Name: Protocolo de treinamento de resistência e Ensaios de desempenho longitudinal para Drosophila melanogaster (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 49 s
Description: Aprenda um protocolo de treinamento de resistência para Drosophila melanogaster usando dispositivo automatizado. Este método avalia efeitos do exercício na mobilidade e capacidade de escalada das moscas.

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1. Instalação e Operação Power Tower <ol><li> A torre de energia é colocado sobre uma peça rectangular de contraplacado que é fixada a uma tabela. A 4,5 engrenagem rpm do motor de Grainger repousa em cima de quatro 2 &quot;x6&quot; tábuas e uma placa de madeira compensada de ¾ de polegada. O motor, um controle de velocidade AC / DC, um fusível e uma chave liga / desliga estão ligados entre si em uma caixa de junção. </li><li> Para resfriar o motor, um buraco de 3 polegadas de diâmetro é cortado em uma peça vertical ½ polegada de madeira compensada. Por um lado, um ventilador de 3 polegadas está ligado ao contraplacado, e por outro lado, um de 3 polegadas de diâmetro do cilindro de metal está ligado. </li><li> Um braço feito por medida com um rolo rotativo montado na extremidade está ligada ao motor. O motor eo braço ligado girar no sentido horário, empurrando de um lado de um estoque de tubo dobrado ¾ polegada quadrada que está ligado à madeira compensada com uma dobradiça de porta. Uma roda está ligado ao lado de topo do material do tubo abaixo da plataforma para permitir que ele rolo contra a plataforma que é dirrectamente acima dela. </li><li> O braço empurra para baixo sobre uma extremidade do tubo de estoque e levanta a extremidade oposta, levantando uma plataforma de dois níveis (Figura 1D). Quando o rolo sobre o braço limpa o estoque tubo que permite o retorno do braço para a posição de partida, soltando a plataforma de volta para baixo (Figura 1F). </li><li> As plataformas consistem em racks que são colocados no topo de madeira compensada e fixado por cabos elásticos que são enganchadas olhos de parafuso. As plataformas de deslizar para cima e para baixo ao longo sliders gaveta que estão ligados à madeira compensada com colchetes. </li><li> Os frascos são colocados nas prateleiras e protegido por uma tela grade quadrada que é realizada no local com cordas elásticas. </li><li> Uma almofada de isopor é colocado embaixo da plataforma para amortecer o choque da queda. </li><li> A potência do motor é ajustada de tal modo que um período total de rotação é de 15 segundos de duração. </li></ol> 2. Protocolo de exercício <ol><li> As moscas são alojados em um 25 ° C incubadora com 50% de humidade e uma luz de 12 horas / daciclo rk. Tanto o treinamento físico e avaliação da capacidade de exercício são realizadas em uma sala de 25 ° C com temperatura controlada. </li><li> As moscas são recolhidos e idade combinados dentro de 1-2 dias de cada outro. Um mínimo de 240 moscas é necessária para o acompanhamento longitudinal de geotaxis resistência e negativos (subida) de habilidade, dois indicadores fisiológicos que refletem os efeitos do treinamento físico. Acompanhamento longitudinal permite o isolamento de mudança induzida em relação aos valores iniciais para cada coorte, sem efeitos de confusão de variação entre as coortes. Moscas para experimentos adicionais devem ser recolhidos, conforme necessário. </li><li> Após a recolha, as moscas são divididos em 120 moscas experimentais, os quais serão submetidos ao regime de exercício, e 120 moscas de controlo, que não vai ser exercida. As moscas são armazenadas em frascos de 20 moscas cada. Os frascos de moscas experimentais estão conectados com Flugs empresa de acetato de celulose e os frascos de controle (unexercised) moscas estão conectados com spo maciorolhas ESL, os quais podem ser empurradas para baixo para imobilizar as moscas, enquanto na torre de energia. Esponja é usado para a imobilização, porque o seu tamanho adaptativa permite uma fácil colocação perto do fundo do frasco. O material mais macio esponja também reduz os danos causados ​​pelas Flugs mais sólidos. </li><li> Moscas sobre a torre de energia são armazenadas e exercido em frascos que contêm 5 mL do alimento, que lhes