Name: Protocolo para Longa Duração Hipertermia corpo inteiro em Ratos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-25T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 10 s
Description: Aprenda a induzir hipertermia corporal total em camundongos por 12-24 horas para estudar respostas imunológicas e fisiológicas. Este protocolo padronizado facilita pesquisas em neurociência e imunidade.

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1. Ética animais Antes de realizar a hipertermia longa duração em camundongos certifique-se de que o procedimento tenha sido aprovado pelo Animal Care Institucional e Comitê de uso. Todos os procedimentos discutidos neste papel e mostrado no vídeo que a acompanha foram aprovados pelo Comitê de Ética Animal Institucional do Instituto Nacional de Imunologia. 2. Hipertermia entendimento A hipertermia do corpo inteiro (WBH) é entregue ao colocar os animais em gaiolas de pré-aquecido que são colocados na incubadora mantida a 39,5 ° C. Durante a padronização do protocolo, um sensor de temperatura foi implantado cirurgicamente nos murganhos e a temperatura corporal foi monitorizada em diferentes condições experimentais. Observou-se que, ao colocar os animais num ambiente aquecido, a sua temperatura aumentada gradualmente a partir de 37 ° C a até 42 ° C ao longo da duração de 100 minutos (Figura 1). The resultando &quot;spike&quot; de temperatura é intrigante que a temperatura interna do corpo disparado ainda maior do que a temperatura externa do ambiente. Quando a temperatura corporal superior a 40 ° C, o animal iria mostrar sinais de stress e de desidratação, tais como agentes molhantes em volta do focinho. Aumentar a temperatura corporal acima de 40 ° C, conduzirá a molhar e estresse irreversíveis ou até a morte dos animais, devido ao estresse térmico. Por isso, é importante para evitar os picos de temperatura durante o curso de hipertermia. Este fenómeno de picos de alta temperatura está associada com a hiperactividade física do animal durante a exposição a hipertermia. Picos de temperatura semelhantes foram observados por outros grupos e também foram associados com a hiperactividade física do animal ao ser introduzida a atmosfera com temperaturas mais elevadas 10. No nosso protocolo, os ratos são imobilizados durante a exposição a hipertermia. Comomostrado na Figura 2, a imobilização do animal, impede que os picos de temperatura. Temos usado 8-12 semanas de idade BALB / Cj ratos para demonstrar esse protocolo. O protocolo não está restrita a um tipo particular / estirpe de ratos. 3. Preparando-se para o Experimento 3,1 Incubadora Esta experiência pode ser realizada em uma incubadora de CO 2 normal, uma vez que têm um bom controlo da temperatura. Desligue fornecimento de gás CO 2 e remova bandeja de retenção de água da incubadora de CO2. Em alguns modelos de incubadoras, é possível desligar o controlador 2 CO. Organizar prateleiras da incubadora a fim de que a gaiola de ratos pode ser colocado convenientemente no interior. Definir a temperatura da incubadora a 39,5 ° C. 3,2 Gaiolas Tipicamente, o ensaio é realizado a hipertermia em 4 ratinhos de cada vez. Duas gaiolas são obrigatórios; noe é colocado dentro da incubadora e o outro é colocado no exterior, à temperatura ambiente. Cama de gaiolas é evitada, tal como os adesivos de cama seja molhada com o tempo o que resulta na não-uniforme da temperatura no interior da gaiola. A gaiola exterior deve ter peletes alimentares e da garrafa de água. 3,3 Ratos tubos de imobilização Durante o curso de primeiros 4 ciclos de ratinhos hipertermia são imobilizados em tubos perfurados. Estes tubos de imobilização pode ser feita a partir de 50 &#39;de centrifugação&#39; ml por tubos de perfuração 3 furos milímetros em todo o seu corpo, e quatro de tais tubos será necessária. O tubo de 50 ml pode convenientemente imobilizar BALB / Cj ratos que estão com mais de 8 semanas. Os tubos de tamanhos apropriados pode ser necessária para alguns estirpe invulgarmente diferente de ratos ou ratinhos para os quais são muito jovens ou mais velhos do que 50 semanas. Colocar os tubos de imobilização e uma gaiola dentro da incubadora mantida a 39,5 ° C. Espere até que, pelo menos, duas horas, de modo que a gaiola e itubos mmobilization atingir a temperatura da incubadora. 4. Primeiro ciclo da hipertermia Ratos podem sofrer uma desidratação durante a exposição hipertermia. Portanto, antes de iniciar o experimento, administrar 0,5 ml de solução salina normal, por via intraperitoneal a cada rato. Use uma agulha de 26 G com uma seringa ml. Assumir rapidamente a gaiola colocado na incubadora, o local de um animal de cada um de tubos de imobilização e colocar a gaiola de volta na incubadora. Registrar o tempo. É essencial manter a gaiola no mesmo local na incubadora de cada vez. Depois de 90 minutos, retire a gaiola da incubadora. Libertar os animais a partir dos tubos de imobilização e colocá-los na gaiola, à temperatura normal com um fácil acesso a comida e água. Coloque os tubos de imobilização vazios de volta na incubadora. Após 15 minutos, o segundo ciclo de hipertermia é iniciado através da apresentação de 0.5 ml de solução salina por via intraperitoneal a cada rato. Em seguida, são imobilizadas em tubos de 50 ml de imobilização perfurados e colocado na incubadora. 5. Ciclos subsequentes Hipertermia Para os primeiros quatro ciclos, que é essencial para imobilizar ratos durante a exposição, a hipertermia e para os dois primeiros ciclos, a injecção é dada solução salina antes de se iniciar o período de hipertermia. Após estes ciclos de hipertermia seguidos de descanso são concluídas, os ratos obter aclimatar e não se tornar hiperativo durante a exposição hipertermia. A injecção intraperitoneal de soro fisiológico não pode ser necessário se ratinhos prontamente tomar alimentos e água, durante o tempo de repouso. 6. Depois de todos os ciclos completos, o último passo é examinar os Animais Não deve haver nenhuma morte durante os ciclos de hipertermia. Cada animal tem que ser visto com muito cuidado no primeiroalguns ciclos. Rapidamente olhar para qualquer molhar ao redor do focinho. Este sintoma é uma assinatura de desidratação. Ratos com tais sintomas deve imediatamente ser dado 0,5 ml de solução salina normal IP e descansar em temperatura ambiente. A maioria dos ratos imobilizados não vai exigir qualquer tratamento adicional e vai conseguir suportar o stress a hipertermia. Depois de completar os ciclos necessários, os animais podem parecer fraco e desidratado, mas eles vão se recuperar rapidamente em poucas horas. <img src="/files/ftp_upload/3801/3801fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. Variação da temperatura corporal central de ratinhos quando a gaiola foi colocada numa incubadora a 39,5 ° C. Após 90 min a gaiola foi removido da incubadora e colocadas a 25 ° C. Círculos vermelhos indicam picos de alta temperatura. <img src="/files/ftp_upload/3801/3801fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2. Variação da temperatu corpo do núcleore de uma Ratos imobilizados durante os ciclos de hipertermia. Após a imobilização do animal, picos elevados temperaturas não foram observar quando a gaiola foi colocada a 39,5 ° C.

