Name: Superando indiferença em Encefalomielite autoimune experimental (EAE) linhagens mais resistentes por transferência adotiva e desafio antigênico (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 38 s
Description: Aprenda a induzir encefalomielite autoimune experimental em camundongos resistentes usando transferência adotiva de células de linfonodo estimuladas com antígenos de mielina. Este método permite superar mecanismos de resistência e estudar doenças autoimunes.

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Apoiado em parte por concessões do National Institutes of Health (R01 NS37253 e N01 NS055167) e da Sociedade Nacional de Esclerose Múltipla (RG 3288-A6).

1. Preparando CFA-emulsionado Antigen <ol><li> Dissolver cobaia MBP (preparado de acordo com o método de Swanborg1 e armazenado na forma liofilizada a 4 ° C) em solução tampão fosfato (PBS) a uma concentração de 2 mg / mL. Se péptidos MBP sintetizado (MBP 60-80, SHHAARTTHYGSLPQKSQR) 2 são utilizados, preparar uma solução a 2 mg / mL. Elaborar uma quantidade apropriada de solução de antigénio (0,1 mL por rato a ser imunizado) para uma seringa de vidro com luer-lok. </li><li> Elaborar um volume de adjuvante completo de Freund H37Ra (0.1WT%) (CFA, Difco Laboratories) igual à solução de antigénio para outra seringa de vidro equipado com luer-lok. </li><li> Ligar as duas seringas de vidro com uma torneira de três vias. Misture a solução MBP com o CFA, empurrando os êmbolos para trás e para frente. Manter o movimento até que uma emulsão é formada. </li><li> Para testar se uma emulsão é formada, empurrar toda a mistura em uma seringa. Desconecte a seringa vazia, puxe tele êmbolo para trás um pouco e descarregar uma gota da emulsão residual em um copo de água limpa à temperatura ambiente. Se a queda de emulsão permanece intacta sobre a superfície da água, uma emulsão é formada. Se a queda de emulsão dispersa, reconectar as seringas e continuar o movimento de mistura. </li><li> Usar uma seringa de plástico de 1 ml para o processo de imunização para assegurar a entrega de uma dose precisa de antigénio. Para transferir a emulsão antigénio para a seringa de plástico, puxar para fora o êmbolo e inserir a seringa vazia de plástico para dentro da abertura de torneira de três vias onde a seringa de vidro anterior foi desligado como em 1,4. </li><li> Encher a seringa de plástico para o aro, empurrando o êmbolo da seringa de vidro. Inserir o êmbolo da seringa de plástico para trás e para empurrar para trás emulsão excesso até alcançar a 1,2 mL marca na seringa de plástico. Essa manobra garante que nenhuma bolha de ar é aprisionado no interior da seringa de plástico. </li><li> Remova a seringa de plástico do torneira de três vias. Attach uma agulha calibre 26 # para a seringa de plástico. Empurrar o êmbolo para a marca de 1 mL de modo a que a emulsão agora enche o volume vazio da agulha. </li></ol> 2. A imunização de camundongos doadores Nota: camundongos fêmeas C57BL / 6 são normalmente injetados com antígeno emulsão em quatro locais nos flancos, seguindo os métodos originalmente concebidos pelo grupo McFarlin de 3 no National Institutes of Health. Para um investigador experiente, uma pessoa pode realizar toda a tarefa. Para os iniciantes, a ajuda pode ser solicitada de modo que uma pessoa detém o mouse ea outra pessoa faz a injeção. Alternativamente, o rato pode ser anestesiados para a injecção. <ol><li> Segure o mouse com firmeza pela pele do pescoço e segurar a cauda entre os dedos ª 4 ª e 5 de tal forma que o tórax eo abdômen são facilmente acessíveis. </li><li> Coloque a agulha da seringa 1 mL de plástico a um sítio no tórax ligeiramente acima da axila direita (do mousar) e injectar 0,05 mL da emulsão antigénio por via subcutânea. Uma protuberância pouco do CFA esbranquiçado pode ser visto através da pele pálido. Repita a mesma para o local no tórax ligeiramente acima da axila esquerda. </li><li> Solte