proporciona um suave pouso de moscas que são exercidas em frascos vazios. O alimento é tipicamente composto por sacarose a 10%, 10% de levedura, e agar a 2% em água, embora não se observa moscas para comer, muitas vezes durante o curso de uma sessão de treino. Se frascos vazios são utilizados durante a formação, a percentagem de moscas que sofrem de lesões é dramaticamente aumentada. </li><li> A torre de energia é operado numa sala com temperatura controlada que é mantida a 25 ° C. Moscas experimentais são colocados sobre a torre de energia e fez subir. Moscas de controle também são colocados na torre de energia, mas a rolha de esponja é pushed para baixo para dentro do frasco de aproximadamente 3 mm acima das moscas, a fim de limitar o movimento. Este grupo serve como um controle para todos os efeitos da torre de energia que não estão relacionados ao exercício. Apesar de algum espaço ainda existe para estas moscas de manobra, temos observado repetidamente que as moscas sob estas condições executar muito pouco e não demonstram uma resposta fisiológica ao exercício. Pode também ser desejável incluir um grupo de controlo adicional que não é colocada sobre a torre de energia de todo. </li><li> As moscas são exercidos cinco dias consecutivos cada semana, utilizando uma programação em rampa (Figura 2). Durante uma semana as moscas são exercidas por 2 horas por sessão por semana, dois para 2,5 horas por sessão, e três semanas para 3 horas por sessão. Embora outros regimes foram testados, este protocolo produz resultados consistentes em genótipos e sob condições diferentes. Este protocolo é, no entanto, sujeitas a uma ampla gama de variações possíveis que possam atender uma experiência particular. </li></ol><pclass = &quot;jove_title&quot;&gt; 3. Exercício e Fadiga Locomotor <ol><li> Hora de fadiga durante o exercício de resistência é um indicador útil fisiológico para confirmar e / ou quantificar a capacidade de exercício de uma determinada coorte. Os ensaios de fadiga pode ser realizada longitudinalmente sobre coortes que serão utilizados em experiências de formação. Ensaios podem ser realizados, quer antes da formação, após a conclusão do protocolo de formação, ou ambos. Outros momentos intermediários podem ser adicionados se traçar o progresso incremental durante o treinamento é desejada. O ensaio de fadiga pode também ser usado para medir a resistência do exercício como uma resposta a outros tratamentos do que o protocolo de formação, tais como alteração dieta (Figura 3B). </li><li> Ensaios de fadiga deve ser conduzida em um dia quando o treinamento não está ocorrendo. Tanto o moscas experimentais e de controlo são colocados sobre a torre de energia em frascos de 20 cada um e feito subir até desgastado. A fadiga é reconhecida como a falta de resposta a um estímulo negativo com a escalada geotaxis sercomportamento. Comportamento à fadiga é pontuada pela observação visual. </li><li> Um frasco de moscas é considerado &quot;cansado&quot; quando 5 ou menos moscas são capazes de subir mais de 2 centímetros por quatro quedas consecutivas. Frascos fadiga são removidos da torre de energia ao mesmo tempo que ainda está em funcionamento, eo tempo de remoção é gravado. Tempos de remoção podem ser representados como um histograma aninhada, ou como um &quot;tempo até a falha&quot; enredo. Um exemplo dos dados plotados como um &quot;tempo até a falha&quot; trama é mostrada na Figura 3B. </li><li> Os frascos são monitorizados a intervalos de 10 minutos para um máximo de 10 horas (Figura 3B). </li></ol> 4. Da capacidade de exercício, à Idade e Locomotor <ol><li> Uma vez que este protocolo de treinamento se baseia no comportamento executando induzido, um ensaio preliminar para quantificar efeitos do treinamento é longitudinalmente medir a mudança na velocidade média de corrida durante o treino. Durante o curso de formação, 120-mosca coortes de moscas exercitados e unexercised são testados diariamente para a sua resposta a um negativo geotaxis stimulus. A técnica descrita no ANEL Gargano et al. (2005) é usado para medir a capacidade das moscas escalar 12. Resumidamente, esta técnica mede a altura média escalada por um frasco de moscas durante um tempo definido após a indução da