Name: Parasite Induzida geneticamente guiadas Doenças Auto-Imunes do Coração Chagas no Modelo de Frango (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 23 s
Description: Aprenda a integração do kDNA de Trypanosoma cruzi no genoma de galinhas e o desenvolvimento de doença cardíaca semelhante à Chagas. Este modelo revela mecanismos genéticos da patogênese parasitária.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Somos gratos a Nancy R. Sturm, Departamento de Imunologia, Microbiologia e Biologia Molecular, David Geffen School of Medicine, Universidade da Califórnia em Los Angeles, para a leitura crítica do manuscrito. O Conselho Nacional de Pesquisa-CNPq, ea Fundação para o Desenvolvimento da Pesquisa-FAPDF, Brasil, apoiou o estudo. Agradecemos a ajuda técnica de Alessandro O. Souza, C. Maria Guimaro, Cordeiro Ciro, de Ana Cassia Rosa, Roseneide Alves e Rafael Andrade, da Universidade de Brasília, Brasil.

<ol><li>Teixeira, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+chagas%27+disease%3A+parasite+persistence+and+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22CMR%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of chagas' disease: parasite persistence and autoimmunity.</a> CMR. 24, 592-630 (2011).</li>
<li>Teixeira, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chagas+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Postg.+Med.+J%22%5BJournal%5D)">Chagas disease.</a> Postg. Med. J. 82, 788-798 (2006).</li>
<li>Teixeira, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trypanosoma+cruzi+in+the+chicken+model%3A+Chagas-like+heart+disease+in+the+absence+of+parasitism%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Negl.+Trop.+Dis%22%5BJournal%5D)">Trypanosoma cruzi in the chicken model: Chagas-like heart disease in the absence of parasitism.</a> PLoS Negl. Trop. Dis. 5, e1000(2011).</li>
<li>Hecht, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inheritance+of+DNA+transferred+from+American+trypanosomes+to+human+hosts%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Inheritance of DNA transferred from American trypanosomes to human hosts.</a> PLoS One. 5, e9181(2010).</li>
<li>Xing, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roles+of+the+ERK+MAPK+in+the+regulation+of+proinflammatory+and+apoptotic+responses+in+chicken+macrophages+infected+with+H9N2+avian+influenza+virus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Virol%22%5BJournal%5D)">Roles of the ERK MAPK in the regulation of proinflammatory and apoptotic responses in chicken macrophages infected with H9N2 avian influenza virus.</a> J. Gen. Virol. 91, 343-351 (2010).</li>
<li>Kim, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NIK+and+IKKbeta+interdependence+in+NF-kappaB+signalling--flux+analysis+of+regulation+through+metabolites%5BTitle%5D)+AND+%22Biosystems%22%5BJournal%5D)">NIK and IKKbeta interdependence in NF-kappaB signalling--flux analysis of regulation through metabolites.</a> Biosystems. 99, 140-149 (2010).</li>
<li>Karakhanova, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ERK%2Fp38+MAP-kinases+and+PI3K+are+involved+in+the+differential+regulation+of+B7-H1+expression+in+DC+subsets%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">ERK/p38 MAP-kinases and PI3K are involved in the differential regulation of B7-H1 expression in DC subsets.</a> Eur. J. Immunol. 40, 254-266 (2010).</li>
<li>Finsterer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+heart+in+human+dystrophinopathies%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiology%22%5BJournal%5D)">The heart in human dystrophinopathies.</a> Cardiology. 99, 1-19 (2003).</li>