<ol><li>Braude, A. I., Beck, J., Zalesky, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Febrile+response+to+bacterial+pyrogens+in+leukemia%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Febrile response to bacterial pyrogens in leukemia.</a> Blood. 16, 1279(1960).</li>
<li>Dovern, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hyperthermic+intraperitoneal+chemotherapy+added+to+the+treatment+of+ovarian+cancer.+A+review+of+achieved+results+and+complications%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Gynaecol.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Hyperthermic intraperitoneal chemotherapy added to the treatment of ovarian cancer. A review of achieved results and complications.</a> Eur. J. Gynaecol. Oncol. 31, 256(2010).</li>
<li>Gaworek, J., Mayer, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+whole+body+hyperthermia+in+oncology%3A+fatal+heat+for+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Pflege.+Z%22%5BJournal%5D)">Systemic whole body hyperthermia in oncology: fatal heat for tumor cells.</a> Pflege. Z. 56, 15(2003).</li>
<li>Hegewisch-Becker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+whole+body+hyperthermia+%2841.8+degrees+C%29+on+the+frequency+of+tumor+cells+in+the+peripheral+blood+of+patients+with+advanced+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Effects of whole body hyperthermia (41.8 degrees C) on the frequency of tumor cells in the peripheral blood of patients with advanced malignancies.</a> Clin. Cancer Res. 9, 2079( ).</li>
<li>Jia, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+B16+murine+melanoma+metastasis+and+enhancement+of+immunity+by+fever-range+whole+body+hyperthermia%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Hyperthermia%22%5BJournal%5D)">Inhibition of B16 murine melanoma metastasis and enhancement of immunity by fever-range whole body hyperthermia.</a> Int. J. Hyperthermia. 27, 275(2011).</li>
<li>Maluta, S., Dall'oglio, S., Nadalini, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+for+intermediate+and+high-risk+prostate+cancer%3A+controversial+issues+and+the+role+of+hyperthermia%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Hyperthermia%22%5BJournal%5D)">Treatment for intermediate and high-risk prostate cancer: controversial issues and the role of hyperthermia.</a> Int. J. Hyperthermia. 26, 765(2010).</li>
<li>Moyer, H. R., Delman, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+hyperthermia+in+optimizing+tumor+response+to+regional+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Hyperthermia%22%5BJournal%5D)">The role of hyperthermia in optimizing tumor response to regional therapy.</a> Int. J. Hyperthermia. 24, 251(2008).</li>
<li>Muthana, M., Multhoff, G., Pockley, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumour+infiltrating+host+cells+and+their+significance+for+hyperthermia%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Hyperthermia%22%5BJournal%5D)">Tumour infiltrating host cells and their significance for hyperthermia.</a> Int. J. Hyperthermia. 26, 247(2010).</li>
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<li>Willnow, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+otherwise+incurable+tumor+diseases+in+childhood+using+whole-body+hyperthermia+and+chemotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Dtsch.+Med.+Wochenschr%22%5BJournal%5D)">Treatment of otherwise incurable tumor diseases in childhood using whole-body hyperthermia and chemotherapy.</a> Dtsch. Med. Wochenschr. 114, 208(1989).</li>
</ol>

Não temos nada a revelar.