o rabo e segure o pé direito (do mouse), transformá-lo e mantê-lo entre os dias 4 e 5 dedos ª. Localizar o local imediatamente abaixo da nervura caso no flanco direito e injectar 0,05 mL da emulsão antigénio. </li><li> Solte o pé direito, vire o mouse para o outro lado e segure o pé esquerdo (do mouse) entre o 4 º e 5 º dedos. Localizar o local imediatamente abaixo da nervura caso no flanco esquerdo e injectar 0,05 mL da emulsão antigénio. </li><li> Alterar a uma agulha de fresco após a injecção de 10 ratinhos, ou se a agulha se torna embotada. </li></ol> 3. Isolamento de células dos nódulos linfáticos para cultura de tecido de 7 a 10 dias após a imunização <ol><li> Sete a 10 dias após a imunização, sacrificar os ratinhose remover os linfonodos de drenagem. O método preferido de eutanásia é por inalação de CO 2. Após o sacrifício, coloque o mouse sobre as suas costas em uma placa de dissecção com os membros esticados e fixados à placa com os pinos. Os ratinhos são humedecidos com uma pulverização de etanol a 70%. </li><li> Cortar uma fenda na pele longitudinalmente no meio a partir da extremidade inferior do abdómen até ao queixo com tesouras e pinças esterilizadas. </li><li> Cortar o abdómen da pele a partir da área da virilha para baixo para cada perna. Descasque e fechar a pele, expondo os linfonodos inguinais. </li><li> Corte a pele junto a membros anteriores (esquerda e direita) para que a pele pode ser puxada para trás e fixado para baixo para expor os linfonodos axilares perto das axilas. </li><li> Com dois pares de pinças que trabalham em conjunto, afastar os tecidos conjuntivos e cobrindo em torno dos linfonodos inguinais. Quando os tecidos conjuntivos são limpas, colocar um par de pinças sob o nó de linfa e puxar para fora do corpo. Colocar onódulos linfáticos em uma placa de Petri 35 milímetros cheio com PBS estéril. </li><li> Afaste os tecidos conectivos que cobrem os dois gânglios axilares linfáticos usando dois pares de fórceps. Isolar os nódulos linfáticos e colocá-los na placa de Petri. Tenha muito cuidado para não quebrar os vasos sanguíneos que atravessam a área, como o sangramento torna identificar os linfonodos muito difícil. </li><li> Depois de todos os linfonodos são coletados, mova a placa de Petri para uma capa de biossegurança. Ruptura e provocar os gânglios linfáticos distante com os dois pares de pinças, moagem um contra o outro. Alternativamente, os nódulos linfáticos pode ser quebrada usando a extremidade plana do êmbolo de uma seringa de plástico de 3 mL pressionando contra os gânglios linfáticos na parte inferior da placa de Petri. </li><li> Passar o provocou linfa suspensão de células nó através de uma malha de nylon para remover as membranas e detritos. </li><li> Perfaz-se a linfa suspensão de células de nó para 50 mL utilizando PBS estéril. Centrifugar a 1000 rpm durante 10 minutos. Ressuspender o sedimento em meio de cultura. Faça uma c viávelell contar e ajustar a concentração de 4 x 10 6 células / ml. UseRPMI 1640 suplementado com 10% de soro fetal de vitelo, 2 mM de L-glutamina, 1 mM de piruvato de sódio MEM, 0,1 mM de MEM não-aminoácidos essenciais, 100 U / mL de penicilina, estreptomicina 100 ug / mL, 10 mM de tampão Hepes e 5 x 10 -5 M 2-ME. Pré-aquecer a cultura antes de ressuspender as células. </li><li> Cultura das células em placas de 24 poços de cultura com 2 ml de volume por poço (concentração celular final de 8 x 10 6 células / poço). Adicionar antigénio a cada poço a uma concentração final de 100 ug / mL. Colocar a placa de cultura num 37 ° C incubadora com 5% de CO 2. Incubar as células durante 5 dias. </li></ol> 4. Coleta de células cultivadas de nó de linfa 5 dias após o início das Culturas <ol><li> Misturar as células em cada poço por pipetagem para cima e para baixo com uma pipeta de Pasteur de vidro ou de uma pipeta de pequeno volume. Colher as células para um tubo de centrífuga de 50 