Name: O Ex vivo Preparação microvasos isolada esquelético de Investigação da reatividade vascular (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Aprenda a isolar e canular arteríolas de resistência do músculo grácil ex vivo para avaliar reatividade vascular e propriedades estruturais. Este método permite estudar mecanismos de função e disfunção vascular em condições controladas.

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Este trabalho foi financiado pela American Heart Association (EIA 0740129N) e T32 NIH HL90610.

<ol><li>Goodwill, A. G., Frisbee, S. J., Stapleton, P. A., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+Chronic+Anticholesterol+Therapy+on+Development+of+Microvascular+Rarefaction+in+the+Metabolic+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Impact of Chronic Anticholesterol Therapy on Development of Microvascular Rarefaction in the Metabolic Syndrome.</a> Microcirculation. , 1-18 (2009).</li>
<li>Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+vascular+thromboxane+generation+impairs+dilation+of+skeletal+muscle+arterioles+of+obese+Zucker+rats+with+reduced+oxygen+tension%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Increased vascular thromboxane generation impairs dilation of skeletal muscle arterioles of obese Zucker rats with reduced oxygen tension.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 295, H1522-H1528 (2008).</li>
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<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogen+peroxide+emerges+as+a+regulator+of+tone+in+skeletal+muscle+arterioles+during+juvenile+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Hydrogen peroxide emerges as a regulator of tone in skeletal muscle arterioles during juvenile growth.</a> Microcirculation. 15, 151-161 (2008).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+myogenic+responsiveness+of+skeletal+muscle+arterioles+with+juvenile+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Increased myogenic responsiveness of skeletal muscle arterioles with juvenile growth.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 2344-2351 (2008).</li>
<li>Dacey, R. G., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+study+of+rat+intracerebral+arterioles%3A+methods%2C+morphology%2C+and+reactivity%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">A study of rat intracerebral arterioles: methods, morphology, and reactivity.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 243, H598-H606 (1982).</li>
<li>Fredricks, K. T., Liu, Y., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Response+of+extraparenchymal+resistance+arteries+of+rat+skeletal+muscle+to+reduce+PO2%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Response of extraparenchymal resistance arteries of rat skeletal muscle to reduce PO2.</a> Am. J. Physiol. 267, H706-H715 (1994).</li>
<li>Durand, M. J., Raffai, G., Weinberg, B. D., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin-%281-7%29+and+low-dose+angiotensin+II+infusion+reverse+salt-induced+endothelial+dysfunction+via+different+mechanisms+in+rat+middle+cerebral+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Angiotensin-(1-7) and low-dose angiotensin II infusion reverse salt-induced endothelial dysfunction via different mechanisms in rat middle cerebral arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299, H1024-H1033 (2010).</li>
<li>LeBlanc, A. J., Cumpston, J. L., Chen, B. T., Frazer, D., Castranova, V., Nurkiewicz, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle+inhalation+impairs+endothelium-dependent+vasodilation+in+subepicardial+arterioles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Toxicol.+Environ.+Health+A%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle inhalation impairs endothelium-dependent vasodilation in subepicardial arterioles.</a> J. Toxicol. Environ. Health A. 72, 1576-1584 (2009).</li>
<li>Jernigan, N. L., LaMarca, B., Speed, J., Galmiche, L., Granger, J. P., Drummond, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+salt+enhances+benzamil-sensitive+component+of+myogenic+constriction+in+mesenteric+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Dietary salt enhances benzamil-sensitive component of myogenic constriction in mesenteric arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, H409-H420 (2008).</li>
<li>Stapleton, P. A., Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+mechanisms+of+endothelium-dependent+dilation+in+skeletal+muscle+arterioles+with+genetic+hypercholesterolemia%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Altered mechanisms of endothelium-dependent dilation in skeletal muscle arterioles with genetic hypercholesterolemia.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 293, R1110-R1119 (2007).</li>
<li>Goodwill, A. G., Stapleton, P. A., James, M. E., d'Audiffret, A. C., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+arachidonic+acid-induced+thromboxane+generation+impairs+skeletal+muscle+arteriolar+dilation+with+genetic+dyslipidemia%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Increased arachidonic acid-induced thromboxane generation impairs skeletal muscle arteriolar dilation with genetic dyslipidemia.</a> Microcirculation. 15, 621-631 (2008).</li>
<li>Baumbach, G. L., Hadju, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanics+and+composition+of+cerebral+arterioles+in+renal+and+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Mechanics and composition of cerebral arterioles in renal and spontaneously hypertensive rats.</a> Hypertension. 21, 816-826 (1993).</li>
<li>Uchida, E., Bohr, D. F., Hoobler, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+studying+isolated+resistance+vessel+from+rabbit+mesentery+and+brain+and+their+responses+to+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">A method for studying isolated resistance vessel from rabbit mesentery and brain and their responses to drugs.</a> Circ. Res. 4, 525-536 (1967).</li>
<li>Davis, M. J., Kuo, L., Chilian, W. M., Muller, J. M. I. solated Chapter 23. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDavis%2C+MJ+%22Isolated%2C+perfused+microvessels.+In%3A+Clinically+Applied+Microcirculation+Research%22">Isolated, perfused microvessels. In: Clinically Applied Microcirculation Research</a>. Barker, J. H., Anderson, G. L., Menger, M. D. 32, CRC Press, Inc. 435-456 (1995).</li>
<li>Lombard, J. H., Liu, Y., Fredricks, K. T., Bizub, D. M., Roman, R. J., Rusch, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+and+mechanical+responses+of+rat+middle+cerebral+arterieal+to+reduced+PO2+and+prostacyclin%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Electrical and mechanical responses of rat middle cerebral arterieal to reduced PO2 and prostacyclin.</a> Am. J. Physiol. 276, H509-H516 (1994).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

