Alta e Baixa Screens rendimento com galhas-Nematóides Meloidogyne spp.

O objetivo geral deste procedimento é realizar a triagem de plantas infestadas por nematoides-das-galhas. Primeiro, cultive plântulas saudáveis em solo arenoso ou em bolsas de crescimento. Em seguida, produza um inóculo de juvenis altamente infectados do segundo estágio de nematoides-das-galhas.

Em seguida, inocule e infete adequadamente as plântulas. Por fim, avalie o desenvolvimento de massas de ovos de nematoides no sistema radicular do hospedeiro. Demonstraremos ensaios de alta e baixa produtividade em plantas com raiz, não com nematoides.

E as principais vantagens do sistema de alto rendimento são a necessidade de espaço limitado para o crescimento das plantas e a facilidade de avaliação da infecção. Assim, essas abordagens resultarão em infecção reprodutível e uniforme, infecção de raízes vegetais por nematoides, e, portanto, em uma melhor avaliação do status do hospedeiro da planta. Em geral, indivíduos novos na avaliação de plantas com nematoides nas raízes provavelmente terão dificuldades por não utilizarem o estágio de desenvolvimento adequado para infectar as raízes com nematoides.

E também utilizando juvenis de estágio infeccioso com vários dias de idade, que normalmente apresentam baixa infectividade. O procedimento será demonstrado por Hug Upatian, aluno de pós-graduação. No meu laboratório, demonstrarei o procedimento para triagem em bolsas de crescimento para ensaios em vaso. Plante sementes de tomate em um único vaso preenchido com solo rico em matéria orgânica, como a mistura Sunshine, mantendo a estufa a uma temperatura de 22 a 28 graus Celsius após a germinação.

Umedeça uma vez por semana com Miracle Grow, cerca de duas semanas após a germinação, no estágio de duas folhas verdadeiras, transfira plântulas individuais para vasos preenchidos com solo arenoso estéril, contendo 90% de areia e 10% de matéria orgânica. Adicione fertilizante de liberação lenta Osmocote e mantenha em estufa a 22 a 28 graus Celsius por duas semanas. Continue a fertilizar uma vez por semana com Miracle Grow.

Para telas de alto rendimento, plante diretamente as sementes em bandejas com solo arenoso. Cubra com filme plástico até a germinação e mantenha conforme descrito anteriormente. Após a germinação, adicione fertilizante de liberação lenta Osmocote e fertilize uma vez por semana com Miracle-Gro. Germinar as sementes em uma placa de Petri forrada com várias camadas de papel Kimwipe, mantida em incubadora a 25 a 28 graus Celsius, e então transferir as plântulas para bolsas individuais.

Alternativamente, coloque as sementes no sulco do papel para germinar diretamente em saquinhos individuais. Coloque os saquinhos em uma pasta suspensa de plástico, sendo uma pasta por caixa, e organize as pastas em uma prateleira, na posição vertical.

Coloque a prateleira em uma câmara de ambiente controlado mantida a uma temperatura de 25 a 28 graus Celsius e 16 horas de luz. Durante o ciclo de 8 horas de escuro, regue as bolsas uma ou duas vezes por dia com água de osmose reversa. Cerca de 10 a 14 dias após a semeadura, quando um sistema radicular adequado com pontas de raízes terciárias tiver se desenvolvido, as plântulas estarão prontas para inoculação. Antes de iniciar a extração dos ovos, lave cuidadosamente a área de trabalho e todas as ferramentas com água quente para evitar contaminação.

Coloque um balde em uma pia para coletar, passe a solução e posicione um suporte de malha metálica na parte superior. Empilhe três peneiras de cima para baixo em ordem decrescente de tamanho de abertura, de modo que os ovos se acumulem na peneira de 25 mícrons. Corte as partes superiores das plantas infectadas e descarte cuidadosamente.

Retire a planta do vaso e lave as raízes mergulhando-as em um balde plástico cheio de água. Enxágue as raízes posteriormente em água corrente até que as partículas de solo sejam removidas. Em seguida, extraia os ovos de nematoides das galhas de raízes de tomate infectadas.

Primeiro, corte as raízes em pequenos pedaços usando uma tesoura, descartando a raiz principal. Coloque as raízes picadas de uma única planta em um pote plástico grande com tampa e adicione solução de hipoclorito a 10% na quantidade suficiente para cobrir as raízes. Feche a tampa e agite o pote durante dois minutos.

Abra o pote e despeje as raízes na peneira superior, lavando-as com uma mangueira conectada a um bico de nebulização. Lave bem até que todo o cheiro de alvejante desapareça. Utilize um martelo de borracha para bater nas laterais das peneiras, evitando o entupimento.

Pare, remova a peneira superior e enxágue os detritos. E a segunda peneira. Remova a segunda peneira e colete os detritos finos, que incluem os ovos da última peneira, com um fluxo suave de uma garrafa de água.

Mova os detritos para um lado da peneira. Colete os detritos e ovos em um béquer limpo com a menor quantidade possível de água. Passe a água coletada no balde pela peneira de 25 mícrons para recolher quaisquer ovos que possam ter escapado.