mL. </li><li> Centrifugar as células a 1000 rpm durante 10 minutos. Reanimaçãopend o sedimento de células em um pequeno volume de PBS. </li><li> Contar as células e ajustar a concentração de células viáveis ​​para 2,5 x 10 8 células / ml com PBS estéril. Desenhar as células em uma seringa com uma agulha # 26 gauge. </li><li> Colocar uma lâmpada de calor sobre a gaiola de ratos receptores para ajudar a dilatar a veia da cauda. </li><li> Utilizando um suporte de rato, estender a cauda do rato através da fenda no suporte. Puxar para estender a cauda. Localize a veia. </li><li> Injectar 0,2 mL / rato da suspensão de células, igualando 5 x 10 7 células. </li></ol> 5. Desafio antigênico de ratos receptores 20 dias a transferência de células de Correios e Desenvolvimento de sintomas da doença <ol><li> Ratos receptores desafio que não apresentam sinais da doença com o antígeno. Os procedimentos são o mesmo que a secção 2 em &quot;imunização de ratinhos dadores&quot;. </li><li> Observar o desenvolvimento de doença paralítica 7 a 10 dias após o desafio antigénico. <ol><li> Doença começa com fraqueza na cauda. A doença é classificada como umaquando a cauda flácida torna-se. A doença é classificada como 2 quando o mouse está paralisado em um dos membros posteriores. A doença é classificada 3, quando ambos os membros posteriores estão paralisados ​​e arrasta o mouse ambos os membros posteriores ao rastrear a frente. A doença é grau 4 quando o mouse perde o uso de ambos os membros anteriores, deixando o mouse totalmente imóvel. A doença é classificada 5, quando o mouse está moribunda eo corpo se enrola. A morte é classificada como grau de doença 6 4. </li></ol></li><li> MBP-específico EAE induzida em camundongos C57BL / 6 após este protocolo é monofásica. Os ratos podem se recuperar da doença, mas não sofrem recaídas espontâneas. </li></ol> 6. Os resultados representativos Os ratos que receberam ferrado e in vitro-expandidos doadores células dos nódulos linfáticos não desenvolveram sintomas da doença EAE, reflectindo a sua resistência à indução da doença. No entanto, a doença grave desenvolvido após o desafio antigénico (Tabela I), demonstrando a capacidade do desafio antigénicoem reverter o mecanismo de resistência. Duas características especiais do desafio antigênico observado são as doses de antígeno e cinética de desafio para induzir a doença. Dose muito baixa de antigénio é necessário, como mostrado na Tabela III. Surpreendentemente, os ratinhos que receberam células de dadores um ano antes pode ainda desenvolver uma doença grave quando desafiado com o antigénio (Tabela IV). Estas duas observações sugerem fortemente o envolvimento de &quot;longa duração&quot; células T em manter a resistência EAE. Este protocolo é aplicável a muitos EAE linhagens resistentes 4. <img alt="Figura 1." src="/files/ftp_upload/3778/3778fig1.jpg" /> Figura Fluxograma 1. Do projeto experimental para a indução de EAE em reputados linhagens mais resistentes. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td colspan="3"> EAE clínica após a transferência adotiva </td><td colspan="3"><strong&gt; EAE Clínica após o desafio antigénico </td></tr><tr><td> Tensão </td><td> Antígeno </td><td> incidência </td><td> Av. grau de doença (Intervalo) </td><td> Av. dia de início (Intervalo) </td><td> Incidência </td><td> Av. grau de doença (Intervalo) </td><td> Av. dia de início (Intervalo) </td></tr><tr><td> SJL </td><td> MBP </td><td> 21/21 </td><td> 4.0 (3-5) </td><td> 8.0 (6-10) </td><td> ND </td><td> ND </td><td> ND </td></tr><tr><td> C57BL / 6 </td><td> MBP </td><td> 0/10 </td><td> - </td><td> - </td><td> 7/7 </td><td> 3.85 (3-5) </td><td> 9.28 (9-10) </td></tr><tr><td> Balb / c </td><td> MBP </td><td> 0/7 </td><td> - </td><td> - </td><td> 5/5 </td><td> 3.2 (3-4) </td><td> 7.0 (7) </td></tr><tr><td> C3H/HeJ </td&gt; <td> MBP </td><td> 0/7 </td><td> - </td><td> - </td><td> 4/4 </td><td> 3.2 (3-4) </td><td> 8.0 (8) </td></tr><tr><td> C57BL / 6 </td><td> MBP 60-80 </td><td> 0/4 </td><td> - </td><td> - </td><td> 4/4 </td><td> 2.75 (2-4) </td><td> 10.2 (9-11) </td></tr></tbody></table> Tabela I. Indução de MBP-mediada EAE em ratinhos C57BL / 6. A transferência adoptiva de EAE preparado e em células in vitro-expandidos dadores não induziu nos C57BL / 6 ratinhos. Antigênica desafio de transferência de célula pós prestados os ratos suscetíveis à indução da doença. Av., Em média. ND, não feito. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td colspan="3"> EAE clínica após o desafio antigénico </td></tr><tr><td> Antigen Priming </td><td> Antígeno Desafio </td><td> Incidência </td><td> Av. grau de doença (Intervalo)</td><td> Av. dia de início (Intervalo) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> CFA sozinho </td><td> 0/3 </td><td> - </td><td> - </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> OVA-CFA </td><td> 0/3 </td><td> - </td><td> - </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> MBP-CFA </td><td> 3/3 </td><td> 4.0 (4.0) </td><td> 7.7 (7-9) </td></tr></tbody></table> Tabela II Especificidade. De desafio antigênico. Ratinhos receptores foram desafiados com o antigénio de escorvamento, bem como outros antigénios irrelevantes. Apenas o antigénio de escorvamento induzida doença grave. OVA: ovalbumina de galinha. Av., Em média. <table border="1"><tbody&gt; <tr><td></td><td></td><td colspan="3"> EAE clínica após o desafio antigénico </td></tr><tr><td> Desafio doses de antígeno (mg / rato) </td><td> Incidência </td><td> Av. grau de doença (Intervalo) </td><td> Av. dia de início (Intervalo) </td></tr><tr><td> 200 </td><td> 4/4 </td><td> 3.75 (3-4) </td><td> 8.25 (7-9) </td></tr><tr><td> 100 </td><td> 4/4 </td><td> 3.67 (3-4) </td><td> 7.5 (7-8) </td></tr><tr><td> 50 </td><td> 4/4 </td><td> 3.25 (3-4) </td><td> 8.25 (7-10) </td></tr><tr><td> 25 </td><td> 4/4 </td><td> 3.0 (3.0) </td><td> 8.25 (8-9) </td></tr><tr><td> 10 </td><td> 4/4 </td><td> 3.0 (3.0) </td><td> 8.76 (8-9) </td></tr><tr><td> 5 </td><td> 4/4 </td><td> 2.5 (2-3) </td><td> 9.75 (9-10) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 2/4 </td><td> 1.0 (1.0) </td><td&gt; 16 (14-18) </td></tr><tr><td> 0 </td><td> 0/4 </td><td> - </td><td> - </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabela III. Doses de antigénios Desafio necessária para a indução da doença. Várias concentrações de MBP utilizados para desafiar ratinhos receptores foram testados. Av., Em média. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td colspan="3"> EAE clínica após o desafio antigénico </td></tr><tr><td> Antígeno Desafio </td><td> Dia do Desafio </td><td> Incidência </td><td> Av. Grau de doença (Intervalo) </td><td> Av. Dia de início (Intervalo) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 5 </td><td> 3/4 </td><td> 1.33 (1-2) </td><td> 9.67 (9-10) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 10 </td&gt; <td> 4/4 </td><td> 3.0 (3.0) </td><td> 8.25 (7-9) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 15 </td><td> 4/4 </td><td> 3.75 (3-4) </td><td> 7.25 (7-8) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 25 </td><td> 4/4 </td><td> 4.0 (4.0) </td><td> 8.0 (7-9) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 35 </td><td> 4/4 </td><td> 3.5 (3-4) </td><td> 7.5 (7-8) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 60 </td><td> 4/4 </td><td> 3.75 (3-4) </td><td> 9.0 (8-10) </td></tr><tr><td colspan="5"> -------------------------- </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 343 </td><td> 3/3 </td><td> 3.0 (3.0) </td><td> 10.33 (10-11) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 445 </td><td> 3/3 </td><td> 3.0 (3.0) </td><td> 7.0 (7.0) </td></tr></tbody></table> Tabela IV. Cinética de desafio antigênico. Camundongos receptores foram desafiados, em diversos ponto do tempo pós adotarive transferência de células. Av., Em média.