O protocolo apresentado descreve a canulação remoção de isolamento, e uma dupla de microvasos músculo esquelético, embora esta técnica geral, pode ser facilmente aplicada a maior parte dos tecidos. Para o manuscrito atual, o termo &quot;arteríola&quot; tem sido usado pelos autores para descrever um navio resistência variando entre 70-120 m de diâmetro em tom de descanso ativo, que é também um contributo importante para a regulação da resistência de perfusão de um órgão ou de tecido. Com algu...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagentes e Equipamentos </td><td> Companhia </td><td> Comentários / Catálogo # </td></tr><tr><td> Câmara navio </td><td> Personalizado </td><td> Dave Eick (MCW) </td></tr><tr><td> Banho de água aquecida circulação </td><td> PolyScience e Haake </td><td> Haake DC 10 </td></tr><tr><td> Pipetas </td><td> Frederick Haer &amp; Co. </td><td> Tubulação capilar 2,0 milímetros OD x 1,0 mm ID (27-33-1) </td></tr><tr><td> Monitor de Pressão </td><td> Instrumentos de precisão do mundo </td><td></td></tr><tr><td> Reservatório de Água Jacketed </td><td> Personalizado </td><td></td></tr><tr><td> Fonte de luz externa </td><td> Instrumentos de precisão do mundo </td><td> Novaflex </td></tr><tr><td> Extrator pipeta </td><td> Microdados Instruments </td><td> PMP102 micropipeta Puller </td></tr><tr><td> Comple completomento de instrumentos cirúrgicos </td><td> Belas Ferramentas Ciência </td><td> Dumont </td></tr><tr><td> Ultra pinça fina </td><td> Belas Ferramentas Ciência </td><td> Inox # 5 </td></tr><tr><td> Fio de sutura de seda </td><td> Ethilon </td><td> # 10-0 ou 9-0 </td></tr><tr><td> Microscópio estéreo </td><td> Olimpo </td><td> Olympus SZ-11 </td></tr><tr><td> Analógicas Calipers Vídeo </td><td> Boeckeler </td><td> Via Controller (Via-100) </td></tr><tr><td> Câmera de alta resolução analógica </td><td> Panasonic </td><td> GP-MF 602 </td></tr><tr><td> Tanque de oxigênio </td><td> Regional </td><td> Balanço de nitrogênio de 21% e 5% CO 2 balanço de nitrogênio </td></tr><tr><td> Tubulação </td><td> Tygon </td><td></td></tr><tr><td> Escorra bomba </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td></td></tr><tr><td> Modificados PSS Rato </td><td> Ver receita abaixo </td><td></td&gt; </tr><tr><td> PSS relaxante Van Breemen de </td><td> Ver receita abaixo </td><td></td></tr></tbody></table> Tabela 1. Uma lista dos componentes principais de configuração isolado de microvasos estação apresentados nas Figuras. <table border="1"><tbody><tr><td> Receita PSS Modificado Rato </td><td> Para fazer dois litros de PSS </td><td> 20X estoque Salt (2L) </td><td> 20X depósito (2L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td></td><td> 278,0 g </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td></td><td> 14,0 g </td><td></td></tr><tr><td> MgSO4-7H 2 ó </td><td></td><td> 11,5 g </td><td></td></tr><tr><td> CaCl2-H2O </td><td></td><td> 9,4 g </td><td></td></tr><tr> &lt;td&gt; de NaHCO3 </td><td></td><td></td><td> 80,8 g </td></tr><tr><td> EDTA </td><td></td><td></td><td> 0,4 g </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> 0,28 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Glicose </td><td> 1,98 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x estoque Sal </td><td> 100 mL </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x depósito </td><td> 100 mL </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Água destilada </td><td> 1800 mL </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabela 2. Receita para solução de sal de padrão fisiológico (PSS) utilizado nos protocolos microvascular tumoral isolados. Comentários sobre Receita: Faça 2 L de Banco de sal e 2 L de depósito. Estes cum ser refrigerado quando não estiverem sendo usados, mas agitá-los bem e, muitas vezes antes de preparar PSS. Os ingredientes adicionais são adicionados no momento da preparação de PSS finais. <table border="1"><tbody><tr><td> PSS relaxante Van Breemen de </td><td> Para fazer 2 litros de PSS </td><td> 20X estoque Salt (1L) </td><td> 20X depósito (1L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td></td><td> 107,4 g </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td></td><td> 7,0 g </td><td></td></tr><tr><td> MgSO4-7H 2 ó </td><td></td><td> 5,76 g </td><td></td></tr><tr><td> MgCl 2-6H 2 ó </td><td></td><td> 81,32 g </td><td></td></tr><tr><td> De NaHCO3 </td><td></td><td></td><td> 40,4 g </td></tr><tr><td> EDTA </td><td></td><td></td><td> 0,2 g </td></tr><tr><td> EGTA </td><td></td><td></td><td> 15,22 </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> 0,28 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Glicose </td><td> 1,98 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x estoque Sal </td><td> 100 mL </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x depósito </td><td> 100 mL </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Água destilada </td><td> 1800 mL </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabela 3. Receita para solução Van Breemen do sal relaxante fisiológica (PSS) utilizado nos protocolos microvascular tumoral isolados sob condições de tom activa zero. Comentários sobre Receita: Faça 1 L de Banco de sal pornd L 1 de depósito. Estes podem ser refrigerado quando não estiverem sendo usados, mas agitá-los bem e, muitas vezes antes de preparar PSS. Os ingredientes adicionais são adicionados no momento da preparação de finais PSS relaxantes.