<li>Nitz, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heritable+integration+of+kDNA+minicircle+sequences+from+Trypanosoma+cruzi+into+the+avian+genome%3A+insights+into+human+Chagas+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Heritable integration of kDNA minicircle sequences from Trypanosoma cruzi into the avian genome: insights into human Chagas disease.</a> Cell. 118, 175-186 (2004).</li>
<li>Simpson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetoplast+DNA+in+trypanosomid+flagellates%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+Rev.+Cytol%22%5BJournal%5D)">Kinetoplast DNA in trypanosomid flagellates.</a> Int. Rev. Cytol. 99, 1-19 (1986).</li>
<li>Bonney, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat-killed+Trypanosoma+cruzi+induces+acute+cardiac+damage+and+polyantigenic+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Heat-killed Trypanosoma cruzi induces acute cardiac damage and polyantigenic autoimmunity.</a> PLoS One. 6, e14571(2011).</li>
<li>Moser, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+Trypanosoma+cruzi+by+DNA+amplification+using+the+polymerase+chain+reaction%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Detection of Trypanosoma cruzi by DNA amplification using the polymerase chain reaction.</a> J. Clin. Microbiol. 27, 1477-1482 (1989).</li>
<li>Sturm, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensitive+detection+and+schizodeme+classification+of+Trypanosoma+cruzi+cells+by+amplification+of+kinetoplast+minicircle+DNA+sequences%3A+use+in+diagnosis+of+Chagas%27+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biochem.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Sensitive detection and schizodeme classification of Trypanosoma cruzi cells by amplification of kinetoplast minicircle DNA sequences: use in diagnosis of Chagas' disease.</a> Mol. Biochem. Parasitol. 33, 205-214 (1989).</li>
<li>Teixeira, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evolution+and+pathology+in+chagas+disease--a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Mem.+Inst.+Oswaldo+Cruz%22%5BJournal%5D)">Evolution and pathology in chagas disease--a review.</a> Mem. Inst. Oswaldo Cruz. 101, 463-491 (2006).</li>
<li>Yurchenko, V. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+of+Leishmania+minicircle+kinetoplast+DNA+classes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Structure of Leishmania minicircle kinetoplast DNA classes.</a> J. Clin. Microbiol. 37, 1656-1657 (1999).</li>
<li>Simpson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genomic+organization+of+guide+RNA+genes+in+kinetoplastid+protozoa%3A+several+conundrums+and+their+solutions%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biochem.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">The genomic organization of guide RNA genes in kinetoplastid protozoa: several conundrums and their solutions.</a> Mol. Biochem. Parasitol. 86, 133-141 (1997).</li>
<li>Thomas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+non-universal+transcription+factor%3F+The+Leishmania+tarentolae+TATA+box-binding+protein+LtTBP+associates+with+a+subset+of+promoters%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">A non-universal transcription factor? The Leishmania tarentolae TATA box-binding protein LtTBP associates with a subset of promoters.</a> Int J. Parasitol. 36, 1217-1226 (2006).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