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</ol>

Não há divulgações financeiras.

Estudos de EAE em ratinhos frequentemente utilizar os neuroantigens e proteína básica de mielina (MBP), proteína proteolipídeo (PLP) ou proteína de mielina oligodendrócito (MOG). Estudos anteriores usado principalmente MBP. PLP estimula respostas fortes e consistentes de camundongos SJL. Mais recentemente, é o MOG neuroantigen comum utilizado porque ratinhos B6 são susceptíveis à indução da doença com este antigénio. Muitos dos genes alvo são as estirpes de rato no fundo B6 genética. Curiosamente, ratinhos B6 são suscep...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários </td></tr><tr><td> Cobaia medulas espinhais </td><td> Rockland Imuno-químicos, Inc. Gilbertsville, PA 19525 <a href="http://www.rockland-inc.com" target="_blank">www.rockland-inc.com</a> </td><td> GP-T065 </td><td> congelada </td></tr><tr><td> Adjuvante de Freund, completo H37Ra </td><td> Disco Laboratories Detroit, MI </td><td> 231131 </td><td></td></tr><tr><td> Multifit seringa interchange capaz </td><td> BD <a href="http://www.bd.com/us" target="_blank">www.bd.com / us</a> </td><td> 512133 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td> MediatechInc. Manassas, VA <a href="http://www.cellgro.com" target="_blank">www.cellgro.com</a> </td><td> 10-040-CM </td><td></td></tr><tr><td> OVA </td><td> Sigma-Aldrich <a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank">www.sigmaaldrich.com</a> </td><td> A5503 </td><td></td></tr><tr><td> Ratos </td><td> Jackson Laboratory Bar Harbor, Maine </td><td> Ratinhos B6: 0000664 </td><td></td></tr></tbody></table>

superando indiferença em encefalomielite autoimune experimental (eae) linhagens mais resistentes por transferência adotiva e desafio antigênico

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Encefalomielite autoimune experimental (EAE) é uma doença inflamatória do sistema nervoso central (SNC) e tem sido utilizado como um modelo animal para estudo da doença desmielinizante humano, a esclerose múltipla (MS). EAE é caracterizada pela infiltração de células mononucleares patológica no SNC e pela manifestação clínica da doença paralítica. Semelhante à MS, a EAE é também sob controlo genético em que as estirpes de ratinho determinados são susceptíveis à indução da doença, enquanto outros são resistentes. Tipicamente, C57BL / 6 (H-2 b) ratos imunizados com proteína básica de mielina (MBP) não conseguem desenvolver sinais de paralisia. Esta falta de responsividade não é certamente devido a defeitos de processamento do antigénio ou apresentação de antigénio de MBP, como um protocolo experimental descrito aqui tinha sido utilizado para induzir a EAE grave em ratinhos C57BL / 6, bem como outros reputados linhagens mais resistentes. Além disso, os clones de células T a partir de encephalitogenic C57BL / 6 e ratinhos Balb / c reactivo a MBP tinha sido sucessototalmente isolado e propagado. O protocolo experimental envolve o uso de um sistema de transferência adoptiva em que celular MBP-preparado (200 ug / ratinho) C57BL / 6 dadores células dos nódulos linfáticos são isoladas e cultivadas durante cinco dias com o antigénio para expandir o pool de células T específicas MBP. No final do período de cultura, a 50 milhões de células viáveis ​​são transferidos para ingénuos receptores singénicos através da veia da cauda. Ratos receptores assim tratado normalmente não se desenvolvem EAE, reafirmando seu status resistentes, e podem permanecer normais indefinidamente. Dez dias após a transferência de células, ratos receptores são desafiados com adjuvante completo de Freund (CFA)-emulsionado MBP em quatro locais nos flancos. EAE grave começa a desenvolver nestes ratinhos dez a catorze dias após o desafio. Os resultados mostraram que a indução da doença era específica antigénica como desafio com antigénios irrelevantes não induziu sinais clínicos da doença. Significativamente, uma titulação da dose de antigénio utilizado paradesafiar os ratos receptores mostraram que poderia ser tão baixa como 5 ug / rato. Além disso, um estudo cinético da temporização de desafio antigénico mostrou que desafio para induzir a doença foi eficaz tão cedo quanto 5 desafio antigénico dias pós e enquanto sobre 445 desafio antigénico dias pós. Estes dados apontam fortemente para o envolvimento de uma &quot;longa vida&quot; população de células T em manter indiferença. O envolvimento de células T reguladoras (Tregs) neste sistema não está definido.