o ex vivo preparação microvasos isolada esquelético de investigação da reatividade vascular

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

A preparação de microvasos isolado é uma preparação ex vivo que permite a análise das diferentes contribuições de factores que o diâmetro dos vasos de controlo, e assim, a resistência de perfusão 1-5. Esta é uma preparação clássica experimental que foi, em grande medida, inicialmente descrita por Uchida et al. De 15 há várias décadas. Esta descrição inicial serviu de base para as técnicas que foi amplamente modificado e melhorado, principalmente no laboratório do Dr. Brian Duling da Universidade de Virginia 6-8, e nós apresentamos uma abordagem atual nas páginas seguintes. Esta preparação irá referir-se especificamente à arteríola gracilis num rato como o microvasos de escolha, mas a preparação de base pode facilmente ser aplicado aos recipientes isolados a partir de quase qualquer outro tecido ou órgão em várias espécies 9-13. Mecânico (ie, dimensional) alterações no microvasos isolado pode ser facilmente avaliadaem resposta a uma ampla gama de fisiológico embora ex (por exemplo, pressão, hipóxia intravascular, ou cisalhamento) ou desafios farmacológicos, e pode fornecer uma visão em elementos mecanicistas compreendendo respostas integrados em um intacto, in vivo de tecidos,. O significado deste método é que ele permite uma manipulação fácil das influências sobre a regulação integrado de diâmetro microvascular, enquanto também permite que para o controlo de muitas das contribuições a partir de outras fontes, incluindo a pressão intravascular (miogênica), inervação autonômica, hemodinâmica ( por exemplo, estresse, cisalhamento), disfunção endotelial, estímulos dependentes ou independentes, hormonais e influências parenquimatosas, para fornecer uma lista parcial. Sob condições experimentais adequadas e com metas apropriadas, este pode servir como uma vantagem sobre in vivo ou in situ de tecidos de órgãos / preparações, que não permitem prontamente para o controlo fácil do mais amplos variáveis ​​sistémicas. A malimitação jor desta preparação é essencialmente a conseqüência de suas forças. Por definição, o comportamento destes navios está sendo estudada sob condições em que muitos dos contribuintes mais significativos para a regulação da resistência vascular tenham sido removidos, incluindo neural, humoral, metabólicas, etc Como tal, o investigador deve ser advertido para evitar o excesso de interpretação e extrapolação dos dados que são coletados utilizando esta preparação. A outra área significativa de preocupação em relação a esta preparação é que ele pode ser muito fácil de danificar os componentes celulares, tais como o revestimento endotelial ou o músculo liso vascular, tal fonte que variável de erro pode ser introduzido. É fortemente recomendada que o investigador indivíduo utilizar medições adequadas para assegurar a qualidade da preparação, tanto no início da experiência e periodicamente durante todo o curso de um protocolo.

Um<em&gt; Ex vivo</emPreparação&gt; é descrita para o isolamento das maiores grácil arteríolas musculares de resistência para interrogatório de ambas as respostas vasculares aos estímulos vasoativos e na avaliação de propriedades estruturais básicas via mecânica da parede passivos.

O Ex vivo Preparação microvasos isolada esquelético de Investigação da reatividade vascular

A preparação de microvasos isolados é uma preparação ex vivo que permite examinar as diferentes contribuições de fatores que controlam o vaso...