geotaxis negativos. A altura subiu durante um tempo definido é equivalente a escalada de velocidade. As medições são realizadas antes de colocar na máquina de moscas para a formação diária, de modo a evitar as complicações de fadiga após longo do dia. </li><li> No nosso protocolo padrão, as moscas são exercidas por um total de três semanas e capacidade de escalada é examinada para um total de cinco semanas: três semanas durante o exercício de formação e de duas semanas após a cessação do exercício (Figura 2). Isto permite que o experimentador para traçar se os efeitos de exercício sobre a mobilidade persistir após a cessação do programa. </li><li> Quatro fotografias de desempenho de cada coorte ANEL diariamente são usados ​​para a análise da capacidade de escalada. Seis frascos são incluídos em cada fotografia. G Negativoeotaxis é induzida, e usando uma câmara temporizado, uma fotografia é tirada após um número definido de segundos. Nós normalmente usam dois segundos, embora este possa ser variado dependendo das condições experimentais. Para cada fotografia, cada frasco é dividido em quatro quadrantes de igual altura, e software de processamento de imagem é usada para atribuir a cada mosca uma pontuação baseada no quadrante chegou dentro do prazo estipulado. Moscas que sobem para o quadrante superior recebem uma pontuação de 4, voa no quadrante mais elevado seguinte recebe a 3, voa no quadrante segundo maior receberá a 2, e as moscas no menor quadrante receber um 1. As moscas que não escalar fora do fundo em todos recebem uma pontuação de 0. </li><li> Para cada frasco em uma dada fotografia, um &quot;índice de escalada&quot; é gerado pela média das pontuações de todas as moscas nesse frasco. Índices de cada frasco a partir dos quatro fotografias se então a média para dar um índice de escalada final para esse dia. </li><li> Todos os experimentos são conduzidos geotaxis negativos longitudinaldinally. Os resultados são normalizados para a inicial &quot;pré-exercício&quot; pontuação a fim de reduzir o efeito da variação na capacidade de escalada coorte e realçar a mudança relativa longitudinal da capacidade de escalada de uma coorte como o resultado da formação de exercício. A pontuação inicial é determinada pela média dos índices os três primeiros dias de escalada e é atribuído um valor de 1. Ensaios subsequentes são então expressos como uma percentagem do índice inicial. </li></ol> 5. Os resultados representativos Tipo selvagem moscas responder a um protocolo de resistência com uma diminuição relacionada com a idade reduzida em capacidade de escalada, que persiste após o fim do treinamento, como refletido nos ensaios ANEL longitudinal ao longo de cinco semanas de idade (Figura 3A). Esta descida retardada em geotaxis negativos é um padrão de resposta fenotípica que pode servir como um controlo positivo para assegurar que a resposta de tipo selvagem exercício está ocorrendo normalmente. Este conjunto de dados é apresentado como um exemplo de como oindução de exercício pelo programa torre de energia pode ser utilizada como uma entrada comportamental. A capacidade de vários factores genéticos ou ambientais que modulam este efeito pode então ser avaliado. Inversamente, a torre de energia pode também ser usado como uma saída em vários modelos experimentais. Por exemplo, a dieta do genótipo, ou outras condições pode ser variada. Em seguida, o efeito destas variações na fisiologia do exercício pode ser testado usando o torre de energia. Aqui, vamos mostrar um exemplo desta abordagem. Quando as moscas com uma percentagem variando de sacarose nas suas dietas foram testadas para o tempo para a fadiga teor de sacarose, aumento correlacionada com a capacidade de resistência aumentada (Figura 3B). <img alt="A Figura 1" src="/files/ftp_upload/3786/3786fig1.jpg" /> Figura 1. Operação da torre de energia. (AC) O braço curvado motorizado com rolo acoplado gira no sentido horário, até que entra em contacto com o tubo dobrado quadrado. (D, E) Abraço empurra para baixo sobre o tubo dobrado quadrado, fazendo com que a plataforma que é carregado com frascos de moscas para levantar. (F) À medida que o braço limpa o tubo a plataforma é deixado cair de volta para baixo, forçando as moscas para