Linhagens determinados são capazes de resistir a indução de encefalomielite autoimune experimental (EAE) com proteína básica de mielina. Descrito aqui é um simples protocolo de imunização que reverte a apatia e induz a doença paralítica em vários típicos EAE manchas resistentes do mouse.

Superando indiferença em Encefalomielite autoimune experimental (EAE) linhagens mais resistentes por transferência adotiva e desafio antigênico

A encefalomielite autoimune experimental (EAE) é uma doença inflamatória do sistema nervoso central (SNC) e tem sido utilizada como um modelo animal para...

O objetivo geral deste procedimento é induzir EAE de forma consistente e fácil em qualquer linhagem de camundongo, inclusive naquelas consideradas resistentes à indução de EAE. Isso é realizado primeiramente imunizando camundongos doadores com proteínas específicas da mielina ou antígenos peptídicos, emulsionados em adjuvante completo de Freund. Dez dias depois, os linfonodos dos camundongos doadores são isolados e as células dos linfonodos são reestimuladas in vitro cultivando-as com o mesmo antígeno por quatro a cinco dias.As células são então transferidas adotivamente para camundongos receptores ingênuos. Linhagens de camundongos suscetíveis desenvolverão EAE em oito a 14 dias para induzir EAE em uma linhagem resistente. Quatorze dias após a transferência adotiva, os camundongos receptores foram então imunizados com antígeno em CFA.Utilizando este método, a EAE pode ser induzida em linhagens de camundongos resistentes. A principal vantagem do protocolo de transferência adaptativa e desafio para indução da EAE é que permite a indução confiável da doença. Raramente observamos menos de 100% de doença clínica.Podemos adaptar o protocolo para induzir a doença em cepas de camundongos

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Este vídeo demonstra uma técnica de homogeneização eficiente para gerar uma emulsão antigénio-adjuvante para induzir encefalomielite autoimune experimental (EAE) num modelo murino. A emulsão contém um autoantígeno - glicoproteína de oligodendrócitos de mielina (MOG) - na fase aquosa, cercada por uma fase oleosa contínua composta por uma bactéria patogênica inativada. A emulsão garante uma liberação sustentada de antígenos para uma resposta imune prolongada.

Preparando uma emulsão adjuvante de antígeno para induzir encefalomielite autoimune

O vídeo demonstra a indução de encefalomielite autoimune experimental em um modelo de camundongo injetando uma combinação de glicoproteínas de oligodendrócitos de mielina e Mycobacterium tuberculosis inativado. O modelo permite que os pesquisadores estudem os mecanismos da doença e testem intervenções terapêuticas.

Indução de encefalomielite autoimune experimental em modelo de camundongo

Este vídeo demonstra o método de indução de encefalomielite autoimune experimental (EAE) injetando peptídeos derivados de mielina com um adjuvante para ativar células T autorreativas, que migram para o cérebro. A toxina da coqueluche é administrada para aumentar a permeabilidade da barreira hematoencefálica, permitindo que essas células T e outras células imunológicas entrem no cérebro. Essas células imunes causam desmielinização, levando ao comprometimento da transmissão nervosa e ao...