O objetivo geral deste procedimento é isolar cirurgicamente, remover e canular duplamente artérias de resistência individuais. Para estudo em um ambiente ex vivo, isso é realizado primeiramente identificando e isolando cirurgicamente um vaso microscópico em um animal anestesiado. Após transferir o vaso microscópico para uma câmara de vaso, as extremidades proximal e distal do vaso microscópico são ambas canuladas.Por fim, os microvasos são expostos a desafios farmacológicos ou fisiológicos e intervenções experimentais para avaliar os mecanismos subjacentes à função ou disfunção intrínsecos ao próprio vaso. Em última análise, os resultados demonstram os padrões e mecanismos contribuintes subjacentes à reatividade vascular em um ambiente isolado, por meio de estímulos e intervenções adequadamente direcionados. Geralmente, indivíduos novos neste método enfrentarão dificuldades, pois este preparo exige não apenas o desenvolvimento de excelentes habilidades cirúrgicas a serem realizadas sob microscópio, mas também paciência e controle motor fino necessários para canular duplamente um microvaso isolado com diâmetro frequentemente muito inferior a cem mícrons.Isso deve ser feito com um mínimo absoluto de trauma ao vaso, ou todo o procedimento resultará apenas em um vaso sem resposta, demonstrando que o procedimento será Joshua Butcher, um estudante de pós-graduação do meu laboratório antes de realizar vasos microscópicos isolados. Preparação. Comece dobrando pipetas microscópicas de vidro previamente preparadas em uma configuração apropriada aquecendo-as sobre uma chama de butano. Em seguida, use pinças finas para quebrar as pontas até um diâmetro adequado.Coloque duas micropipetas em oposição nos suportes de pipeta para a câmara de microvasos, orientando-as de modo que as pontas estejam no mesmo plano vertical e horizontal dentro da câmara do vaso. Em seguida, prepare uma solução salina fisiológica ou PSS e verifique se o pH está ajustado aos níveis apropriados para as condições experimentais específicas. Usando um hemocitômetro ou micrômetro de platina de microscópio, calibre os paquímetros de vídeo digital que serão utilizados para medir o diâmetro do vaso.Use um fio cirúrgico oftálmico de número oito ou menor para preparar laços de ponta simples para prender os microvasos às pipetas. Guarde os laços em uma placa de Petri sobre uma pequena tira de fita adesiva enrolada em torno de uma lâmina de microscópio no dia do experimento. Ligue os gases de equilíbrio na câmara de vasos e nos reservatórios PERFUSE oito e SUSE oito.Encha todos os reservatórios, tubos e câmaras com a solução PSS. Se necessário, use uma seringa para empurrar suavemente a solução PSS por toda a pipeta, garantindo que ela esteja desobstruída e completamente cheia. Mantenha a pressão de entrada dentro de limites razoáveis para evitar danos aos transdutores de pressão.Após anestesiar o animal e expor os microvasos, remova os microvasos utilizando pinças finas para segurar o lado externo e cortando ao longo do comprimento do vaso. Tenha extremo cuidado para não puxar ou tracionar o vaso. Em seguida, coloque o vaso em um banho de água cheio e, utilizando um par de pinças finas e uma taxa de perfusão moderada, segure cada lado da parede do