Name: Detecção de aspergilose pulmonar invasiva em pacientes com doença hematológica maligna usando fluxo lateral Tecnologia (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-22T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 1 s
Description: Aprenda a detectar aspergilose pulmonar invasiva usando dispositivo de fluxo lateral em amostras de soro e lavado broncoalveolar. Este método rápido oferece diagnóstico em 15 minutos para pacientes com doenças hematológicas malignas.

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Financiamento para o Dr. Thornton da Pfizer Limited é reconhecido agradecimento.

1. Recolha, Armazenamento e Preparação de soro e fluidos de lavagem broncoalveolar <ol><li> Recolher o soro de amostras de sangue não tratados, permitindo que o sangue coagular a 4 ° C, e soro de armazenamento, conforme alíquotas a -20 ° C antes de usar. Fluidos lavado broncoalveolar (BAL) deve também ser armazenados como alíquotas a -20 ° C. Nota: Armazenamento de soro e LBA como alíquotas limita o potencial de degradação do antigénio alvo por repetidos de congelamento-descongelamento das amostras durante a repetição do teste. </li><li> As amostras descongelamento e misturar o amostras de soro e BAL completamente por vórtice e centrifugação durante 1 min a 14.000 rpm. </li><li> Para os testes de rotina de amostras de soro humano, diluir a 1:01 de soro (v / v) com meio de cultura de tecidos (TCM). TCM consiste em meio RPMI-1640, 10% (v / v) de soro de vitelo fetal, 1% (v / v) de solução de L-glutamina 200mM, e azida de sódio (0,02% w / v) como conservante. O meio é preparado antecipadamente e podem ser armazenadas a 4 ° C durante vários meses. Aplicar 100 uL da diluted soro para o LFD. </li><li> Para humanos fluidos BAL, e para fluidos BAL de modelos animais, aplicam-se 100 uL de amostra pura para o LFD, sem pré-tratamento. </li><li> Para soro a partir de modelos animais, diluir soro 1:2 (v / v) com tampão fosfato salino contendo 4% (w / v) de EDTA, o calor para 3min num banho de água a ferver, de centrifugação durante 5 min a 14.000 rpm, e aplicar 100 ul de sobrenadante limpo para o dispositivo de LFD. </li></ol> 2. Aplicação de Soro e BAL para o dispositivo de fluxo lateral- <ol><li> Armazenar os dispositivos de fluxo lateral, à temperatura ambiente (23 ° C). A esta temperatura, os dispositivos são estáveis ​​durante 12 meses. Remova os dispositivos de suas bolsas e coloque sobre uma superfície plana. </li><li> Usando uma ponta de pipeta estéril, aplicar 100 uL de pré-tratado amostra de soro ou puro BAL para a porta de libertação do dispositivo. </li><li> Permitir que o ensaio para executar durante 15 min à temperatura ambiente, momento em que os resultados dos testes devem ser registados. Nota: No segundo o fluido vai ser sien migrar por acção capilar ao longo da membrana de nitrocelulose na janela de observação. </li></ol> 3. Gravação e Interpretação dos Resultados LFD <ol><li> O LFD consiste de