Name: Pressão Ventricular Esquerda de medição no final de Ratos embrionárias e Neonatal (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 15 s
Description: Aprenda a medir a pressão ventricular esquerda em camundongos embrionários tardios e neonatais usando cateterização guiada por ultrassom. Este método permite avaliar a função cardíaca durante o desenvolvimento inicial com precisão e reprodutibilidade.

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Este trabalho foi financiado, em parte, pelo NIH concede HL087653 e HL105314. Alguns dos métodos foram desenvolvidos no laboratório do Dr. Robert Mecham da Universidade de Washington School of Medicine.

1. O ultra-som e sistema de pressão <ol><li> Iniciar o sistema de ultra-som de acordo com as instruções dos fabricantes (Vevo 770, Visualsonics). Preencha a sonda apropriado (idade E18 - P7 = modelo 708, idade&gt; = P7 modelo 707B) com água destilada e se conectar ao sistema de ultra-som. Coloque a sonda no suporte ajustável na orientação aproximada necessária para obter uma vista LV longo do eixo para um rato montado na plataforma de imagem de modo que o vértice do VE é apontada para o braço de injecção. </li><li> O sistema de pressão é constituído por um transdutor de pressão cheio de fluido, amplificador ponte, o sistema de aquisição de dados e de software de gravação de dados (LabChart). As conexões consistem em três vias, torneiras, tubos, fechaduras luer e farpas mangueira. Uma seringa de 20 mL é preenchido com 10% de solução salina heparinizada para a lavagem em uma extremidade. A outra extremidade liga-se uma agulha e um corpo de seringa de 3 ml são modificados para uso como um invólucro para segurar o tubo da agulha no braço de injecção (Figura 1). </li><li&gt; Calibrar o sistema transdutor de pressão com um manômetro. </li><li> Montar o tubo da agulha eo invólucro no braço de injecção do sistema de ultra-som. Clamp o transdutor de pressão em um suporte de anel na altura aproximada da plataforma de imagem. Coloque uma agulha apropriada para a idade do mouse (idade E18 - P3 = 30G, idade P3&gt; = 25G) para a agulha. Agulhas menores ficam obstruídos mais fácil, são mais difíceis de avançar através da parede torácica, e tem um tempo de resposta mais lento. Assim, o maior tamanho de agulha que se encaixa no lúmen do VE é usada para cada idade. </li><li> Coloque um montículo de gel de ultra-som na plataforma de imagem e cuidadosamente alinhar a sonda utilizando o suporte ajustável de modo a que a agulha pode ser avançado directamente para o gel sob o centro da sonda de imagem (Figura 2). A agulha deve ser suficientemente abaixo da sonda para não perfurar a tampa da sonda, mas suficientemente perto para estar dentro da profundidade da sonda focal. Se necessário, a agulha pode ser dobrado à mão de modo a que permaneça em poe plano correto ao longo de sua viagem. </li><li> Mantendo o alinhamento, retrair a agulha e elevar a sonda de imagem para colocar um rato sobre a plataforma de imagem. Lavar a agulha para eliminar qualquer gel que possa ter entrado na ponta. </li></ol> 2. Preparação de camundongo <ol><li> Todos os métodos mostrados neste protocolo ter sido aprovado pelo Institutional Animal Care e do Comitê uso. Anestesiar uma mãe grávida cronometrado (E18) ou rato neonatal (P1 - 20) por inalação contínua de isoflurano a 1,5%. Tubo pode ser inserido um cone de nariz padrão para acomodar a cabeça pequena de um rato neonatal precoce (P1 - 15). </li><li> Fixe o mouse para a plataforma de imagens do sistema de ultra-som em uma posição de decúbito dorsal, com o ápice do VE na direção do braço para injeções. Para as mães grávidas, aplicar ultra-som gel para monitorar a freqüência cardíaca com o detector de ECG em anexo e inserir o termômetro retal para controle de feedback da temperatura corporal. Camundongos recém-nascidos são muito pequenos fou estes detectores, de modo a frequência cardíaca é monitorizada durante as medições de pressão e temperatura corporal é mantida com uma lâmpada de calor externo. </li><li> Remova o cabelo do abdômen da gestante ou no peito do rato jovem com um creme depilatório. Ratos neonatos (P1 - 10) não requer qualquer remoção de pêlos. </li><li> Para as mães grávidas, cortou o abdome utilizando tesoura de dissecção e pinças curvas. Externalizar um corno uterino e local em gaze umedecida com soro fisiológico morno. Cuidadosamente manipular um embrião para a posição adequada para se obter um corte paraesternal eixo longo do VE utilizando a sonda de ultra-som. Medir a pressão em todos os embriões deste lado antes externalização o corno uterino outro. Mantenha todos os embriões e do abdômen da mãe úmida com adição periódica de solução fisiológica aquecida. </li></ol> 3. Medição de pressão <ol><li> Lugar pré-aquecido, gel de ultra-som desgaseificado no mouse embrionário ou neonatal. Camundongos recém-nascidos que não foram ddepilada deve ter uma pequena quantidade de gel de ultra-som esfregada na sua caixa antes do gel de ultra-som restante é aplicado para melhorar o acoplamento. Abaixar a sonda de imagem e ajustar o ângulo da plataforma de imagem para obter uma óptima para-esternal LV vista eixo longo. Não ajustar o ângulo da sonda porque o alinhamento da agulha será perdido. </li><li> Enquanto o controlo da imagem LV na tela de ultra-som, lentamente avançar a agulha até que seja perto da parte inferior da sonda. Ajustar a posição da agulha e da sonda, se necessário, para corrigir alterações de alinhamento. Gentilmente limpar a