.jpg" /> Figura 5.Esquema representando os usos vastas CSM na medicina regenerativa e entrega da droga.

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Não há interesses conflitantes financeiros existem. Alerta As opiniões ou afirmações contidas neste documento são as opiniões pessoais dos autores e não devem ser interpretadas como oficial ou refletindo as opiniões do Departamento de Defesa ou o Governo dos EUA. Os autores são funcionários do governo dos EUA, e este trabalho foi elaborado como parte das suas funções oficiais. Todo o trabalho foi apoiado pelo EUA Pesquisa Médica do Exército e do Comando de Material. Este estudo foi realizado ao abrigo de um protocolo revisto e aprovado pelo Comitê de Ética Médica EUA Exército e do Comando de Material Conselho de Revisão Institucional, e de acordo com o protocolo aprovado.

Um grande obstáculo na terapia de células-tronco base é o desenvolvimento de métodos eficientes para a entrega de células para as regiões especificadas para a reparação. Devido ao paciente a variabilidade do paciente, o tipo de tecido, tamanho da lesão e da profundidade, a metodologia de células estaminais entrega deve ser determinada numa base de caso-a-caso. Embora a incorporação de células-tronco dentro de uma matriz e entregá-los para o local da ferida parece ser uma abordagem lógico seguinte para a engenharia de te...

<table border="1" ><tbody><tr><td> Nome do reagente / equipamentos </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários </td></tr><tr><td> Hanks BalancedSalt Solução (HBSS) </td><td> Gibco </td><td> 14175 </td><td> Consumível </td></tr><tr><td> Soro Fetal Bovino </td><td> Hyclone </td><td> SH30071.03 </td><td> Consumível </td></tr><tr><td> Colagenase do Tipo II </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C6685 </td><td> Consumível </td></tr><tr><td> 70-iM de nylon de malha de filtro </td><td> BD Biosciences </td><td> 352350 </td><td> Consumível </td></tr><tr><td> 100-iM de nylon de malha de filtro </td><td> BD Biosciences </td><td> 352360 </td><td> Consumível </td></tr><tr><td> MesenPRO Sistema Meio de Crescimento </td><td> Invitrogen </td><td> 12746-012 </td><td> Consumível </td></tr><tr><td> L-glutamina </td><td> Gibco </td><td> 25030 </td><td> Consumível </td></tr><tr><td> T75 frasco de cultura de tecidos </td><td> BD Biosciences </td><td> 137787 </td><td> Consumível </td></tr><tr><td> Chitosan </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 448869 </td><td> Consumível </td></tr><tr><td> Ácido Acético </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 320099 </td><td> Consumível </td></tr><tr><td> N-octanol </td><td> Acros Organics </td><td> 150630025 </td><td> Consumível </td></tr><tr><td> Sorbitano-mono-oleato </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S6760 </td><td> Consumível </td></tr><tr><td> Hidróxido de Potássio </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P1767 </td><td> Consumível </td></tr><tr><td> Acetona </td><td> Fisher Scientific </td><td> L-4859 </td><td> Consumível </td></tr><tr><td> Etanol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 270741 </td><td> Consumível </td></tr><tr><td> Trinitro benzenossulfónico </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P2297 </td><td> Consumível </td></tr><tr><td> Ácido clorídrico </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 320331 </td><td> Consumível </td></tr><tr><td> Éter etílico </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 472-484 </td><td> Consumível </td></tr><tr><td> 8 m de tecido Placa Insere Cultura </td><td> BD Biosciences </td><td> 353097 </td><td> Consumível </td></tr><tr><td> 1,5 ml tubos de microcentrífuga </td><td> Pescador </td><td> 05-408-129 </td><td> Consumível </td></tr><tr><td> Reagente MTT </td><td> Invitrogen </td><td> M6494 </td><td> Consumível </td></tr><tr><td> Sulfóxido de dimetilo </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D8779 </td><td> Consumível </td></tr><tr><td> Qtracker celular Labeling Kit (Q rastreador 655) </td><td> Sondas moleculares </td><td> Q2502PMP </td><td> Consumível </td></tr><tr><td> Colágeno tipo 1 </td><td> Travigen </td><td> 3447-020-01 </td><td> Consumível </td></tr><tr><td> Hidróxido de Sódio </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S8045 </td><td> Consumível </td></tr><tr><td> 12-Bem Cultura Pratos Tecido </td><td> BD Biosciences </td><td> 353043 </td><td> Consumível </td></tr><tr><td> Centrifugar </td><td> Eppendorf </td><td> 5417R </td><td> Equipamento </td></tr><tr><td> Orbital Shaker </td><td> New Brunswick Scienctific </td><td> C24 </td><td> Equipamento </td&gt; </tr><tr><td> Incubadora de CO umidificado com Air-5 2% </td><td> Thermo Scientific </td><td> Modelo 370 </td><td> Equipamento </td></tr><tr><td> Agitador </td><td> IKA </td><td> Visc6000 </td><td> Equipamento </td></tr><tr><td> Agitador Magnético </td><td> Corning </td><td> PC-210 </td><td> Equipamento </td></tr><tr><td> Exsicador de vácuo </td><td> - </td><td> - </td><td> Equipamento </td></tr><tr><td> Analisador de Tamanho de Partícula </td><td> Malvern </td><td> STP2000 Spraytec </td><td> Equipamento </td></tr><tr><td> Banho de água </td><td> Fisher Scientific </td><td> Isotemp210 </td><td> Equipamento </td&gt; </tr><tr><td> Espectrofotômetro </td><td> Beckman </td><td> Beckman Coulter Espectrofotômetro DU800UV/Visible </td><td> Equipamento </td></tr><tr><td> Vórtice </td><td> Diagger </td><td> 3030a </td><td> Equipamento </td></tr><tr><td> Leitora </td><td> Molecular Devices </td><td> Spectramax M2 </td><td> Equipamento </td></tr><tr><td> Luz / microscópio de fluorescência </td><td> Olimpo </td><td> IX71 </td><td> Equipamento </td></tr><tr><td> Microscópio confocal </td><td> Olimpo </td><td> FV-500 Laser Scanning microscópio confocal </td><td> Equipamento </td></tr><tr><td> Microscópio Eletrônico de Varredura </td><td> Carl Zeiss MicroImaging </td><td> Leo 435 VP </td><td> Equipamento </td></tr><tr><td> Microscópio eletrônico de transmissão </td><td> JEOL </td><td> JEOL 1230 </td><td> Equipamento </td></tr></tbody></table>