Diferentemente dos mamíferos suscetíveis a infecções pelo T. cruzi durante toda a vida, os frangos são refratários à infecção pelo T. cruzi. A principal vantagem do sistema modelo de frango é a eliminação da infecção no início do desenvolvimento do sistema imunológico embrionário. Assim, o único DNA parasitário remanescente no corpo do frango está integrado em diversos loci.
O uso da quantidade ideal de tripomastigotas virulentos de T. cruzi para inoculação em ovos férteis é a etapa crucial para obter a integração dos minicírculos de kDNA no genoma do embrião de galinha. A taxa de pintinhos vivos eclodidos a partir de ovos inoculados com 100 tripomastigotas é quatro vezes maior do que a obtida com 500 parasitas. Deve-se ter cuidado para inocular a suspensão de parasitas em 10 μL de meio de cultura na câmara de ar do ovo. Não deve haver vazamento de clara. Em condições ideais, a infecção parasitária intracelular ocorre em poucas horas após a incubação, e a multiplicação dos parasitas dentro das células hospedeiras prossegue por uma semana; após esse período, a infecção é eliminada pela imunidade inata. A integração do kDNA exige uma infecção viva, e a inoculação de minicírculos nus em ovos de embriões de galinha não resulta em integração. Os embriões positivos para kDNA e os controles devem ser mantidos em condições controladas a 37,5 °C e umidade de 65%. Os pintinhos são mantidos em gaiolas por duas semanas a uma temperatura ambiente de 33 °C. Posteriormente, as galinhas são mantidas em gaiolas sobre prateleiras suspensas, separadas por corredores de 1,5 metro de largura, em um ambiente a 22 °C com ar filtrado e pressão positiva sob exaustão constante, garantindo condições de bem-estar animal. Os adultos recebem ração para galinhas e água potável corrente para atingir crescimento e maturidade plenos, colocando ovos aos cinco meses de idade. A manutenção de procedimentos higiênicos é essencial para a reprodutibilidade dos resultados ao se trabalhar com T. cruzi inoculado em ovos férteis de galinha.
No sistema modelo de galinha, as infecções por T. cruzi são erradicadas após o desenvolvimento do sistema imunológico no início do crescimento embrionário. Além de estarem livres de infecção, os pintinhos que eclodem de ovos inoculados com T. cruzi, na ausência de anticorpos específicos, são tolerantes aos antígenos do parasita. A rejeição das células-alvo do coração por linfócitos citotóxicos (unidade mínima de rejeição, Figura 3) é observada em galinhas com mutação no kDNA, que apresentam modificações genotípicas e rompimento da vigilância imunológica 3. Os linfócitos T com genótipo modificado apresentam rejeição acelerada de tecidos próprios no organismo. O principal local da lesão é o coração, que constitui uma característica marcante da doença de Chagas. A transição de um estado fisiológico (vigilância) para um estado fisiopatológico é observada na galinha com kDNA mutado, que mostra proliferação clonal de linfócitos citotóxicos 3.
Este sistema modelo de transreino mostra uma doença autoimune induzida por parasita e geneticamente determinada (Figura 6), decorrente de modificações no genoma provocadas pela integração de minicírculos do kDNA do T. cruzi. Essas modificações não são observadas em pintinhos provenientes de ovos inoculados com Lb.
Esse fenômeno sugere que o tratamento experimental da cardiomiopatia autoimune inflamatória em galinhas com mutação no DNAk pode exigir a supressão medicamentosa do progenitor medular de fenótipo específico de linfócitos T que infiltra o miocárdio, bem como o transplante de medula óssea saudável e histocompatível para prevenir a rejeição do tecido próprio.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários </td></tr><tr><td> Taq DNA polimerase recombinante </td><td> Invitrogen </td><td> 11615-010 </td><td></td></tr><tr><td> Platinum Taq DNA polimerase </td><td> Invitrogen </td><td> 10966-030 </td><td></td></tr><tr><td> Aleatória Primers DNA Labeling Sistema </td><td> Invitrogen </td><td> 18187-013 </td><td></td></tr><tr><td> Eco RI </td><td> Invitrogen </td><td> 15202-021 </td><td></td></tr><tr><td> Mbo I </td><td> Invitrogen </td><td> 15248-016 </td><td></td></tr><tr><td> dNTP Set, 100mM Solutions </td><td&gt; GE Healthcare </td><td> 28-4065-51 </td><td></td></tr><tr><td> Amersham Hybond - N + - Cat n. </td><td> GE Healthcare </td><td> RPN303B </td><td></td></tr><tr><td> PlasmidPrep Mini spin kit </td><td> GE Healthcare </td><td> 28-9042-70 </td><td></td></tr><tr><td> Nsi I </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> R5884 1KU </td><td></td></tr><tr><td> DNA, de sódio de esperma de peixe Sal </td><td> Amresco </td><td> 0644-10G </td><td></td></tr><tr><td> De ratinho anti-galinha Bu-1b </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8370-02 </td><td></td></tr><tr><td> De ratinho anti-CD45 de galinha </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8270-08 </td><td></td></tr><tr><td>Rato anti-galinha TCRγδ </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8230-08 </td><td></td></tr><tr><td> De ratinho anti-CD8a galinha </td><td> SouthernBiotech </td><td> 9220-02 </td><td></td></tr><tr><td> Rato monócitos anti-galinha / macrófagos </td><td> SouthernBiotech </td><td> 8420-02 </td><td></td></tr><tr><td> MyCycle Termocycler </td><td> Bio-Rad Laboratories </td><td> 580BR 5501 </td><td></td></tr></tbody></table>