Enxágue bem com água e colete no mesmo béquer. Forre um cesto metálico limpo com algumas camadas de papel Kim. Enxugue com papel e ajuste sobre uma placa de Petri de vidro, mantendo uma distância de um centímetro entre a base do cesto e a placa.

Despeje os ovos de nematoides extraídos sobre o papel, na cesta de arame. Adicione líquido suficiente para que a parte inferior da cesta de arame toque a superfície da água, mas não fique imersa na água.

Cubra a parte superior com uma tampa de plástico diariamente. Verifique a evaporação da água e adicione um pouco de água na placa de Petri para que a base do cesto toque a água. A cada dois dias, durante um período de seis a oito dias, para evitar que os ovos sequem, colete a água que contém as juvenis do segundo estágio ou J dois da placa de Petri em um béquer.

Se não for usado imediatamente, areje o inóculo coletado à temperatura ambiente utilizando uma fonte de ar do laboratório ou ar gerado por uma bomba de aquário. Inicie o próximo passo agitando o inóculo em uma placa de agitação magnética em baixa velocidade. Utilize três alíquotas dos nematoides coletados.

Para contar o número de J dois na contabilidade. Deslize ou placa, calcule a média e determine o volume desejado para inoculação. Estes são J dois conforme visualizados ao microscópio.

Normalmente, utilizam-se 3000 J twos por planta em vasos e 500 J twos para plantas cultivadas em bandejas de mudas. Antes de inocular as plantas, certifique-se de que o solo esteja úmido, mas não excessivamente molhado. Para a inoculação em vaso, faça três furos com cerca de metade da profundidade do vaso na areia ao redor de cada sistema radicular de tomateiro.

Usando um lápis, inocular cada planta introduzindo os J twos nos três orifícios com uma pipeta. Em seguida, cobrir os orifícios para as telas de alto rendimento em bandejas. Utilizar uma agulha modificada com ponta selada e orifícios laterais colados a uma pipeta de cinco mililitros.

Toque com a ponta de uma pipeta para depositar os J twos no solo. Mantenha as plantas em estufa a 24 a 27 graus Celsius por seis a oito semanas. Continue a fertilizar duas vezes por mês com miracle grow.

Para avaliação da infecção. Corte as partes superiores e remova cuidadosamente as plantas dos vasos, lavando as raízes. Em seguida, cora as massas de ovos de azul mergulhando as raízes em um miligrama por litro.

Areje por 15 minutos. Enxágue as raízes em água e avalie contando as massas de ovos coradas nos sistemas radiculares individuais. Uma lupa iluminada pode ser usada para ajudar a visualizar as massas de ovos, contar o nematoide, o inóculo e agitar em uma placa de agitação magnética conforme descrito anteriormente.

Retire os envelopes das pastas suspensas e coloque-os sobre uma superfície horizontal. Inocule cada envelope com 1.500 J2s em cinco mililitros. Levante a tampa plástica do envelope e distribua os nematoides uniformemente sobre a superfície das raízes.

Mantenha as bolsas em posição horizontal por 24 horas após a inoculação, cobertas com papel escuro para excluir a luz. Posteriormente, devolva as bolsas às pastas suspensas na câmara de crescimento com água. As plantas precisam ser irrigadas uma ou duas vezes ao dia durante cerca de três dias com solução de Hoagland em meia concentração até que seja observada uma resposta ao fertilizante.

Normalmente, aumento do verdejamento das folhas e crescimento mais vigoroso dos brotos. Após três dias, mantenha as bolsas úmidas com água. Aproximadamente 30 dias após a inoculação, infunda cada bolsa com cerca de 10 a 20 mililitros de 75 miligramas por litro.

Coloração a vácuo. Mantenha as bolsas inundadas com o corante em posição horizontal durante a noite. No dia seguinte, drene as bolsas e avalie os sistemas radiculares contando as massas de ovos sob uma mesa iluminada.

Aqui são mostradas ampliadas as raízes de uma planta de tomate bem infectada, com massas de ovos amplamente espalhadas, coradas de azul. O uso de bandejas permite a triagem de centenas de plantas em um espaço reduzido de cultivo. As bolsas de crescimento também permitem uma avaliação rápida e eficiente das raízes, não destrutiva, de infecções por nematoides, sem necessidade de lavar as raízes.

Este método também permite a triagem de alto rendimento de milhares de plantas em um espaço reduzido de cultivo. Aqui, o sistema radicular de uma planta de soja crescida em uma bolsa mostra massas de ovos coradas em azul após a inoculação. O momento da infecção é muito crítico para ensaios com plantas utilizando nematoides.

Assim, atrasar a infecção mesmo por alguns dias pode resultar em níveis muito elevados de infecção. Após assistir a este vídeo, você agora deve ter uma boa compreensão de como infectar e avaliar plantas com nematoides-das-galhas. Não se esqueça de que raízes infectadas por nematoides precisam ser manipuladas adequadamente.

A autoclavação das raízes antes do descarte limitará a disseminação do nematódeo. Além disso, tenha cuidado ao usar glifosato aéreo em altas doses. É carcinogênico.

Portanto, é necessário usar luvas ao manipular raízes infectadas com este produto químico, bem como ao preparar este composto.