uma linha de controlo interno (indicado pela letra C na caixa de plástico) e uma linha de teste (indicado pela letra T). A linha de controlo deve aparecer sempre independentemente do antigénio Aspergillus na amostra de soro ou BAL. Isso mostra que o ensaio foi executado corretamente. </li><li> Se o antigénio Aspergillus está presente na amostra de soro ou BAL, a linha de teste também aparece dentro 15min de aplicação da amostra. Devido à intensidade da linha de teste é proporcional à quantidade de Aspergillus presente antigénio na amostra, a linha de teste pode aparecer como um positivo fraco (+), um positivo moderado (+ +) ou como uma forte positivo (+ + +) . No entanto, qualquer linha de teste positivo, independentemente da intensidade, que indicam a presença de Aspergillus antigénio na amostra. Em diaausência de antigénio e Aspergillus, nenhuma linha de teste irá aparecer, eo resultado é registado como negativo (-). </li></ol> 4. Os resultados representativos Os exemplos representativos de negativas, fracamente positivo, moderada positivos, e forte positivos LFD com amostras de BAL e soro são mostrados na Figura 1. Resultados de testes positivos de antígeno-LFD (fraca e forte) ou negativo testes LFD utilizando fluidos de BAL de leucemia mielóide aguda (LMA) dos pacientes diagnosticados de acordo com critérios da EORTC / MSG de diagnóstico são mostrados na Tabela 1. Incluem-se nesta tabela são os correspondentes clínicos e micológicos (galactomanano e cultura) de dados e resultados de um teste de PCR Aspergillus específico desenvolvido no Hospital St. Bartholomews 8, para cada paciente. O diagnóstico da doença foi baseada em fatores do hospedeiro (neutropenia, uso prolongado de corticosteróides, o tratamento com outros reconhecidos de células T immunosuppressants), os critérios clínicos e GM positividade para BAL (aqui definida como um índice GM&gt; 0,8 valor). Sob os 2002 EORTC / MSG 10 diretrizes, os pacientes 12, 13 e 16 foram diagnosticados com IA &quot;possível&quot; com base em fatores do hospedeiro e os critérios clínicos ou positividade GM. De acordo com a revista (2008) EORTC / MSG diretrizes 2, fatores do hospedeiro e positividade GM isoladamente ou fatores do hospedeiro e os critérios clínicos si só, não indicam &quot;possível&quot; infecção fúngica invasiva, a menos que acompanhado de prova a partir de dados clínicos e micológicos, respectivamente. Paciente 6 foi diagnosticada com IA &quot;provável&quot; em ambos os 2002 e 2008, porque as orientações de fatores do hospedeiro, maiores e menores características clínicas e positividade GM. Note, que, embora nem o LFD nem PCR estão incluídas nas diretrizes do EORTC / MSG, há um consenso forte entre os dois ensaios eo teste de galactomanano comercial indicando a presença de Aspergillus antígeno e ácido nucléico na amostra BAL<html> s de pacientes 6 e 12. Resultados adicionais de ensaios que demonstram a eficácia dos ensaios LFD e PCR no diagnóstico IPA podem