Pressão Ventricular Esquerda de medição no final de Ratos embrionárias e Neonatal

O objetivo geral deste procedimento é medir a pressão ventricular esquerda ou pressão do VE em camundongos no estágio embrionário tardio e neonatal. Primeiro, prepara-se o equipamento. Uma agulha conectada a um transdutor de pressão deve ser alinhada com uma sonda de ultrassom.

Em seguida, um camundongo é preparado e seu VE é imageado por ultrassom. Então, a agulha é avançada para dentro da luz do VE e são registradas medições de pressão pulsátil. Por fim, os resultados mostram pressões sistólicas em camundongos embriônicos tardios e neonatais precoces utilizando essa cateterização guiada por ultrassom com cateter preenchido por líquido.

A principal vantagem desta técnica em relação a métodos existentes, como servo, medições sem pressão ou cateteres de estado sólido, é que a pressão pode ser medida em camundongos embriões tardios e neonatos de maneira robusta e repetível. Em geral, indivíduos novos nesta técnica terão dificuldades porque é desafiador manter a orientação do embrião no saco embrionário, já que o embrião tende a girar. Com a aplicação da sonda de ultrassom, dependendo do estágio do camundongo a ser estudado, selecione e encha uma sonda com água destilada.

Coloque a sonda no suporte ajustável do sistema de ultrassom. Ajuste o suporte para obter uma visão do eixo longo do VE de um camundongo montado na plataforma, com o ápice do VE voltado para o braço de injeção. O sistema de pressão consiste em um sistema de aquisição de dados com amplificador de ponte de transdutor de pressão preenchido com fluido e gráfico de laboratório.

Um pacote de software, uma seringa de 20 mililitros preenchida com salina heparinizada a 10% é usada para lavar a tubulação. Certifique-se de que bolhas não fiquem presas na tubulação ou sobre o transdutor. A tubulação para o transdutor é conectada por torneiras de três vias, conectores tipo luer e ponteiras de mangueira.

Calibre o sistema de transdutor de pressão com um manômetro, montando o tubo da agulha e o invólucro no braço de injeção. Substitua o manômetro por um invólucro para prender o tubo ao braço de injeção. O invólucro é simplesmente um corpo de seringa modificada de três mililitros.

Fixe o transdutor de pressão em um suporte. Posicione-se aproximadamente na altura da plataforma de imagem para evitar entupimentos. Conecte a maior agulha possível à tubulação da agulha e injete mais solução salina heparinizada até algumas gotas.

Retire a agulha novamente. Certifique-se de que não haja bolhas presas na tubulação ou sobre o transdutor. Agora, coloque uma quantidade de gel ultrassônico sobre a plataforma de imagem.

Gire a agulha em relação ao corpo da seringa de três mililitros para que a borda biselada da agulha fique voltada para cima. Em seguida, utilizando o suporte ajustável, alinhe cuidadosamente a sonda de modo que a agulha possa avançar diretamente para dentro do gel. Abaixo do centro da sonda de imagem, a agulha deve estar suficientemente abaixo da sonda para não perfurar a capa da sonda, mas próxima o suficiente para permanecer dentro da profundidade focal da sonda.

Se necessário, a agulha pode ser dobrada manualmente para que permaneça no plano correto durante todo o seu percurso. Mantendo o alinhamento, recolha a agulha e levante a sonda de imagem para posicionar um camundongo na plataforma de imagem. Substitua a agulha antes de prosseguir com a anestesia do camundongo.

Uma mãe gestante ou camundongo neonatal pode ser submetido à inalação contínua de 1,5% de isoflurano por meio de um tubo inserido em um cone nasal padrão, adaptado para acomodar a pequena cabeça de um camundongo neonatal precoce. Para camundongos neonatais, fixe o animal na plataforma de imagem do sistema de ultrassom em posição decúbito dorsal, com o ápice do VE voltado para o braço de injeção. Para camundongos neonatais, mantenha a temperatura corporal com uma lâmpada de calor externa.