Geração de encefalomielite autoimune experimental em modelo de camundongo

Neste vídeo, um modelo de camundongo com esclerose múltipla é estabelecido usando encefalomielite autoimune experimental (EAE). O camundongo é injetado com uma emulsão contendo um peptídeo neuronal e um adjuvante, desencadeando uma resposta imune que ativa as células T autorreativas. Isso é seguido por uma injeção de toxina coqueluche (PTX) para aumentar a permeabilidade da barreira hematoencefálica, permitindo que as células T autorreativas se infiltrem no cérebro. Essa infiltração inicia uma...

Encefalomielite autoimune experimental (EAE) é um modelo animal estabelecido de esclerose múltipla. C57BL / 6 são imunizados com mielina de oligodendrócitos glicoproteína (MOG) peptídeo 35-55 (MOG 35-55), o que resulta em uma paralisia flácida ascendente causada por células imunes autorreactivas no sistema nervoso central. Protocolos para indução e monitoramento de doenças serão discutidos.

Mielina Oligodendrocyte glicoproteína (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) Induzida Encefalomielite Auto-imune Experimental (EAE) em murganhos C57BL / 6

Este manuscrito descreve os métodos de indução e pontuação do modelo experimental de encefalomielite autoimune (EAE), juntamente com a avaliação da distribuição de células imunes e níveis de citocinas de mRNA em linfonodos, baço, sangue e medula espinhal usando citometria de fluxo e PCR quantitativo, respectivamente, em várias fases da doença.

Indução de encefalomielite autoimune experimental em camundongos e avaliação da distribuição da doença dependente de células imunes em vários tecidos

Aqui, apresentamos os protocolos para investigar o comprometimento da unidade neurovascular durante encefalomielite auto-imune experimental in vivo. Abordamos especificamente como determinar a permeabilidade da barreira hemato - encefálica e gelatinase atividade envolvida na migração de leucócitos através da limitans da glia.

Visualizando o comprometimento das barreiras endoteliais e Glial da unidade Neurovascular durante encefalomielite auto-imune Experimental In Vivo

O presente protocolo descreve a indução de encefalomielite autoimune experimental em um modelo de camundongo utilizando glicoproteína de oligodendrócitos de mielina e monitorando o processo da doença usando um sistema de pontuação clínica. Os sintomas experimentais relacionados à encefalomielite autoimune são analisados usando tomografia microcomputadorizada de fêmur de camundongo e teste de campo aberto para avaliar o processo da doença de forma abrangente.

Indução e Diversos Indicadores de Avaliação da Encefalomielite Autoimune Experimental

Para induzir encefalomielite autoimune experimental, um modelo animal de esclerose múltipla, os ratos são imunizados com uma emulsão de água em óleo contendo um autoantígeno e adjuvante completo de Freund. Embora existam vários protocolos para a preparação dessas emulsões, um protocolo de homogeneização rápido, simples e padronizado para a preparação de emulsões é apresentado aqui.

Um método de homogeneização rápido, simples e padronizado para preparar emulsões de antígenos/adjuvantes para induzir encefalomielite autoimune experimental

A encefalomielite autoimune experimental (EAE) é um modelo animal de esclerose múltipla (EM), que compartilha com a doença humana uma resposta autoimune humoral robusta. Aqui, relatamos um protocolo ELISA simples e flexível para quantificar autoanticorpos no soro de camundongos imunizados com EAE.

Quantificação de anticorpos autorreativos em camundongos após encefalomielite autoimune experimental

Aprenda a induzir encefalomielite autoimune experimental em camundongos resistentes usando transferência adotiva de células de linfonodo estimuladas com antígenos de mielina. Este método permite superar mecanismos de resistência e estudar doenças autoimunes.

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Superando indiferença em Encefalomielite autoimune experimental (EAE) linhagens mais resistentes por transferência adotiva e desafio antigênico

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