construindo um hidrogel de colágeno para a entrega de células-tronco carregado microesferas

Constructing a Collagen Hydrogel for the Delivery of Stem Cell-loaded Chitosan Microspheres

As células estaminais multipotenciais têm sido mostrados para ser extremamente útil no campo da medicina regenerativa 1-3. No entanto, a fim de utilizar essas células eficazmente para a regeneração de tecidos, um número de variáveis ​​devem ser tidos em conta. Estas variáveis ​​incluem: o volume total e área de superfície do local de implantação, as propriedades mecânicas do tecido e do microambiente do tecido, que inclui a quantidade de vascularização e os componentes da matriz extracelular. Portanto, os materiais que estão sendo utilizados para entregar estas células deve ser biocompatível com uma composição química definida, mantendo uma força mecânica que imita o tecido hospedeiro. Estes materiais também deve ser permeável ao oxigénio e nutrientes para proporcionar um microambiente favorável para as células para anexar e proliferar. A quitosana, um polissacárido catiónico com excelente biocompatibilidade, pode ser facilmente modificada quimicamente e tem uma elevada afinidade para se ligarem a in vivo macromolecules 4-5. A quitosana imita a porção de glicosaminoglicano da matriz extracelular, permitindo-lhe funcionar como um substrato para a migração de adesão celular, e proliferação. Neste estudo, utilizam quitosano na forma de microesferas para entregar células-tronco adiposas (ASC) em uma base de colagénio tridimensional andaime 6. Uma razão de célula-a-microesfera ideal foi determinada com respeito ao tempo de incubação e densidade celular para atingir o número máximo de células que poderiam ser carregados. Uma vez ASC são semeados no microesferas de quitosano (CSM), eles são incorporados em um andaime de colagénio e pode ser mantido em cultura durante períodos prolongados. Em resumo, este estudo fornece um método para entregar precisamente células-tronco dentro de um andaime tridimensional biomaterial.

Um grande obstáculo em terapias com células-tronco atuais é determinar o método mais eficaz para entregar essas células para tecidos do hospedeiro. Aqui, nós descrevemos um método de entrega de quitosana-base que é eficiente e simples na abordagem, ao mesmo tempo permitindo que as células-tronco adiposas para manter a sua multipotency.

Construindo um hidrogel de colágeno para a entrega de células-tronco carregado microesferas

Células-tronco multipotentes têm se mostrado extremamente úteis no campo da medicina regenerativa1-3. No entanto, para utilizar essas células de maneira eficaz...

Este protocolo oferece uma estratégia in vitro para entregar células-tronco a partir de microesferas de quitosana em um suporte de gel de colágeno, colher e cultivar. As células-tronco adipocitárias primárias emulsionam e recuperam então uma preparação de microesferas de quitosana. Em seguida, semeiam-se as células-tronco nas microesferas de quitosana e cultivam-se em um inserto de placa de cultura com membrana de oito mícrons de tamanho de poro para produzir um CSM carregado com CS; finalmente, mistura-se o sistema de liberação por microesferas com um suporte tridimensional de gel de colágeno.No fim das contas, este sistema de MTC oferece potencial para uso em medicina regenerativa e entrega de fármacos. A principal vantagem desta técnica em relação a métodos existentes, como injeção de células ou microencapsulação, é a capacidade das células de se ligarem a um material transportador e persistirem após a aplicação inicial. Geralmente, indivíduos novos nesta técnica terão dificuldades porque as microesferas de esan possuem uma carga estática intrínseca.E carregar as células sobre uma cama de microesferas será desafiador sem perturbá-las. Excise e lave o tecido adiposo perineal e ep

constructing-collagen-hydrogel-for-delivery-stem-cell-loaded-chitosan

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bioengenharia

Criação de micro-tecidos utilizando gel de colágeno cilíndricos, chamados módulos, que contêm células embarcados e cuja superfície é revestida com as células endoteliais.

