Métodos de auto-administração intravenosa em um modelo de camundongo

Olá, meu nome é Elizabeth Kotick e estou aqui do laboratório da Dra. Katherine Gill na unidade de vícios do Centro de Saúde da Universidade McGill. Hoje vou mostrar como realizar a cirurgia de cateterismo necessária para a realização de estudos de autoadministração intravenosa. Vou mostrar como inserir o cateter, bem como algumas dicas para manter a permeabilidade do cateter.

Durante as sessões de autoadministração intravenosa de nicotina, os animais são conectados ao Tai em tubos de plástico e as infusões de nicotina são administradas pelas bombas de infusão anexadas. Caixas operantes foram compradas de associados médicos. Cada caixa está equipada com duas alavancas de mouse ultrassensíveis.

Existem alguns itens que precisam ser preparados antes da cirurgia para inserir o cateter na veia. Uma agulha de calibre 20 precisa ser adaptada para deslizar o tubo para baixo na veia. Raspe cerca de dois centímetros da parte superior da haste da agulha, criando um canal que será usado para guiar o tubo do cateter na veia.

Em seguida, prepare as seringas para lavar e verificar o cateter. 12 centímetros de tubo são presos em uma extremidade à agulha de calibre 26 da seringa, enquanto a outra extremidade é esticada sobre uma agulha de calibre 23. Para facilitar a fixação do tubo na cânula do cateter, você precisará de duas seringas como esta, preenchidas com a solução de T carcina heparinizada e a outra com solução salina.

Por fim, prepare a tampa da cânula do cateter. A cânula do cateter precisa ser tampada para evitar a entrada de detritos. Essas tampas são feitas esticando tubos de plástico sobre agulhas de calibre 23

O tubo é cortado a um centímetro da ponta da agulha e a extremidade aberta é derretida Para selar o tubo, a solução salina é empurrada através da agulha para garantir que não haja vazamentos nas tampas. Cateteres de camundongo foram obtidos de Cam Cs no Reino Unido. Corte o excesso de tubo do cateter de forma que haja 1,2 centímetros da extremidade do bulbo do cateter.

Em seguida, conecte a seringa contendo solução salina à cânula de metal externa do cateter e lave para verificar se há vazamentos. Os Mis são anestesiados com gás flúor isof misturado com oxigênio e são mantidos sob anestesia durante a cirurgia. Usando um tubo de respiração, os níveis de oxigênio e flúor são definidos com base no peso corporal do animal e são ajustados conforme necessário durante a cirurgia, certifique-se de que o animal esteja devidamente anestesiado beliscando as patas traseiras com o fórceps e monitore o camundongo durante a cirurgia quanto a desconforto respiratório e profundidade da anestesia.

Como a cirurgia dura entre 20 e 30 minutos, aplique um lubrificante ocular em ambos os olhos. O mouse é raspado antes da cirurgia. Prepare um espaço para a base do cateter nas costas do animal.

Puxe suavemente a pele das costas do animal e faça uma pequena incisão longitudinal no meio da escápula com cerca de dois centímetros de comprimento. Começando no meio das costas e estendendo-se até logo abaixo do pescoço. Separe o tecido conjuntivo para abrir espaço para a base do cateter e aplique solução salina na incisão.

Puxe suavemente a pele de ambos os lados da incisão e vire o animal. A veia tegular direita será encontrada superficialmente sob a pele do pescoço e pode ser exposta fazendo uma incisão superficial em S. Faça um corte diagonal de cerca de um a dois centímetros de comprimento, estendendo-se ao redor da clavícula direita, subindo em direção à mandíbula do animal.

O tubo da base do cateter precisa ser trazido através da incisão ventral no pescoço para ser acessível para inserção na veia. Guie a pinça sob a pele dos ombros e rompa o tecido conjuntivo. Para alcançar a incisão traseira, puxe o tubo através da pele até a abertura ventral ao redor do pescoço do animal.

Segure a extremidade do tubo com grampos de artéria e deixe-o preso pelo lado direito do animal. Aplique solução salina na incisão, isole a veia jugular direita. Afaste muito suavemente qualquer tecido conjuntivo e adiposo que possa estar obstruindo sua visão e localize a veia.