Camundongos grávidos exigem mais preparação. Aplique gel de ultrassom nas extremidades para proporcionar acoplamento ao detector de ECG acoplado e monitorar a frequência cardíaca. Insira o termômetro retal para feedback.

Controle da temperatura corporal. Remova os pelos do abdômen com creme depilatório e enxágue com água. Abra o abdômen usando tesoura de dissecação e pinça curva.

Externe um dos cornos uterinos e coloque-o sobre uma gaze umedecida com solução salina morna. Durante todo o procedimento, mantenha todos os embriões e o abdômen da mãe úmidos. Com adições periódicas de solução salina morna, manipule cuidadosamente um embrião até a posição adequada para obter uma vista longitudinal paraesternal do ventrículo esquerdo (VE). Utilizando a sonda de ultrassom, pode-se usar um rolo de gaze para ajudar a manter a orientação do embrião.

Prossiga com a medição da pressão em todos os embriões de um dos cornos uterinos antes de repetir o processo com o outro corno uterino. Comece colocando gel de ultrassom Degas pré-aquecido sobre um camundongo embriônico ou neonatal. Abaixe a sonda de imagem e ajuste o ângulo da plataforma de imagem para obter uma visão ótima do eixo longo do VE paraesternal.

Não ajuste o ângulo da sonda, pois o alinhamento da agulha será perdido. Enquanto monitora a imagem do VE na tela do ultrassom, avance lentamente a agulha até que ela esteja próxima à base da sonda. Ajuste a posição da agulha e da sonda, se necessário, para corrigir desvios de alinhamento.

A imagem do camundongo neonatal mostra uma orientação ideal para o ve, difícil de ser alcançada com um embrião. Inicie o registro dos dados de pressão. Lave suavemente a agulha com soro fisiológico e feche a torneira de passagem para a seringa de 20 mililitros e para a atmosfera.

Observe a pressão. Aumente no programa para garantir que pressão mínima seja aplicada à agulha. Avance lentamente a agulha até que possa ser vista na borda da imagem de ultrassom, mas ainda não no ve.

Se necessário, ajuste a posição da agulha para inseri-la no VE no ápice. Ajuste a posição da sonda, se necessário, para manter uma imagem nítida da agulha. Avance a agulha para dentro da luz do VE enquanto registra os dados de pressão e monitora a localização da agulha na imagem de ultrassom.

O início das gravações pulsáteis do transdutor de pressão confirma a localização dentro da luz do VE. Se a agulha parecer estar na luz do VE, mas as gravações de pressão não forem pulsáteis, realize uma lavagem com fluido com um leve toque no êmbolo da seringa até que um aumento de pressão seja detectado. A lavagem com fluido deve ser mínima para evitar alterar o comportamento do coração durante as medições de pressão.

Se as leituras de pressão ainda não forem pulsáteis, a agulha pode estar acima ou abaixo do plano correto e não ter penetrado na luz do VE. Retire a agulha, lave-a com solução salina e avance-a novamente.

Se as leituras pulsáteis ainda não forem obtidas, passe para o próximo camundongo e sempre use uma agulha nova para cada camundongo diferente. Todo o procedimento deve ser realizado o mais rapidamente possível para minimizar o estresse aos embriões e neonatos durante a duração do experimento. A pressão ventricular de camundongos C 57 Black six J foi medida em um camundongo E 18.

Como esperado, a pressão estava próxima de zero quando a agulha estava fora do VE e mostrou uma leitura pulsátil quando dentro do VE em um camundongo P14 mais velho. A leitura da pressão estava amortecida porque a magnitude da pressão era maior e a frequência cardíaca era mais alta. As frequências cardíacas foram determinadas a partir da frequência das leituras de pressão pulsátil para várias idades entre E18 e P14.

As frequências cardíacas foram medidas e as pressões sistólicas do VE foram calculadas. Ao realizar este procedimento, é importante lembrar-se de umedecer periodicamente os embriões e verificar o estado da mãe. Esta técnica abre caminho para pesquisadores em fisiologia cardiovascular explorarem alterações na pressão sanguínea em camundongos em desenvolvimento.