ser encontrados em Johnson et al 8. <img alt="A Figura 1" src="/files/ftp_upload/3721/3721fig1.jpg" /> Figura 1. Negativo (linha de controlo apenas) e positivo (de controlo e da linha de teste) os resultados dos testes LFD usando soro e BAL. As intensidades das reacções da linha de teste são proporcionais às concentrações do antigénio alvo nas amostras de soro e BAL. Reacções tipicamente variar de fraco (+) através moderada (+ +) a forte (+ + +). Independentemente da intensidade da linha de teste, todos os três séricos reacções positivas indicaria doença aspergilose invasiva pulmonar devido à presença de circulação de antigénio Aspergillus na corrente sanguínea. Positivos reacções BAL (fraco, moderado ou forte) indicaria a germinação de esporos e desenvolvimento de hifas potencialmente patogénicos nos pulmões. pdflinebreak &quot;&gt; <table border="1"><tbody><tr><td> Nenhum paciente. </td><td> Patiinformações ent </td><td> Os critérios clínicos 1 </td><td> LBA cultura 2 </td><td> GM EIA índice 3 </td><td> EORTC / MSG (2002) 4 </td><td> EORTC / MSG (2008) 5 </td><td> Aspergillus resultado da PCR </td><td> Resultado LFD </td></tr><tr><td> 6 </td><td> - </td><td> Principais sinais de TC (nódulo e halo) e um menor </td><td> Negativo </td><td> 0,9 (positivo) </td><td> Provável </td><td> Provável </td><td> Positivo </td><td> Fracamente positivo (+) </td></tr><tr><td> 12 </td><td> Presume infecção fúngica anterior </td><td> Não maior, uma menor </td><td> Candida glabrata </td><td> 6,43 (positivo forte) </td><td> Possível </td><td> Nenhum </td><td> Positivo </td><td> Strong positivo (+ + +) </td></tr><tr><td> 13 </td><td> Staph coagulase-negativoylococcus e E. coli no sangue </td><td> Não maior, menor dois </td><td> Negativo </td><td> 0,25 (negativo) </td><td> Possível </td><td> Nenhum </td><td> Negativo </td><td> Negativo (-) </td></tr><tr><td> 16 </td><td> Infecção no peito </td><td> 3 critérios menores, incluindo derrame plural novo infiltrado mais </td><td> Negativo </td><td> 0,16 (negativo) </td><td> Possível </td><td> Nenhum </td><td> Negativo </td><td> Negativo (-) </td></tr></tbody></table> 1 Nódulos ou halos em uma tomografia computadorizada é sugestivo de infecção fúngica 2 Cândida glabrata no fluido BAL seria considerado como um contaminante como é o segundo de levedura mais comum isolado como parte de flora normal humanos 9 3 Um índice de&gt; 0,8 no teste de EIA GM do LBA é indicativo de infecção por Aspergillus 4 Com base nas 2002 EORTC / MSG critérios diagnósticos para &#39;pose &#39;,&#39; provável &#39;ou&#39; comprovada &#39;doença fúngica 10 5 Com base na revista (2008) EORTC / MSG critérios diagnósticos para &#39;possível&#39;, &#39;provável&#39; ou &#39;comprovada&#39; doença fúngica 2 Tabela 1. Resultados dos testes de LFD de amostras de LBA de pacientes com leucemia mielóide aguda com provável IPA e controle de pacientes com LMA (sem evidência de infecção), e EORTC / MSG diagnóstico de infecção.