lúmen proximal do vaso e canule a extremidade proximal na pipeta de entrada.Em seguida, deslize o vaso sobre as pontas da cânula e avance o vaso até a ponta até o ponto em que as alças em T possam fixar o vaso. Posicione a alça em T na extremidade distal do vaso e canule-o na pipeta de saída, fixando-o com as alças em T. Ajuste a cânula até que haja distorção mínima no vaso e o vaso aproxime o comprimento in vivo.Coloque uma pequena pedra de borbulhamento que forneça a mistura de gás apropriada na solução e posicione. Utilize filme plástico ou uma tampa de vidro sobre a câmara para evitar respingos na lente do microscópio. Periodicamente, feche o tubo de saída para verificar se o vaso está desenvolvendo uma coloração de ferrugem.Verifique os vasos quanto a vazamentos aumentando a pressão no vaso e prendendo as linhas de saída seguidas pelas de entrada. Se a pressão intraluminal for estável, então não há vazamentos perceptíveis. Se o vaso possuir um pequeno ramo lateral que vaze, amarre-o com um laço simples de sutura oftálmica 10-0 após a canulação dos microvasos, equilibração e validação, inicie o experimento para determinar as respostas iniciais de controle.Por exemplo, para um estímulo fisiológico, como ativação miogênica ou constrição induzida por pressão, altere aleatoriamente a pressão intraluminal dentro de uma faixa desejada e permita que o vaso tenha tempo para responder ao desafio com fenilefrina na droga em concentrações variadas, em ordem aleatória. Após um tempo apropriado de intervenção, inicie uma segunda rodada de coleta de dados realizando intervenções adicionais ou lavando a solução inicial ou removendo o desafio fisiológico e verificando se o vaso retornou ao equilíbrio. Uma vez que o vaso perca o tônus ativo, encerre o experimento ou, se desejado, colete dados sobre a mecânica da parede do vaso.Quando o experimento estiver concluído, lave todas as linhas e câmaras com PSS e grandes quantidades de água destilada ou deionizada, e então deixe-as secar completamente. É mostrado aqui um vaso microvascular canulado com pipetas de entrada e saída, bem como alças em alta magnificação. O diâmetro interno de centenas de 12 mícrons, determinado usando paquímetros digitais, é evidente aqui.Um microvaso canulado é mostrado após a equilibração. Aqui está o mesmo vaso após dilatação em resposta ao estímulo com acetilcolina. E, finalmente, este é o vaso contraído após o estímulo com fenilefrina.Esses gráficos resumem as respostas de um microvaso isolado a desafios com hipóxia, concentrações crescentes de acetilcolina ou alterações na pressão intravascular em condições controle. Em seguida, na presença de PSS sem cálcio. Uma vez dominada, esta técnica pode ser realizada em aproximadamente uma hora se for executada corretamente, e o vaso pode facilmente permanecer viável por várias horas na câmara com a manutenção de temperatura apropriada, gás e condições SUSE oito ou perfusão oito.

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Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Um novo método versátil para a observação da microcirculação é apresentado. Ele é considerado adequado para observação a longo prazo, e para combinação com pharmacophysiological ou molecular intervenções biológicas.