agulha com solução salina. Iniciar os dados de pressão de gravação e zero o transdutor de pressão com o software LabChart. O transdutor deriva com a temperatura e de posição, por isso é importante para zero apenas antes da medição da pressão em cada rato. </li><li> Lentamente avanço da agulha até que possa ser visto na borda da imagem de ultra-som, mas ainda não no VE. Ajustar a posição da agulha, se necessário, para entrar no VE noápice. Ajustar a posição da sonda, se necessário, para manter uma imagem clara da agulha. Avançar a agulha para dentro do lúmen do VE (Figura 3), durante a gravação de dados de pressão e monitorando a localização da agulha sobre a imagem ultra-som. O início de gravações pulsáteis a partir do transdutor de pressão confirma a localização no interior do lúmen LV (Figura 4). </li><li> Se a agulha parece ser no lúmen do VE, mas gravações de pressão não são pulsátil, nivelada com uma torneira de luz sobre o êmbolo da seringa, apenas até um aumento de pressão é detectada (cerca de 5 - 10 do volume uL). Isso deve apagar quaisquer obstruções que podem estar impedindo uma leitura precisa. Se as leituras de pressão não são ainda pulsátil, a agulha pode estar acima ou abaixo do plano correcta e não ser inserido no lúmen do VE. Retrair a agulha, lave com soro fisiológico, e avançar novamente. Se as leituras pulsáteis ainda não obteve, passar para o próximo rato. Utilize uma agulha nova para cada rato. </li><li> Leituras da pressão de sucesso pode ser obtido a partir de 75% doos ratos embrionários e neonatal tentada. As leituras devem tomar 5 - 10 minutos cada e os dados de pressão para um mouse não devem ser incluídos se os batimentos cardíacos são significativamente diferentes do que o esperado (Figura 5A). A frequência cardíaca tem um efeito significativo sobre as medidas cardiovasculares e taxas de coração alterados são indicativos de distúrbios cardíacos. Angústia embrionário ocorre geralmente 1 - 1,5 horas após a primeira externalização do útero, assim que a velocidade é importante para medir as pressões em uma ninhada inteira. </li></ol> 4. Os resultados representativos Todos os resultados são indicados para ratos C57BL6J. Uma imagem da agulha no lúmen do VE para um rato P1 é mostrada na Figura 3. A agulha é necessário para perfurar a parede do tórax e ganhar acesso ao lúmen do VE pequena, mas aumenta significativamente o tempo de resposta do sistema de pressão. Quando um aumento passo aproximada de pressão é aplicada manualmente para o sistema, o tempo para alcançar 67% da pressão máxima é de 0,067 sic com a tubagem apenas (mais provavelmente indicativa do tempo real para aplicar o passo de pressão), 0,105 seg com uma agulha G 25 e 0,529 seg com uma agulha 30 G. O atraso em alcançar a pressão máxima pode ser visto nos traçados completa mostrada na Figura 4A e 4C. Embora o tempo de resposta é mais lento com a agulha 30G, a forma de onda é melhor capturado com os estádios de desenvolvimento embrionário precoce e neonatais, porque a taxa cardíaca aumenta com a idade nos ratinhos 5. Apesar desta limitação, a pressão sistólica pode ser calculada assumindo que a verdadeira LV pressão (mínimo) diastólica é zero, e as pressões sistólica (máxima) a pressão do VE é duas vezes a pressão de VE média determinada a partir das leituras no estado estacionário (Figura 4B e 4D ) 6. Supõe-se geralmente que a sistólica e pressão arterial são iguais. As pressões medidos frequências cardíacas e calculado LV para várias idades entre E18 e P14 são mostrados na Figura 5. <img src="/files/ftp_upload/3756/3756fig1.jpg" /> Figura 1. Imagem do transdutor de pressão com anexados torneiras de três vias, do sexo masculino (M) e feminino (F) conexões luer lock, farpas de mangueiras, tubos, seringas e agulhas. <img src="/files/ftp_upload/3756/3756fig2.jpg" /> Figura 2. Imagem da. Configurado para alinhar a agulha com a sonda de imagem (A) A plataforma de imagem é girada de modo que o vértice do VE do rato é de frente para o braço de injecção. A sonda é montado no suporte ajustável na orientação aproximada necessária para obter uma imagem do VE longo do eixo. O invólucro tubo da agulha está montada no braço de injecção. A agulha é avançado para dentro de um monte de gel de ultra-som na plataforma de imagem para determinar o ângulo adequado e na posição vertical e horizontal em relação à sonda de imagem (B). <img src="/files/ftp_upload/3756/3756fig3.jpg" /> Figura 3. Imagem da agulha (N) avançado através da parede torácica (CW) epara dentro do lúmen do VE em um rato P1. Barra de escala = 0,1 mm. <img src="/files/ftp_upload/3756/3756fig4.jpg" /> Figura 4. Leituras Exemplo pulsáteis de pressão quando a agulha entra no ventrículo esquerdo de um E18 (A) e P14 (C) do rato. Há um atraso em alcançar um estado estacionário, devido ao tempo de resposta do sistema com a agulha colocada. Vistas Zoom das leituras no estado estacionário são mostrados na B e D. Nota que os mínimos E18 pressões do VE, são perto de zero, mas a forma de onda completa de zero para a pressão máxima não pode ser gravado com as taxas mais altas do coração de ratos P14. As pressões médias são medidas a partir das leituras de estado estacionário e é assumido que a pressão sistólica do VE = 2 x média medida de pressão. <img src="/files/ftp_upload/3756/3756fig5.jpg" /> Figura 5 batimentos cardíacos medidos (A) e calculadas as pressões sistólica do VE (B) para E18 -. P14 camundongos. N = 7 para E18, 5 para a P1, 22 para P3, 23 para a P7 e 16 para P14 <sup&gt; 5-7.