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</ol>

Não temos nada a divulgar.

A identificação definitiva do IPA só pode verdadeiramente ser alcançado pelo isolamento do agente etiológico a partir de amostras de biópsia, mas a recuperação de amostras adequadas muitas vezes não é possível em pacientes muito doentes e Aspergillus é raramente recuperável a partir de sangue. Enquanto grandes avanços foram feitos no uso de tomografia computadorizada de varredura do peito no diagnóstico IPA, características que são sugestivos do IPA pulmonar, como o &quot;halo&quot; ou &quot;ar crescentes&quot; sinais são ou transitória ou pode ser atribuído a artefatos respiratórios ou outras infecções fúngicas 11,12. Tais dados são, portanto, suplementado com técnicas serológicas que visam identificar moléculas de assinatura (GM e β-glucano) a partir de fungos que são em circulação no soro do paciente ou que estão presentes nos fluidos BAL, expectoração ou amostras de urina 13. Embora estes testes exibir sensibilidade satisfatória, falta-lhes a especificidade suficiente ou se sofre de interferência sob certas condições 1,6 </sup&gt;. O teste para a detecção LFD IPA aqui apresentado permite o diagnóstico o «ponto-de-cuidado &#39;de IPA e exploits tecnologia que tem sido utilizada até à data em testes para a detecção de vírus, bactérias, parasitas e toxinas 14-19 e, mais notoriamente, para a gravidez em casa testa introduzido pela primeira vez por Unipath em 1988. No LFD Aspergillus descrito aqui, o Aspergillus específico MAb JF5 é imobilizado a uma zona de captação (a linha de teste) em uma membrana de nitrocelulose poroso. Imunoglobulina anti-rato imobilizado para a membrana numa zona separada serviu como um controlo interno (linha de controlo). Por adição de soro ou fluido BAL para a porta de libertação, o MAb conjugado de ouro coloidal JF5-no bloco de libertação se liga ao antigénio alvo e do complexo, em seguida, passa ao longo da membrana porosa por acção capilar. MAb JF5 imobilizado na zona de captura liga-se ao JF5-coloidal complexo ouro-antigénio, resultando em uma linha de teste vermelho. Qualquer desacoplado ouro coloidal-JF5conjugado liga-se ao controlo interno, indicando que o ensaio foi executado correctamente. Isso resulta em uma linha de controle vermelho. O teste é rápido, tendo apenas 15 minutos para realizar, é barata em comparação com os testes de soro e BAL baseado em GM e β-glucano de detecção, e não requer equipamentos caros ou instalações laboratoriais extensas para ser executado. Além disso, o MAb JF5 não reagem de forma cruzada com as drogas ou contaminantes que foram mostrados para causar falso-positivo de reacção na GM e β-glucano testes 1,4,6. Uma vantagem adicional importante sobre os actuais testes de diagnóstico é a capacidade para detectar a actividade LFDs que é indicativo de crescimento invasivo de espécies de Aspergillus. Um passo essencial no processo de LFD é a necessidade de ler os resultados 15 minutos após a aplicação da amostra de soro ou LBA para o dispositivo. O teste não deve ser deixada para mais de 15 min antes de gravar os resultados, como este viés de resultado pode interpretatipor diante. A fraca reação não será reforçada mediante o alargamento do período de incubação. O tratamento térmico de soro a partir de modelos animais de infecção foi encontrada para melhorar a sensibilidade do ensaio. Uma limitação do teste é que ele é qualitativa, e conta com o operador para fazer uma avaliação subjetiva de positividade. A intensidade da linha de teste varia de acordo com o conteúdo de antigénios das amostras de soro e BAL (Figura 1). No entanto, qualquer reacção positiva (determinada por comparação com negativos conhecidos) indica a presença de Aspergillus antigénio e, por conseguinte, a infecção. Para limitar a subjetividade de ensaios LFD, dispositivos portáteis estão disponíveis, que possibilita a quantificação das intensidades de linhas LFD teste e permitir o estabelecimento de limiares para a detecção de antígenos 20. Desenvolvimentos futuros do LFD incluem a sua comercialização e no desenvolvimento de um LFD multiplex, que permite a detecção simultânea de outros agentes patogénicos fúngicos invasivasutilizando os AcM altamente específicos 3.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários </td></tr><tr><td> Aspergillus LFD </td><td> Universidade de Exeter </td><td></td><td> Disponível a partir do autor correspondente, mediante pedido </td></tr><tr><td> RPMI-1640 </td><td> Sigma </td><td> R0883 </td><td></td></tr><tr><td> L-Glutamina </td><td> Sigma </td><td> G7513 </td><td></td></tr><tr><td> Soro fetal de vitelo </td><td> Biosera </td><td> S9100 </td><td> Outras fontes de soro de vitela fetal pode ser usado na preparação de TCM </td></tr><tr><td> EDTA </td><td> Fisher Scientific </td><td> BPE120-1 </td><td></td></tr></tbody></table>

detecção de aspergilose pulmonar invasiva em pacientes com doença hematológica maligna usando fluxo lateral tecnologia

Detection of Invasive Pulmonary Aspergillosis in Haematological Malignancy Patients by using Lateral-flow Technology