parasite induzida geneticamente guiadas doenças auto-imunes do coração chagas no modelo de frango

Parasite Induced Genetically Driven Autoimmune Chagas Heart Disease in the Chicken Model

As infecções agudas do Trypanosoma cruzi adquiridos na infância parecem assintomáticas, mas aproximadamente um terço dos casos cronicamente infectados apresentam a doença de Chagas até três décadas ou mais tarde. Autoimunidade e persistência parasita estão competindo teorias para explicar a patogênese da doença de Chagas 1, 2. Para papéis distintos desempenhados por parasita persistência e auto-imunidade na doença de Chagas nos inocular o T. cruzi na câmara de ar de ovos fertilizados. O sistema imunológico maduro frango é uma barreira biológica apertado contra T. cruzi e que a infecção é erradicada sobre o desenvolvimento da sua sistema imunitário, até ao final da primeira semana de crescimento 3. Os filhotes são parasita-livre em eclosão, mas eles mantêm integrados parasita mitocondrial DNA do cinetoplasto (kDNA) minicírculos dentro de seu genoma que são transferidos aos seus descendentes. Documentação da integração kDNA minicírculo no genoma de galinha foi obtido por um targeted principal TAIL-PCR, hibridização do Sul, clonagem, sequenciamento e 3, 4. O kDNA minicírculos integrações ruptura quadros de leitura aberta para a transcrição e factores do sistema imunitário, fosfatase (GTPase), adenilato ciclase e fosforilases (PKC, NF-kappa B activador, PI-3K) associado com a fisiologia da célula, o crescimento, diferenciação e 3, 5 - 7, e as funções de outros genes. Miocardite grave devido a rejeição de fibras de coração do alvo por efectores linfócitos citotóxicos é visto nas galinhas kDNA mutados, mostrando uma cardiomiopatia inflamatória semelhante à observada na doença de Chagas humana. Notavelmente, a insuficiência cardíaca e fraqueza muscular esquelética estão presentes em frangos adultos com kDNA ruptura do gene da distrofina no cromossoma 1 8. Similares alterações genotípicas estão associados com a destruição do tecido realizado por efectores CD45 +, CD8γδ + e CD8a linfócitos. Assim, esta protozoose pode induzir geneticamente orientada doença auto-imune.

A inoculação de<em&gt; Trypanosoma cruzi</em&gt; Em ovos férteis para incubação anteriores torna o parasita minicírculos do kDNA integração no genoma de células de embriões. Cruzamento revela a transferência vertical das mutações à progenitura. O kDNA integra em regiões codificantes em vários cromossomos e as galinhas morrer com uma doença cardíaca inflamatória auto-imune.

Parasite Induzida geneticamente guiadas Doenças Auto-Imunes do Coração Chagas no Modelo de Frango

As infeções agudas por Trypanosoma cruzi adquiridas na lactância e na infância parecem ser assintomáticas, mas aproximadamente um terço dos casos de infeção crónica...