<ol><li>Ji, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Onset+of+cardiac+function+during+early+mouse+embryogenesis+coincides+with+entry+of+primitive+erythroblasts+into+the+embryo+proper%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Onset of cardiac function during early mouse embryogenesis coincides with entry of primitive erythroblasts into the embryo proper.</a> Circ. Res. 92 (2), 133-135 (2003).</li>
<li>Ishiwata, T., Nakazawa, M., Pu, W. T., Tevosian, S. G., Izumo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+changes+in+ventricular+diastolic+function+correlate+with+changes+in+ventricular+myoarchitecture+in+normal+mouse+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Developmental changes in ventricular diastolic function correlate with changes in ventricular myoarchitecture in normal mouse embryos.</a> Circ. Res. 93 (9), 857-865 (2003).</li>
<li>Huang, Y., Guo, X., Kassab, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axial+nonuniformity+of+geometric+and+mechanical+properties+of+mouse+aorta+is+increased+during+postnatal+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Axial nonuniformity of geometric and mechanical properties of mouse aorta is increased during postnatal growth.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 290 (2), H657-H664 (2006).</li>
<li>Ishii, T., Kuwaki, T., Masuda, Y., Fukuda, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+development+of+blood+pressure+and+baroreflex+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Auton.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Postnatal development of blood pressure and baroreflex in mice.</a> Auton. Neurosci. 94 (1-2), 34-41 (2001).</li>
<li>Le, V. P., Knutsen, R. H., Mecham, R. P., Wagenseil, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+aortic+diameter+and+compliance+precedes+blood+pressure+increases+in+postnatal+development+of+elastin-insufficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Decreased aortic diameter and compliance precedes blood pressure increases in postnatal development of elastin-insufficient mice.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. , (2011).</li>
<li>Wagenseil, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+vessel+elasticity+alters+cardiovascular+structure+and+function+in+newborn+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Reduced vessel elasticity alters cardiovascular structure and function in newborn mice.</a> Circ. Res. 104 (10), 1217-1224 (2009).</li>
<li>Wagenseil, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+elastin+to+aortic+development+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">The importance of elastin to aortic development in mice.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299 (2), H257-H264 (2010).</li>
<li>Ramirez, F., Sakai, L. Y., Rifkin, D. B., Dietz, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+microfibrils+in+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Mol.+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Extracellular microfibrils in development and disease.</a> Cell. Mol. Life Sci. 64 (18), 2437-2446 (2007).</li>
<li>Li, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastin+point+mutations+cause+an+obstructive+vascular+disease%2C+supravalvular+aortic+stenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mol.+Genet%22%5BJournal%5D)">Elastin point mutations cause an obstructive vascular disease, supravalvular aortic stenosis.</a> Hum. Mol. Genet. 6 (7), 1021-1028 (1997).</li>
<li>Roth, D. M., Swaney, J. S., Dalton, N. D., Gilpin, E. A., Ross, J. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+anesthesia+on+cardiac+function+during+echocardiography+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Impact of anesthesia on cardiac function during echocardiography in mice.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 282 (6), H2134-H2140 (2002).</li>
<li>Phoon, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+tools+for+the+developmental+biologist%3A+ultrasound+biomicroscopy+of+mouse+embryonic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr.+Res%22%5BJournal%5D)">Imaging tools for the developmental biologist: ultrasound biomicroscopy of mouse embryonic development.</a> Pediatr. Res. 60 (1), 14-21 (2006).</li>
</ol>