A aspergilose pulmonar invasiva (IPA) é uma das principais causas de morbidade e mortalidade em pacientes com doença hematológica maligna e tronco hematopoéticas receptores de transplantes de células 1. Detecção de IPA representa um desafio formidável de diagnóstico e, na ausência de um &#39;padrão de ouro&#39;, depende de uma combinação de dados clínicos e de microbiologia e histopatologia sempre que possível. Diagnóstico do IPA devem estar de acordo com a Organização Européia para Pesquisa e Tratamento do Câncer e do Instituto Nacional de Alergia e Doenças Infecciosas Grupo de Estudos de Micologia consenso (EORTC / MSG) definir &quot;comprovada&quot;, &quot;provável&quot;, e &quot;possível&quot; doenças invasivas por fungos 2 . Actualmente, não à base de ácido nucleico testes foram externamente validado para a detecção de IPA e para que a reacção em cadeia da polimerase (PCR) não está incluído nos actuais critérios da EORTC / MSG de diagnóstico. Identificação de Aspergillus em cortes histológicos é problemática devido à semedades nas morfologias das hifas com outras invasoras fungos 3, e identificação comprovada exige o isolamento do agente etiológico em cultura pura. Cultura abordagens dependem da disponibilidade de amostras de biópsia, mas estes nem sempre são acessíveis em pacientes doentes, e nem sempre produzir propágulos viáveis ​​para a cultura quando obtido. Uma característica importante na patogênese de Aspergillus é angio-invasão, uma característica que proporciona oportunidades para controlar o fungo imunologicamente por meio de testes que detectam assinaturas moléculas antigénicas características no soro e lavado broncoalveolar (LBA) líquidos. Isto conduziu ao desenvolvimento do ensaio imunoenzimático Platelia (GM-EIA) que detecta Aspergillus galactomanano e um &#39;pan-fúngica&#39; ensaio (ensaio Fungitell) que detecta o componente da parede celular conservada fúngica (1 → 3)-β-D- glucano, mas não nas Mucorales que não possuem este componente em suas paredes celulares 1,4. Éprocessa em torno da precisão destes testes 1,4-6 levou ao desenvolvimento recente da próxima geração de anticorpo monoclonal (MAb)-ensaios baseados que detectam marcadores substitutos da infecção 1,5. Thornton 5 recentemente descrita a geração de um MAb Aspergillus-específico (JF5) usando hibridoma tecnologia ea sua utilização para desenvolver um imuno-cromatografia dispositivo de fluxo lateral (LFD) para o ponto-de-cuidado (POC) diagnóstico de IPA. Uma grande vantagem do LFD é a sua capacidade para detectar a actividade desde MAb JF5 se liga a um antigénio glicoproteina extracelular que é secretado durante o crescimento do fungo activo apenas 5. Esta é uma consideração importante quando se utiliza fluidos tais como BAL pulmão para o diagnóstico de IPA desde esporos de Aspergillus são um componente comum de ar inalado. A utilidade do dispositivo para o diagnóstico de IPA foi demonstrada utilizando um modelo animal de infecção, em que o LFD exibido sensibilidade melhorada e specificity em comparação com o GM Platelia e Fungitell (1 → 3)-glucano β-D-ensaios 7. Aqui, apresentamos um procedimento simples LFD para detectar o antígeno Aspergillus em humanos soro e fluidos BAL. Sua velocidade e precisão fornece um romance adjunto teste point-of-care para diagnóstico do IPA em pacientes com doença hematológica maligna.

A rápida e precisa de teste ponto-of-care para a aspergilose pulmonar invasiva é apresentado. Leva vantagem de fluxo lateral-tecnologia, utilizando um anticorpo monoclonal específico que se liga a um<em&gt; Aspergillus</emAntígeno&gt; secretado durante infecções pulmonares. O ensaio é compatível com soro e lavado brochoalveolar e representa um teste adjuvante novo para o diagnóstico da doença.

Detecção de aspergilose pulmonar invasiva em pacientes com doença hematológica maligna usando fluxo lateral Tecnologia

A aspergilose pulmonar invasiva (API) é uma das principais causas de morbidade e mortalidade em pacientes com neoplasias hematológicas e transplantados de células-tronco hematopoéticas...