retornar para o fundo do frasco. <img alt="A Figura 2" src="/files/ftp_upload/3786/3786fig2.jpg" /> Figura 2. Sugerida protocolo de exercício. Voa submetido ao protocolo de formação são feitas para exercer durante cinco dias por semana sob um regime de três semanas longo rampa que aumenta progressivamente a duração do exercício das inicial de 2 horas por 30 minutos em cada semana. Análises padrão incluem ensaios de fadiga antes e após o programa de exercícios e ensaios de ANEL de semana de 1 a 5 semanas. Todos os ensaios são realizados em duplicado em um número igual de moscas não exercidas como um controlo negativo. Outros vários testes fisiológicos ou bioquímica pode ser conduzida como determinado pelo investigador. <img alt = &quot;Figura 3&quot; src = &quot;/ files/ftp_upload/3786/3786fig3.jpg&quot; /&gt; Figura 3. Exercícios de resistência altera vários aspectos da mobilidade. (A) DE ANEL ensaios realizados longitudinalmente em idades em um único par de anos Masculino 1 W 67C23 coortes. Pareados por idade, geneticamente idênticos exercido e moscas de controle não exercidas foram medidos diariamente para a velocidade escalar média. Os resultados são expressos em termos de um índice de escalada que é normalizado para a altura média subir através dos primeiros três dias de medição. Exercício treinados moscas exibido um declínio age-related diminuição na capacidade geotaxis negativo em comparação com pareados por idade irmãos exercitada em toda as idades (2-way ANOVA, p &lt;0,005). (B) os ensaios de fadiga realizados por 8 horas sobre a idade-pareado moscas fêmeas Canton S mostram um efeito significativo do teor de sacarose na dieta sobre o tempo de fadiga (Log-rank, p &lt;0,0001). Antes da experiência, as moscas foram alimentados com uma dieta de levedura sacarose / / ágar, com 10% do peso / volume simconcentração r, e uma percentagem variando de sacarose dietética. Cinco frascos de 20 moscas cada foram testados para cada dieta. Gráfico mostra quantos frascos ainda tem cinco ou mais moscas rodando em um ponto determinado momento. Estes resultados podem ser tratados estatisticamente e graficamente como uma sobrevivência (ou tempo até a falha) curva, com o &quot;fracasso&quot; de um frasco a ser definido como um momento em que menos de cinco moscas continuam a responder a estímulos geotaxis negativo. Note-se que muitos outros desenhos de estudo possíveis e tratamentos estatísticos são possíveis, e tratamento de dados e de medição devem ser adaptados para atender objetivos individuais.

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</ol>

Não tenho nada para revelar.

O protocolo geral aqui apresentado tem sido bem sucedida em documentar efeitos fisiológicos após o treinamento. No entanto, diversas áreas deste protocolo estão sujeitos a modificações para se adequar às necessidades particulares experimentais. Por exemplo, o comprimento de formação eo número de ataques poderia potencialmente ser variado para tornar o programa mais ou menos exigente, como desejado. A altura do recipiente no qual a capacidade geotaxis negativo é medido pode ser alterado para aumentar a área disponível para a melhoria a ser documentada. Vários métodos de automatizar a quantificação da escalada de velocidade pode também ser aplicável. Em princípio, qualquer programa de software capaz de distinguir uma mosca de fundo pode ser usado para acelerar o processo de coleta de dados. Alguns aspectos do protocolo deve ser modificado apenas com muita cautela, no entanto. Por exemplo, experiências preliminares indicam fortemente que pelo menos um dia de descanso por semana tende a facilitar uma maior improvement de exercício diário incansável. Além disso, os ritmos circadianos ea temperatura são conhecidos por afetar o movimento de animais de sangue frio. O tempo do dia em que ocorre a formação pode ser variado, mas deve sempre ser consistente dentro de determinados grupos sob comparação, a fim de evitar a possibilidade de efeitos de confusão dos ritmos circadianos. O controle da temperatura também é essencial, e recomendamos uma sala dedicada a uma temperatura constante para a casa de equipamentos de exercício. Finalmente, os machos e fêmeas devem ser criados e medidos separadamente, a