Fabricação de Micro-tecidos utilizando Módulos de Colágeno Gel células contendo

Este protocolo é focado na utilização a capacidade inerente de células estaminais para tomar cue a partir de sua matriz circundante extracelular e ser induzidas a diferenciar-se em múltiplos fenótipos. Este manuscrito métodos estende nossa descrição e caracterização de um modelo utilizando um hidrogel de camada dupla, composto de PEG-fibrina e colagénio, ao mesmo tempo, co-diferenciar células-tronco...

Engenharia de um hidrogel de camada dupla para controlar a diferenciação ASC

Neste trabalho, apresentamos uma técnica para a fabricação rápida de tecidos vasculares vivos por cultura direta de colágeno, células musculares lisas e células endoteliais. Além disso, um novo protocolo para a caracterização mecânica de tecidos vasculares projetados é descrito.

Engenharia 3D celularizados Colágeno Gel para Vascular Regeneração Tecidual

O reparo da cartilagem representa um desafio médico não atendido e as abordagens baseadas em células para projetar a cartilagem articular humana são uma solução promissora. Aqui, descrevemos os hidrogéis biomiméticos tridimensionais (3D) como uma ferramenta ideal para a expansão e maturação de condrócitos articulares humanos.

3D Hidrogel Andaimes para articular de condrócitos Cultura e Geração de cartilagem

O colágeno é um componente central da ECM, e fornece pistas essenciais para diversos processos celulares que vão desde a migração para diferenciação e proliferação. Fornecidas aqui é um protocolo para a incorporação de células dentro de hidrogéis de colágeno 3D, e uma técnica mais avançada para a geração de matrizes de colágeno randomizados ou alinhadas utilizando microcanais PDMS.

Preparação de 3D colágeno Géis e microcanais para o estudo das interações 3D<em&gt; In Vivo</em

Aqui nós descrevemos uma preparação superficial de hidrogel injetável à base de quitosana usando química imina dinâmico. São apresentados métodos para ajustar a força mecânica do hidrogel e sua aplicação em cultura de células 3D.

Preparação do hidrogel injetável à base de quitosana e sua aplicação em cultura de células 3D

Este artigo descreve o encapsulamento de células-tronco pluripotentes humanas (hPSCs) usando um dispositivo de foco de fluxo coaxial. Demonstramos que essa tecnologia de encapsulamento microfluido permite a formação eficiente de esferoides hPSC.

Fabricação microfluida de microcápsulas core-shell carregando esferoides de células-tronco pluripotentes humanas

O presente protocolo descreve um método não baseado emulsão para a fabricação de microgéis de genipin quitosano. O tamanho desses microgésis pode ser precisamente controlado, e eles podem exibir inchaço dependente de pH, degradar in vivo, e ser carregados com moléculas terapêuticas que liberam ao longo do tempo de forma sustentada, tornando-os altamente relevantes para aplicações de engenharia de tecidos.

Fabricação de microgéis chitosan-genipin controlados por tamanho e sem emulsão para aplicações de engenharia de tecidos

Este protocolo demonstra o uso de um canal microfluídico com geometria variável ao longo da direção do fluxo de fluido para gerar deformação extensional (alongamento) para alinhar as fibras em um hidrogel de colágeno 3D (&lt;250 μm de espessura). O alinhamento resultante se estende por vários milímetros e é influenciado pela taxa de deformação extensional.

Microengenharia 3D Colágeno Hidrogéis com Alinhamento de Fibras de Longo Alcance

A terapia óssea via ossificação endocondral através da implantação de tecido cartilaginoso artificial produzido a partir de células-tronco mesenquimais tem o potencial de contornar os inconvenientes das terapias convencionais. Os hidrogéis de ácido hialurônico são eficazes na ampliação de enxertos de cartilagem uniformemente diferenciados, bem como na criação de osso integrado com vascularização entre enxertos fundidos in vivo.

Formação Óssea Integrada Através da Ossificação Endocondral In Vivo Usando Células-Tronco Mesenquimais

Aprenda a construir um hidrogel de colágeno com microesferas de quitosana para entrega de células-tronco adiposas. Este método mantém a multipotência celular e oferece aplicações promissoras em medicina regenerativa e terapias avançadas.

Construindo um hidrogel de colágeno para a entrega de células-tronco carregado microesferas

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