Medição in vivo Micro-circulação no músculo esquelético por Intra-vital Microscopia

Nós apresentamos uma preparação para a visualização e manipulação de sinalização do cálcio em nativa, endotélio microvascular intacta. Tubos endoteliais recém isolado das artérias de resistência do mouse fornecendo músculo esquelético manter vivo na morfologia e sinalização dinâmica dentro e entre as células vizinhas. Tubos endoteliais pode ser preparado a partir de microvasos de outros tecidos e órgãos.

Isolamento de tubos endoteliais microvasculares de Artérias Rato Resistência

O intestino delgado é freqüentemente expostos a toxinas que podem influenciar o fluxo sanguíneo e impactar negativamente a absorção de nutrientes. Usando uma artéria mesentérica e multimyograph e veia isolados, os compostos de interesse ou toxinas podem ser rastreados para a vasoactividade.

Isolando e com cortes de bovinos artéria e veia mesentérica como Bioassay teste para vasoactividade no intestino delgado

Nós apresentamos um protocolo para estudar as interações endotelial-pericyte humanos no rato usando uma variação do ensaio plugue angiogênese gel matriz.

No estudo in vivo da Human Interaction Endotelial-pericyte usando o plug Ensaio Matrix Gel no mouse

É descrito um procedimento para preparar preparações en face da artéria carótida e da aorta do rato. Tais preparações, quando imunofluorescentemente coradas com anticorpos específicos, permitem estudar a localização de proteínas e a identificação de tipos de células dentro de toda a parede vascular por microscopia confocal.

En Face Preparação de Vasos Sanguíneos de Rato

Sistemas de tele-microscopia são usados para examinar as propriedades funcionais das arteríolas isoladas de tecido adiposo em resposta a estímulos fisiológicos e farmacológicos. Esta técnica pode ser usada para examinar fenótipos microvasculares em domínios diferentes de tecido adiposo em seres humanos obesos.

Avaliação da função Microvascular de tecido adiposo humano usando tele-microscopia

Este manuscrito descreve em vitro protocolos de vídeo microscopia para avaliar a função vascular nas artérias de resistência cerebral de rato. O manuscrito também descreve técnicas para avaliar a densidade de microvessel com perfusão de lectina e tecido fluorescente etiquetada usando Laser Doppler Flowmetry.

Avaliação dos mecanismos de controlo Vascular utilizando a microscopia das artérias de resistência isolada de ratos

Este manuscrito descreve um protocolo simples para o isolamento de arteríolas da retina rato que podem ser usados em, cálcio imaging e pressão miografia Estudos eletrofisiológicos.

Isolamento de arteríolas retina para estudos de fisiologia celular Ex Vivo

Aqui, nós apresentamos um protocolo para a coloração da imunofluorescência para observar diretamente as pilhas endothelial da aorta do rato. Esta técnica é útil ao estudar o phenotype celular e molecular de pilhas endothelial em testes padrões de fluxo diferentes e no desenvolvimento da aterosclerose.

Usando a mancha da imunofluorescência da cara do en para observar diretamente pilhas endothelial vasculares

O objetivo deste protocolo é isolar microvasos de várias regiões do sistema nervoso central de vertebrados lissencefálicos e girofálicos.

Isolamento confiável de micronavios do sistema nervoso central em cinco grupos de vertebrados

A preparação intensiva de "tubos" endoteliais cerebrais intactos de arteriolas parenchímicas cerebrais é ilustrada para o estudo da regulação do fluxo sanguíneo cerebral. Além disso, demonstramos os pontos fortes experimentais deste modelo de estudo endotelial para a medição de imagens de fluorescência e eletrofisiologia das principais vias de sinalização celular, incluindo alterações no potencial intracelular [Ca2+] e membrana.

Isolamento e Análise Funcional do Endotélio Arteriolar do Cérebro do Rato Parenchyma

Aprenda a isolar e canular arteríolas de resistência do músculo grácil ex vivo para avaliar reatividade vascular e propriedades estruturais. Este método permite estudar mecanismos de função e disfunção vascular em condições controladas.

O Ex vivo Preparação microvasos isolada esquelético de Investigação da reatividade vascular

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