fim de evitar o potencial de efeitos de confusão de fertilidade e sexo diferenças na capacidade de exercício. As aplicações potenciais desta metodologia são limitadas apenas pela imaginação do pesquisador. Em trabalho preliminar, que têm utilizado esta metodologia em três amplas aplicações: <ol><li> Para medir o efeito do exercício de endurance sobre vários aspectos da biologia de tipo selvagem de toda as idades. </li><li> Tó medir o efeito do exercício de endurance sobre específicas fenótipos mutantes. </li><li> Para filtrar por fatores genéticos, que são necessárias para executar os benefícios do exercício </li></ol> Cada uma destas aplicações abrange uma grande variedade de possibilidades específicas. Com base em nossa experiência preliminar, fenótipos mutantes tendem a variar com o nível de exercício, tanto como eles variam com a dieta. O uso de modelos invertebrados para entender melhor a relação entre dieta, exercício e fisiologia do envelhecimento é talvez a mais importante aplicação geral do presente protocolo.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários </td></tr><tr><td> Dayton Motoredutor </td><td> Grainger </td><td> 1LRA6A </td><td></td></tr><tr><td> Raco caixa elétrica </td><td> Grainger </td><td> 5A052 </td><td></td></tr><tr><td> Raco Capa </td><td> Grainger </td><td> 5A053 </td><td></td></tr><tr><td> Cooper Bussmann Fuse </td><td> Grainger </td><td> 6F043 </td><td></td></tr><tr><td> Cooper Bussmann Suporte de Fusível </td><td> Grainger </td><td> 1DD33 </td><td></td></tr><tr><td> Carling Technologies Mudar </td><td> Grainger </td><td> 2X464 </td><td></td></tr><tr><td> Dayton controle, velocidade AC / DC </td><td> Grainger </td><td> 4X796 </td><td&gt; </td></tr><tr><td> Flugs para estreitos tubos plásticos </td><td> Genesee Científico </td><td> 49-102 </td><td></td></tr></tbody></table>

protocolo de treinamento de resistência e ensaios de desempenho longitudinal para drosophila melanogaster

Endurance Training Protocol and Longitudinal Performance Assays for Drosophila melanogaster

Um dos problemas mais prementes das modernas pesquisas médicas são os níveis de afluência de obesidade, com o conseqüente aumento nas doenças associadas, como diabetes e doenças cardiovasculares 1-3. Um tópico importante de investigação sobre esses problemas de saúde associados envolve o papel do exercício de endurance como uma intervenção benéfica. O exercício físico é um barato, a intervenção não-invasiva com vários resultados benéficos, incluindo redução no excesso de gordura corporal 4, aumento da sensibilidade à insulina em músculo esquelético 5, aumentou respostas anti-inflamatórias e antioxidantes 6 e capacidade contrátil melhor em cardiomiócitos 7. Exercício de baixa intensidade é conhecido por aumentar a actividade mitocondrial e biogénese em humanos e ratinhos 8, com a coativador transcricional PGC1-α como um intermediário importante 9,10. Despite a importância do exercício como um instrumento para combater a vários importantes doenças relacionadas à idade, extensivos estudos longitudinais genéticas têm sido dificultado pela falta de um protocolo de treinamento de resistência por algumas espécies de vida curta modelo genético. A variedade de ferramentas genéticas disponíveis para uso com Drosophila, juntamente com a sua manutenção e vida útil curta barata, torná-lo um modelo atraente para um estudo mais aprofundado destes mecanismos genéticos. Com isto em mente, desenvolvemos um novo aparelho, conhecido como a torre de energia, em larga escala exercício de treinamento em Drosophila melanogaster 11. A torre de energia utiliza o comportamento das moscas geotaxis instintivo negativo para induzir repetidamente escalada rápida. Cada vez que os elevadores da máquina, em seguida, cai, a plataforma de moscas, as moscas são induzidos a subir. Moscas continuar a responder, enquanto a máquina está em funcionamento ou até que se tornem demasiado fatigado para responder. Assim, o pesquisador pode utilizar essa máquina para fornecer streinamento imultaneous a um grande número de moscas pareados por idade e geneticamente idênticas. Além disso, descrevemos ensaios associados úteis para acompanhar o progresso longitudinal das coortes mosca durante o treinamento.