Levante suavemente a veia ao redor do topo e use a pinça curva para separar o tecido adiposo e o tecido conjuntivo ao redor e sob a veia. Coloque a pinça curva sob a veia e abra-a com a mão livre. Passe uma barra de plástico estéril sob a veia.

Quando a veia estiver elevada, remova a gordura apenas o suficiente para obter uma visão clara e desobstruída da veia. Periodicamente goteje soro fisiológico na veia exposta para mantê-la molhada. Prepare nós de sutura ao redor da veia para poder prender o tubo do cateter no lugar, uma vez inserido no local jugular.

Suturas embaixo da veia em ambas as extremidades e fazem um único nó aberto muito solto em cada extremidade. Passe o tubo do cateter pelo nó superior e enrole-o sobre o fio de sutura até o resto sobre o ombro direito. Empurre a solução salina através do cateter para pesar o tubo para baixo para inserir o tubo do cateter na veia jugular.

A agulha de calibre 20 modificada é usada para perfurar a veia, molhar a veia e a agulha de inserção com solução salina para reduzir o atrito durante a inserção, puxar suavemente a barra de plástico e inserir a agulha mais perto da parte inferior da veia. Apenas o suficiente para que meio centímetro da agulha esteja dentro. Deslize o tubo do cateter pela agulha e na veia.

Não deve haver resistência. A resistência indicaria que você está no tecido conjuntivo. Para ter certeza de que você está dentro da veia, tente puxar a seringa do cateter para ver se consegue tirar sangue.

Assim que o tubo estiver no lugar, remova a agulha e empurre o bulbo do cateter até o ponto de inserção. Amarre o nó inferior e certifique-se de que o tubo do cateter esteja nivelado com a barra antes de amarrar o segundo nó logo acima do bulbo. Isso prenderá o cateter no lugar.

Remova a barra e faça um segundo nó em cada extremidade. Coloque o tubo do cateter e as roscas de sutura sob a pele antes da sutura. Use a pinça de artéria para guiar a agulha de sutura através da pele e feche a incisão.

O número de pontos varia de acordo com o Tamanho da incisão Com o animal de bruços. Posicione a base do cateter nas costas do animal. Aplique solução salina na incisão e deslize a base do cateter sob a pele.

Certifique-se de que o tubo esteja minimamente enrolado e sob a base para minimizar as chances de ser perfurado. Costure a pele ao redor da base do cateter. O número de pontos dependerá do tamanho da incisão.

Normalmente, três a quatro pontos são suficientes. Certifique-se de que o sangue ainda pode ser retirado do cateter. Por fim, lave o cateter com a solução de teína heparinizada para evitar a formação de infecções e coágulos sanguíneos.

Afrouxe o tubo conectado à cânula do cateter. Em seguida, remova o tubo salino e substitua-o rapidamente por um tubo da seringa contendo a solução de T Carin heparinizada. Lave o cateter com 0,03 a 0,05 ccs de solução.

Novamente, afrouxe o tubo conectado à cânula. Segure a tampa do cateter com a pinça e, uma vez com movimento, remova o tubo da cânula e substitua-o pela tampa do cateter. Esta etapa deve ser feita rapidamente para evitar que o sangue suba.

Aparafuse a tampa branca do cateter, certificando-se de que a tampa esteja segura sem perfurar a ponta da cânula. Dê ao camundongo injeções subcutâneas de analgésico e antibiótico. Injete o analgésico cetoprofeno de um lado na dose de cinco miligramas por quilograma e o antibiótico amicacina do outro lado na dose de 10 miligramas por quilograma.

Após interromper a anestesia, permita que o camundongo se recupere em uma gaiola limpa com fácil acesso a comida e água. Dados confiáveis de autoadministração intravenosa podem ser obtidos seguindo as técnicas apresentadas neste vídeo. No entanto, é importante manter a permeabilidade do cateter.

Isso é conseguido através da colocação cuidadosa do cateter no átrio direito, lavagem diária do cateter antes e depois das sessões de ópera e certificando-se de que a cânula do cateter esteja constantemente tampada para evitar a entrada de detritos.