A doença de Cha é a condição clínica que decorre de infecções crônicas pelo ate prot e tno mausi. A doença ataca o coração de pessoas infectadas crônicas várias décadas após a aquisição das infecções. Um sistema modelo multirregno mostra que ovos de galinha são permissivos às infecções por Taz macro cruise.Durante a primeira semana de crescimento do embrião, os experimentos mostram que frangos livres de infecção que retêm o parasita KA em seus genomas morrem de doença cardíaca de Chagas, sendo que boas condições de alojamento, alimentação e fornecimento de água garantem o bem-estar animal. A massa tripla de cruzeiro e boas formas natatórias são obtidas a partir de cultura de tecidos. Transilumine para tio e ovos para mostrar o controle de suas bolhas.Os ovos não recebem inoculação com vírus. Os ovos controle simulado são inoculados com 10 microlitros de meio de cultura. O orifício é selado com fita adesiva 100 viral FL mania.Os brasileiros são profissionais mestres. Cabras estão inoculando a câmara de ar de ovos de galinha fertilizados com 100 unidades virais e aprisionando cabras macro tríplices mestras em 10 microlitros de meio de cálcio, que são inoculados na câmara de ar ou em ovos de galinha virtualizados. Os ovos são incubados a 37 °C e umidade de 65% por um a dois dias, com rotação suave a cada 30 minutos. Os espécimes eclodem igualmente de ovos inoculados macro renosos e de controles marcados.As bochechas crescem até a vida adulta. As amostras de sangue são coletadas das veias das asas. O sangue é transferido para tubos cónicos de 15 mL.As células mononucleares são separadas por centrifugação sobre gradiente de FICO, lavando e descartando a camada de células brancas. O DNA genômico de tamanho médio é extraído de células mononucleares do sangue e colocado em tubos cónicos de 1,5 ml de acordo com o desenho da PCR. A PCR é realizada para amplificar a sequência nuclear de G-N-A-N-G-N-A e pls GNA kg NA. Utilizando conjuntos específicos de primers, monta-se as reações em tubos e coloca-se no termociclador após a execução.Retire os tubos do termociclador. Analise os produtos da PCR. Os produtos da PCR são separados por eletroforese em gel de agarose.As bandas de GNA no gel são transferidas para uma membrana de nylon com carga positiva. A hibridização é realizada com sondas radioativas específicas para separar os papéis desempenhados independentemente pela persistência do parasita e pela imunidade. Na patogênese da doença de Chagas, utilizamos um modelo de galinha refratária à infecção por TNO cruise, exceto durante o crescimento embrionário inicial, anterior ao desenvolvimento do sistema imunológico; os pintinhos provenientes de ovos inoculados com TNO cruise estão livres de infecção, mas o A KG A mitocondrial do parasita é retido no organismo.Apenas frangos provenientes de ovos inoculados com tzo macro apresentam bandas de kg, indicando que o DNA não está presente no genoma do frango. Frangos provenientes de ovos inoculados com cabras pro master de Leia brasileira não retêm as sequências mitocondriais em círculo em seus genomas. Poço um: em branco; poço dois: controle de GNA; poços três e quatro: controle negativo de GS; poços cinco a 14: GS de frangos provenientes de ovos infectados de Las mania brasileiros.Linha 15 mostra a mania do Brasil no formato de amplicon, com uma banda de 750 pares de bases obtida com os conjuntos de iniciadores específicos de kDNA LB três e LB cinco. A varredura tipo tabuleiro de damas de L-P-C-R-A mostra os iniciadores gallus guns que foram utilizados após três ciclos de amplificação com aumento da temperatura em caminhada aninhada. A PCR é realizada com diferentes conjuntos de iniciadores de kDNA.O ciclo de alta stringência de Louis cria sítios para a ligação do primer e para o ciclo de alta stringência. Aumenta a especificidade dos produtos de amplificação. Os produtos de PCR com menor amplificação que hibridizaram com a sonda KA foram clonados e sequenciados comercialmente.A sequência mostra o kg NA no círculo azul intermediário, junção de recombinação por micro-homologia amarela e o galo ga GNA verde. O mapeamento do kg NA integrado ao genoma do frango é realizado por PCR com primers direcionados, técnica de PCR em tempo real (RTP-PCR). Os frangos adultos mutantes desenvolveram doença cardíaca de Chagas.Quanto mais os controles crescem, maior é a vida saudável. As galinhas com mutação no KDNA apresentam aumento da silhueta cardíaca em filmes de raio X. A necropsia mostra que os controles têm tamanho cardíaco reduzido.O Cajun, um frango mutante, apresenta hidropericárdio, hidro tox, e um coração grande. A cardiomegalia é semelhante à da doença de Chagas cardíaca. O coração de frango controlado pelo Moog mostra histologia normal.O kg de um frango mutante mostra um túnel formado no miocárdio por linfócitos citotóxicos que destróem as fibras cardíacas. As sequências de círculos aianos que se integram em regiões codificadoras de vários cromossomos são reveladas por uma PCR aninhada modificada que combina iniciadores de kg NA com conjuntos de iniciadores específicos de GNA do hospedeiro décadas. Frangos com mutação em GNA morrem de insuficiência cardíaca e apresentam cardiomegalia.A patologia por microscopia mostra miocardite semelhante à miocardite de Chagas, traduzindo comprometimento cardíaco. Em frangos com mutação no gene NA, trata-se de uma doença geneticamente determinada. Esta é a primeira vez que manifestações clínicas e patológicas da doença de Chagas são reproduzidas em um modelo limpo de sistema trans-reino.Obrigado.

parasite-induced-genetically-driven-autoimmune-chagas-heart-disease

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Este vídeo demonstra o procedimento de injeção intravenosa de células cancerígenas na vasculatura da membrana corioalantóide de galinha para gerar um modelo de metástase de câncer CAM. As células injetadas eventualmente formam colônias dispersas de células cancerígenas, permitindo o estudo da invasão e metástase do câncer.