Nós descrevemos o protocolo primeiro treinamento de resistência para um importante modelo genético de espécies,<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt;, E delinear ensaios de vários traçar melhorias no treinamento seguinte mobilidade.

Protocolo de treinamento de resistência e Ensaios de desempenho longitudinal para Drosophila melanogaster

Um dos problemas mais urgentes enfrentados pelos pesquisadores médicos modernos são os níveis crescentes de obesidade, com o consequente aumento dos distúrbios associados...

O objetivo do experimento a seguir é treinar Dsof e Melanogaster utilizando um novo programa de exercícios aeróbicos e avaliar os efeitos do treinamento físico. Isso é realizado por meio de um dispositivo automatizado que levanta e abaixa repetidamente vários tubos contendo moscas, ativando assim a resposta instintiva de escalada das moscas e proporcionando-lhes uma sessão de exercício. As moscas são treinadas diariamente em um regime progressivo de duas a três horas ao longo de um período de treinamento de três semanas.Em seguida, moscas são submetidas a vários ensaios comportamentais para medir os efeitos do exercício. Os resultados mostram que moscas que se exercitam sobem mais rapidamente, conforme medido pelo ensaio de anel ou por eixo geoaxial negativo rapidamente induzido. A principal vantagem desta técnica em relação a métodos existentes, como o treinamento de resistência em outros animais, é a extensa coleção de ferramentas disponíveis para manipulação da genética de drosophila.No estudo do exercício de resistência, tivemos pela primeira vez a ideia deste método enquanto realizávamos diversos ensaios de geotaxia negativa simples. Perguntamo-nos quanto tempo as moscas conseguiriam continuar subindo e se poderíamos treiná-las em resistência dessa forma. A torre de potência é construída sobre uma peça retangular de madeira compensada que é presa a uma mesa.Um motor com engrenagem gira a 4,5 rotações por minuto. O motor com engrenagem repousa sobre várias placas e está ligado a um controle de velocidade, um fusível e um interruptor de energia. Em uma caixa de junção, um ventilador de três polegadas fixado em um tubo metálico é direcionado para o motor para resfriamento.Conectado ao motor há um braço rotativo com um rolo. Na extremidade, o motor e o braço giram, empurrando para baixo um dos lados de uma haste curvada que está presa ao compensado. Com uma dobradiça de porta no outro lado da haste, uma roda é fixada de modo que possa rolar contra uma plataforma.Move-se para cima e para baixo enquanto o motor gira, sendo a potência do motor ajustada de modo que um período rotacional completo dure 15 segundos. Na plataforma, suportes para tubos de ensaio são fixados por cordas elásticas, e os tubos colocados nesses suportes são presos com uma tela também ligada à plataforma. Por meio das cordas elásticas, a plataforma pode deslizar para cima e para baixo ao longo de guias deslizantes padrão, e uma almofada de isopor amortece o impacto da queda. A torre de potência é operada em uma sala com temperatura controlada, para corresponder às condições em que os animais são criados.Para realizar um experimento de exercício, são necessários no mínimo 240 moscas machos com idade correspondente para o monitoramento longitudinal da resistência e da capacidade de resposta negativa ao geotaxismo, ou habilidade de escalada. Mantenha as moscas em populações de 20 por frasco. Divida os frascos em dois grupos de tamanho igual, sendo que um deles será submetido ao exercício; os frascos desse grupo devem ser tampados com rolhas de algodão, enquanto o grupo controle deve ser tampado com rolhas de esponja.Uma esponja é usada para imobilização porque seu tamanho adaptável permite colocação fácil próximo ao fundo do frasco. O material mais macio da esponja também reduz lesões causadas pelos flugs mais rígidos. Os frascos de alimento devem ser substituídos a cada dois dias antes do teste.Durante o treinamento, as moscas permanecem nos frascos de alimento porque, se forem usados frascos vazios, muitas mais moscas sofrem lesões relacionadas ao treinamento. Ao carregar os frascos das moscas controle na torre de potência, empurre os tampões de esponja para cerca de três milímetros acima do nível do alimento, limitando assim as moscas.Movimento para resultados consistentes. Teste ambos os grupos de moscas por