O objetivo geral deste procedimento é demonstrar o uso de um dispositivo de fluxo lateral para a detecção rápida do antígeno diagnóstico de aspergillus em soro humano e fluidos BAL. Isso é realizado primeiramente aplicando a amostra de soro ou BAL na porta de liberação do dispositivo de fluxo lateral. O segundo passo é permitir que a solução migre ao longo da membrana.O próximo passo é determinar se o teste é válido mediante a análise da linha de controle interno. O passo final é interpretar o resultado do teste examinando a linha de teste. Em última instância, o dispositivo de fluxo lateral é utilizado para detectar a presença do antígeno diagnóstico de aspergillus em soro ou fluidos de lavado broncoalveolar (BAL).O teste imunocromatográfico para aspergillus pode ser usado como um teste complementar para o diagnóstico da aspergilose pulmonar invasiva. A principal vantagem dessa técnica em relação aos métodos existentes, como o ensaio imunoenzimático para galactomanana do aspergillus, o ensaio para beta-glucano panfúngico, fundal e o teste de PCR para aspergillus, é que se trata de um teste diagnóstico rápido, realizado no local de atendimento, que exige instalações laboratoriais mínimas e pouco treinamento. Embora o teste imunocromatográfico tenha sido desenvolvido para a detecção de espécies de aspergillus, a tecnologia de fluxo lateral também pode ser aplicada na detecção de outros patógenos infecciosos, como espécies de cetosporium, fusarium e riser.Ao incorporar anticorpos monoclonais específicos para esses organismos, a demonstração visual deste método é fundamental. Como a interpretação dos resultados do teste de fluxo lateral exige familiarização com o formato do ensaio, para coletar soro de amostras de sangue não tratadas, deixe o sangue coagular a quatro graus Celsius. O soro e os lavados broncoalveolares, ou fluidos BAL, devem ser armazenados em alíquotas a menos 20 graus Celsius antes do uso; o armazenamento em alíquotas limita o potencial de degradação do antígeno-alvo por congelamentos e descongelamentos repetidos das amostras durante testes repetidos. Para preparar amostras de soro e BAL para teste, descongele as amostras à temperatura ambiente e, em seguida, mantenha-as sob gelo. Misture bem por vortex e, depois, centrifugue por um minuto a 14.000 RPM. Para testes de rotina de amostras humanas, dilua o soro na proporção de um para um com meio de cultura de tecidos; alternativamente, e para dissociar o antígeno-alvo dos complexos imunes séricos, dilua o soro na proporção de um para dois com PBS contendo 4% de EDTA, aqueça por três minutos em banho-maria em ebulição e centrifugue por cinco minutos a 14.000 RPM.Os fluidos de lavado broncoalveolar humanos não requerem pré-tratamentos. Uma amostra de lavado broncoalveolar foi descongelada, vortexada e centrifugada, resultando em uma amostra limpa que pode ser aplicada diretamente no dispositivo de fluxo lateral. Para testes, os dispositivos de fluxo lateral ou LFD são armazenados à temperatura ambiente ou 23 graus Celsius, temperatura na qual permanecem estáveis por 12 meses.Para iniciar o ensaio, retire os dispositivos de suas embalagens e coloque-os sobre uma superfície nivelada. Usando uma ponteira estéril, aplique 100 microlitros de soro pré-tratado na porta de liberação do dispositivo em segundos. O fluido deve migrar por ação capilar ao longo da membrana de celulose nítrica na janela de observação.Da mesma forma, aplique 100 microlitros de uma amostra de LBA pura à porta de liberação do dispositivo. Deixe o ensaio ocorrer por 15 minutos à temperatura ambiente, momento em que os resultados do teste devem ser registrados. O teste não deve permanecer por mais de 15 minutos antes do registro dos resultados.Como isso pode causar viés na interpretação dos resultados, uma reação fraca não será potencializada pelo prolongamento do período de incubação. O LFD consiste em uma linha de controle interno indicada pela letra C na carcaça de plástico e uma linha de teste indicada pela letra T. A linha de controle deve sempre aparecer, independentemente da presença do antígeno de aspergillus na amostra de soro ou BAL. Isso indica que o ensaio foi realizado corretamente caso o antígeno de aspergillus esteja presente na amostra de soro ou BAL.A linha de teste também aparecerá dentro de 15 minutos após a aplicação da