Não há conflitos de interesse declarados.

O protocolo apresentado aqui fornece um método para medir a pressão no VE embrionário atrasado e cedo ratinhos neonatais. A principal limitação deste protocolo é a resolução temporal do sistema de pressão. O sinal de pressão é amortecido à medida que viaja a partir do VE, através da agulha para o transdutor, e apenas os valores médios de pressão pode ser gravado. O amortecimento pode ser minimizados através da utilização da maior agulha possível, mas a agulha deve caber dentro do lúmen do VE para diferentes ratinhos env...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente / equipamentos </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários </td></tr><tr><td> Sistema de ultra-sonografia de alta resolução </td><td> Visualsonics </td><td> Vevo 770 </td><td> Ou outro sistema de ultra apropriado </td></tr><tr><td> Sondas de ultra-som de alta freqüência </td><td> Visualsonics </td><td> 708 e 707B </td><td></td></tr><tr><td> Plataforma de imagem e braço para injeções </td><td> Visualsonics </td><td> Imagem Station 2 </td><td> Com ECG e controle de temperatura gabarito da plataforma </td></tr><tr><td> Transdutor de pressão </td><td> Instrumentos AD </td><td> MLT 844 </td><td></td></tr><tr><td> Amplificador Ponte </td><td> Instrumentos AD </td><td> ML221 </td><td></td></tr><tr><td> Dados do sistema de aquisição </td&gt; <td> Instrumentos AD </td><td> ML866 </td><td></td></tr><tr><td> Dados software de gravação </td><td> Instrumentos AD </td><td> LabChart </td><td></td></tr><tr><td> Anel de pé e braçadeira </td><td> Diversos fornecedores </td><td></td><td> Para segurar transdutor de pressão durante as medições </td></tr><tr><td> Torneiras de 3 vias com conexões luer, bloqueio masculino </td><td> Cole Parmer </td><td> 30600-02 </td><td></td></tr><tr><td> 1/16 &quot;Tubo Tygon ID </td><td> Cole Parmer </td><td> 06408 </td><td></td></tr><tr><td> Luers masculino e feminino w espigão / 1/16 &quot; </td><td> Cole Parmer </td><td> 45510-50 45510-00 </td><td></td></tr><tr><td> 24 tubo &quot;com luer macho e fêmea em cada extremidade </td><td> Cole Parmer </td><td> 30600-60 </td><td></td></tr><tr><td> 3 e 10 mL seringas </td><td> BD Biosciences </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 30 e 25G agulhas </td><td> BD Biosciences </td><td></td><td> 1,5 polegadas de comprimento </td></tr><tr><td> Big Ben manômetro </td><td> Riester </td><td> 1456-100 </td><td></td></tr><tr><td> Salina </td><td> Diversos fornecedores </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Heparina </td><td> Diversos fornecedores </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Gel de ultra-som </td><td> Parker </td><td> Aquasonic 100 </td><td></td></tr><tr><td> Loção removedor de pêlos </td><td> Nair </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

pressão ventricular esquerda de medição no final de ratos embrionárias e neonatal