Injeção intravenosa de células cancerígenas na vasculatura da membrana corioalantóide de galinha: um procedimento para estabelecer o modelo de câncer de membrana corioalantóide para estudar a invasão e metástase do câncer

Neste protocolo, fluorescente etiquetadas T. cruzi foram injetados em larvas de peixe-zebra transparente, e motilidade do parasita foi observada na vivo usando microscopia de fluorescência folha de luz.

Estabelecimento de Zebrafish Larval como um modelo Animal para investigar Trypanosoma cruzi motilidade In Vivo

O Trypanosoma cruzi agente da doença de Chagas produz duradouro infecções assintomáticas que se desenvolvem abruptamente em patologia clinicamente reconhecida. O protocolo de pesquisa a seguir descreve um curto prazo baseada na família epidemiológico estudo para desvendar a T. cruzi infecção transmitida sexualmente da mãe à progênie.

Transmissão sexual de tripanosomas americanas de machos e fêmeas para companheiros de ingênua

Carcinoma de células renais metastáticas claras é uma doença sem um modelo animal abrangente para investigação pré-clínica completa. Este protocolo ilustra dois novos modelos animais para a doença: o modelo de camundongo sutópicamente implantado e o modelo de membrana chorioallantoico de frango, ambos demonstram metástase pulmonar semelhante a casos clínicos.

Comparando modelo de carcinoma de célula séuológica metastática clara estabelecida no rim do rato e na membrana chorioallantoico de frango

Aqui, fornecemos um método para alcançar a transfecção estável de parasitas de frango Eimeria por nucleofecting esporozoitas ou merozoitas de segunda geração. Parasitas eimerianos geneticamente modificados expressando genes antigênicos heterologous poderiam ser usados como veículos de entrega de vacinas.

Nucleofection e In Vivo Propagação de Parasitas de Eimeria de Frango

Apresentamos o modelo de membrana chorioallantoico de frango como uma alternativa, transplantável, no modelo vivo para o enenxerto de linhas de células cancerígenas ginecológicas e urológicas e tumores derivados do paciente.

Utilização da membrana chorioallantoico de frango em modelo vivo para estudar cânceres ginecológicos e urológicos

Embriões de frango, como modelo de desenvolvimento clássico, são usados em nosso laboratório para avaliar cardiotoxicções de desenvolvimento após a exposição a vários contaminantes ambientais. Métodos de exposição e métodos de avaliação morfológica/funcional estabelecidos estão descritos neste manuscrito.

Usando embrião de frango como ferramenta poderosa na avaliação de cardiotoxi cidades do desenvolvimento

Descrevemos um ensaio colorimétrico de alta produtividade medindo β-galactosidase atividade em três estágios do ciclo de vida de Trypanosoma cruzi, o agente causador da doença de Chagas. Este ensaio pode ser usado para identificar compostos trypanocidas de forma fácil, rápida e reprodutível.

In vitro Triagem de drogas contra todas as etapas do ciclo de vida de Trypanosoma cruzi usando parasitas expressando β-galactosidase

O protocolo aqui fornecido descreve as etapas detalhadas para a realização de estudos de eficácia de medicamentos em um modelo bioluminescente da infecção por Trypanosoma cruzi , com foco na aquisição, análise e interpretação de dados. Procedimentos de solução de problemas e controle de qualidade para minimizar problemas técnicos também são fornecidos.

Desmistificando imagens de bioluminescência in vivo de um modelo de camundongo com doença de Chagas para estudos de eficácia de medicamentos

Este vídeo mostra como induzir hipofisite auto-imunes em camundongos SJL e como avaliar sua gravidade pela histopatologia.

Indução de hipofisite Auto-Imune Experimental em Ratos SJL

Aprenda a integração do kDNA de Trypanosoma cruzi no genoma de galinhas e o desenvolvimento de doença cardíaca semelhante à Chagas. Este modelo revela mecanismos genéticos da patogênese parasitária.

Parasite Induzida geneticamente guiadas Doenças Auto-Imunes do Coração Chagas no Modelo de Frango

Explorar mais vídeos