cinco dias consecutivos por semana, utilizando um cronograma progressivo que aumenta o tempo por sessão de duas para três horas por dia ao longo de um período de três semanas. É claro que qualquer regime pode ser empregado.A consistência no tratamento, horário do dia e métodos de ensaio ao longo de um período de três semanas é essencial. Um agendamento cuidadoso e procedimentos de prática reduzem a possibilidade de erros e fadiga. Os ensaios podem ser realizados longitudinalmente em moscas antes, após ou durante o regime de treinamento.Ele também pode ser utilizado para avaliar a resposta a uma variável ambiental de forma mais segura. Realize o ensaio de fadiga em um dia em que o treinamento não esteja ocorrendo. No início do dia, carregue ambos os grupos de moscas na torre de potência.Ative o aparelho e observe cada frasco a cada 10 minutos. Se, em quatro quedas consecutivas, cinco ou menos moscas em um frasco subirem mais de dois polegadas, então esse grupo de moscas é considerado fatigado. Remova as moscas fatigadas da torre de potência enquanto ela ainda estiver em funcionamento e registre o horário em que foram removidas.Observe todos os tubos de ensaio por um período máximo de 10 horas e compile os resultados. Um ensaio para quantificação. Os efeitos do treinamento consistem em uma medida diária da velocidade de corrida, que pode ser realizada durante todo o regime de treinamento e além dele.Para medir o efeito de longo prazo do treinamento. Para iniciar o ensaio de velocidade de escalada ou do anel, transfira primeiro as moscas para tubos novos e vazios e coloque uma fileira de seis tubos em um suporte para tubos. Pedaços de fita enrolados são usados para fixar os tubos ao suporte.Em seguida, posicione o suporte diante de uma fonte de luz, como uma caixa de visualização de raios X que forneça iluminação uniforme dos frascos. Agora, configure uma câmera para fotografar o suporte de modo que a posição de cada mosca seja visível em cada frasco. Em seguida, bata nos seis frascos para derrubar todas as moscas até o fundo dos mesmos e tire uma fotografia cronometrada.Dois segundos após as moscas serem todas derrubadas. Se o flash da câmera for usado, ele deve ser utilizado de forma consistente. Repita este processo quatro vezes para cada conjunto de frascos antes de prosseguir com a torre de potência.Para analisar os dados, pontue cada foto individualmente usando um software para identificar os limites superior e inferior do frasco. Em seguida, meça a altura da subida de cada mosca. Depois, copie as alturas de subida para o Excel.A cada mosca em cada frasco é atribuída uma pontuação de zero a quatro, correspondente à altura do quadrante alcançado. Elas recebem quatro pontos ao alcançar o quadrante mais alto e zero caso não subam. Para cada frasco, calcule a pontuação de cada uma das 20 moscas e obtenha a pontuação média do grupo.Isso é chamado de índice de escalada. A média dos quatro índices de escalada de cada coorte naquele dia é utilizada para a análise dos dados. Se o software de processamento de imagens não estiver disponível, linhas de quadrantes podem ser desenhadas nos frascos vazios, e as moscas podem ter seus valores de quadrante atribuídos manualmente, enquanto moscas do tipo responderam a um protocolo de resistência com uma diminuição na declinação relacionada à idade na capacidade de escalada.Isso persistiu após o término do treinamento, conforme demonstrado em ensaios longitudinais em anel ao longo de cinco semanas de idade. Assim, a indução de exercício pelo programa da torre de potência pode ser utilizada como uma entrada comportamental, e a capacidade de fatores genéticos ou ambientais de modular esse efeito pode ser avaliada. Inversamente, a torre de potência também pode ser usada como uma saída.Por exemplo, quando moscas com uma porcentagem variável de sacarose em sua dieta foram testadas quanto ao tempo até a fadiga, observou-se que o aumento no teor de sacarose correlacionou-se com maior capacidade de resistência. Ao realizar este procedimento, é importante garantir que todos os grupos de moscas tenham a mesma idade e que os métodos sejam realizados de maneira consistente ao longo do experimento.Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como realizar o treinamento de resistência e avaliar moscas de qualquer genótipo.

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