Measuring Left Ventricular Pressure in Late Embryonic and Neonatal Mice

A pressão arterial aumenta significativamente durante o desenvolvimento embrionário e pós-natal em animais vertebrados. No rato, o fluxo sanguíneo é primeiro detectável por volta do dia embrionário (E) 8,5 1. Pressão sistólica do ventrículo esquerdo (LV) é de 2 mmHg em E9.5 e 11 mmHg na E14.5 2. Nessas fases mid-embrionárias, a LV é claramente visível através da parede torácica para medições de pressão invasiva, pois as costelas ea pele não estão totalmente desenvolvidos. Entre E14.5 e nascimento (aproximadamente E21) métodos de imagem deve ser usado para visualizar o LV. Após o nascimento, a média aumenta a pressão arterial de 30 a 70 mmHg desde o primeiro dia pós-natal (P) 2 - 35 3. Para além P20, a pressão arterial pode ser medida com cateteres de estado sólido (isto é, Millar ou Scisense). Antes de P20, estes cateteres são grandes demais para o desenvolvimento de artérias de rato e de pressão arterial deve ser medida com o costume puxado cateteres de plástico ligados a transdutores cheias de líquido de pressão ou 3 micropipetas de vidro attdoíam a servo-transdutores de pressão nulos 4. O nosso trabalho recente demonstrou que o maior aumento na pressão sanguínea ocorre durante os embrionário tardios para período pós-natal precoce em ratinhos 5-7. Este grande aumento na pressão sanguínea pode influenciar o fenótipo da célula de músculo liso (SMC) em artérias em desenvolvimento e desencadear eventos mecanotransdução importantes. Na doença humana, onde as propriedades mecânicas das artérias desenvolvimento estão comprometidos por defeitos de proteínas da matriz extracelular (Síndrome ie Marfan 8 e estenose aórtica supravalvar 9) as mudanças rápidas na pressão sanguínea durante este período pode contribuir para o fenótipo e gravidade da doença através de alterações na mecanotransdução sinais. Portanto, é importante ser capaz de medir as alterações da pressão arterial durante embrionário tardias e períodos neonatais em modelos de ratos de doenças humanas. Nós descrevemos um método para medir pressão do VE, no final deembrionário (E18) e pós-natal precoce (P1 - 20) camundongos. Uma agulha ligada a um transdutor de pressão cheio de fluido é inserido no ventrículo esquerdo sob a orientação de ultra-som. É tomado cuidado para manter a função cardíaca normal durante o protocolo experimental, especialmente para os ratos embrionários. Os dados representativos são apresentados e limitações do protocolo são discutidos.

Medindo a pressão ventricular esquerda (LV) em ratinhos embrionárias e neonatal é descrito. A pressão é medida através da inserção de uma agulha ligada a um transdutor cheio de fluido para o VE sob a orientação de ultra-som. Cuidados devem ser tomados para manter a função cardíaca normal durante o protocolo experimental.

Pressão Ventricular Esquerda de medição no final de Ratos embrionárias e Neonatal

A pressão arterial aumenta significativamente durante o desenvolvimento embrionário e pós-natal em animais vertebrados. No camundongo, o fluxo sanguíneo é detectável primeiramente...

O objetivo geral deste procedimento é medir a pressão ventricular esquerda ou pressão do VE em camundongos no estágio embrionário tardio e neonatal. Primeiro, prepara-se o equipamento. Uma agulha conectada a um transdutor de pressão deve ser alinhada com uma sonda de ultrassom.Em seguida, um camundongo é preparado e seu VE é imageado por ultrassom. Então, a agulha é avançada para dentro da luz do VE e são registradas medições de pressão pulsátil. Por fim, os resultados mostram pressões sistólicas em camundongos embriônicos tardios e neonatais precoces utilizando essa cateterização guiada por ultrassom com cateter preenchido por líquido.A principal vantagem desta técnica em relação a métodos existentes, como servo, medições sem pressão ou cateteres de estado sólido, é que a pressão pode ser medida em camundongos embriões tardios e neonatos de maneira robusta e repetível. Em geral, indivíduos novos nesta técnica terão dificuldades porque é desafiador manter a orientação do embrião no saco embrionário, já que o embrião tende a girar. Com a aplicação da sonda de ultrassom, dependendo do estágio do camundongo a ser estudado, selecione e encha uma sonda com água destilada.Coloque a sonda

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Bioengenharia

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Aprenda a medir a pressão ventricular esquerda em camundongos embrionários tardios e neonatais usando cateterização guiada por ultrassom. Este método permite avaliar a função cardíaca durante o desenvolvimento inicial com precisão e reprodutibilidade.

Pressão Ventricular Esquerda de medição no final de Ratos embrionárias e Neonatal

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