amostra. As intensidades das reações de teste para a doença de Lyme são proporcionais às concentrações do antígeno-alvo nas amostras de soro e VAL. O aspecto mais desafiador deste procedimento é a interpretação dos resultados do teste.Os resultados do LFD devem ser lidos após 15 minutos e o resultado do teste comparado ao exemplo representativo mostrado aqui. Esta figura apresenta exemplos representativos de resultados LFD fracos positivos, moderadamente positivos e fortemente positivos com amostras de LBA e soro. Qualquer linha de teste positiva na amostra de soro, independentemente da intensidade, indicaria aspergilose invasiva ou doença IPA devido à presença de antígeno de Aspergillus circulante na corrente sanguínea. Reações positivas no LBA, independentemente da intensidade, indicariam germinação de esporos e desenvolvimento de hifas potencialmente patogênicas nos pulmões.Na ausência de antígeno de aspergillus, nenhuma linha de teste aparecerá e o resultado é registrado como negativo. Esta tabela mostra os resultados dos testes de LFD utilizando fluidos de lavado broncoalveolar de pacientes com leucemia mieloide aguda ou com LMA diagnosticados de acordo com os critérios diagnósticos do Grupo de Estudo da Organização Europeia para Pesquisa e Tratamento do Câncer e do Instituto Nacional de Alergia e Doenças Infecciosas. Incluídos nesta tabela estão os dados clínicos e psicológicos correspondentes, bem como os resultados de um teste PCR específico para ASPERIA para cada paciente.De acordo com as diretrizes E-O-R-T-C-M-S-G de 2002, os pacientes 12, 13 e 16 foram diagnosticados com IPA possível com base em fatores do hospedeiro e critérios clínicos ou positividade para GM. De acordo com as diretrizes E-O-R-T-C-M-S-G revisadas de 2008, os fatores do hospedeiro e a positividade para GM isoladamente, ou os fatores do hospedeiro e os critérios clínicos isoladamente, não indicariam infecção fúngica invasiva possível, a menos que acompanhados por evidências de apoio provenientes dos dados clínicos e da micologia, respectivamente. O paciente seis foi diagnosticado com IPA provável segundo ambas as diretrizes de 2002 e 2008 devido aos fatores do hospedeiro, características clínicas maiores e menores e positividade para GM.Por fim, observe que, embora nenhum dos ensaios, o de LFD nem o de PCR, esteja atualmente incluído nas diretrizes da E-O-R-T-C-M-S-G para amostras de LBA dos pacientes seis e doze, há forte concordância entre os dois ensaios e o teste comercial de galactomanana, indicando a presença de antígeno e ácido nucleico de Aspergillus após este procedimento. Outros métodos, como o ensaio imunoenzimático de galactomanana pela técnica de Pelle, o teste de beta-glucano fúngico ou testes de PCR para Aspergillus, podem ser realizados em paralelo para confirmar doença fúngica invasiva. Não se esqueça de que trabalhar com soro sanguíneo humano e fluidos de LBA pode ser extremamente perigoso, e os operadores do equipamento devem sempre estar vacinados contra doenças como hepatite B e tuberculose.

detection-invasive-pulmonary-aspergillosis-haematological-malignancy

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

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Alta capacidade método de detecção de vírus Influenza

Aqui, descrevemos um protocolo para avaliar a atividade antifúngica de células imunes humanas primárias em tempo real usando fluorescente Aspergillus repórter conídios em conjunto com microscopia de vídeo ao vivo de células e citometria de fluxo. Dados gerados fornecer informações sobre hospedeiras cell- interacções Aspergillus tais como actividade fungicida, a fagocitose, a migração de células e inibição do crescimento de fungos.

Imagens ao vivo de antifúngicos Atividade por neutrófilos humanos primários e monócitos em resposta à<em&gt; A. fumigatus</em

Aqui descrevemos um protocolo para determinar a carga fúngica pulmonar em camundongos com aspergilose invasiva pela quantificação de prata de methanamine modificada de Gomori coloração em cortes histológicos. Uso desse método resultou em resultados comparáveis com menos animais comparados a avaliação da carga fúngica por PCR quantitativo de DNA fúngico de pulmão.

Histológica quantificação para determinar o pulmão carga fúngica em aspergilose Experimental

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