<html> Já em 5000 aC, os médicos egípcios tratados tumores com o calor. Os gregos reconheceram o valor de calor em alguns tratamentos médicos. Os textos mais antigos da Lei de Moisés menção Hot Springs (Gênesis 36:24) para terapeuticamente elevar a temperatura corporal. As técnicas empregadas anteriores ou o uso de extratos microbianos pirogênicas para a indução de febre ou banhos de água quente para a indução de hipertermia 1. No entanto nenhuma destas abordagens podem ser facilme...

<table border="1"><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Termistor </td><td> RS componentes </td><td> 528-8558 </td><td></td></tr><tr><td> CO 2 Incubator </td><td> Heraeus </td><td> B5060 EK-CO2 </td><td></td></tr><tr><td> Ratos gaiolas </td><td> Cidadão Industries Ltd. </td><td></td><td> Tipo B 365X207X190 centímetros </td></tr><tr><td> Alimentação animal </td><td> Provimi Índia </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Garrafa de água para a gaiola </td><td> Fornecedor local </td><td></td><td> Garrafa de vidro </td></tr><tr><td> Ferro de solda </td><td> Solderon, Índia </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 50 ml tubos de centrífuga </td><td> BD Biosciences </td><td> 352070 </td><td></td></tr><tr><td> Cronômetro </td><td> Fornecedor local </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Uma seringa com agulha de 26G ml </td><td> BD Biosciences </td><td> 309602 </td><td></td></tr><tr><td> Salina </td><td> Fornecedor local </td><td></td><td></td></tr></table>

protocolo para longa duração hipertermia corpo inteiro em ratos

Protocol for Long Duration Whole Body Hyperthermia in Mice

A hipertermia é um termo geral utilizado para definir o aumento da temperatura corporal central acima do normal. Muitas vezes, é utilizado para descrever o aumento da temperatura corporal central que é observado durante a febre. A utilização de hipertermia como adjuvante tem emergido como um procedimento promissor para a regressão do tumor no domínio da biologia do cancro. Para este efeito, a exigência mais importante é ter os protocolos de aquecimento fiáveis ​​e uniformes. Nós desenvolvemos um protocolo para a hipertermia (corpo inteiro) em ratinhos. Neste protocolo, os animais são expostos a ciclos de hipertermia durante 90 min seguido por um período de repouso de 15 min. Durante este período, os ratos têm fácil acesso à comida e água. Picos de alta temperatura do corpo dos camundongos durante a primeira ciclos de exposição poucas hipertermia são impedidos por imobilizar o animal. Além disso, a solução salina normal é administrado em primeiro poucos ciclos para minimizar os efeitos da desidratação. Este protocolo pode simular febre como as condições em camundongos até 12-24 horas. Temosusado 8-12 semanas de idade BALB / cJ fêmeas para demonstrar o protocolo.

Este documento descreve um protocolo para a hipertermia de corpo inteiro em camundongos que podem estimular a febre como condições até 12-24 horas.

Protocolo para Longa Duração Hipertermia corpo inteiro em Ratos

A hipertermia é um termo geral utilizado para definir o aumento da temperatura corporal central acima do normal. É frequentemente utilizada para descrever o aumento da temperatura corporal central...

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Neste vídeo, descrevemos um protocolo passo a passo para estudar a insolação por esforço (EHS) em um modelo de camundongo.

Modelo de camundongo com insolação por esforço: um protocolo para estudar os mecanismos subjacentes à insolação por esforço

Este vídeo demonstra o procedimento para induzir convulsões induzidas pelo calor em um camundongo transgênico com mutações genéticas relacionadas à epilepsia, aumentando gradualmente a temperatura corporal em uma câmara controlada. Este protocolo é usado para estudar mecanismos de convulsão e possíveis terapias para epilepsia.

Desencadeando e monitorando convulsões induzidas pelo calor em um modelo de camundongo transgênico

Apresentado aqui é um protocolo para a fabricação de microbolhas com nanopartículas de óxido de ferro (NSMs) através de auto-montagem, sinergizando a capacidade de resposta magnética, acústica e óptica em uma plataforma nanoterapêutica para hipertermia magnética e terapia de câncer de combinação fototérmica.

Microbolhas magnéticas, acústicas e óptica-tripla-responsivas para hipertermia magnética e terapia de câncer de combinação pothototérmica

Este artigo descreve dois métodos de indução de hipotermia de curto período em ratos. O primeiro método de indução rápida, emprega resfriamento ativo usando ventiladores e spray de etanol para uma rápida diminuição da temperatura. O segundo método é um método de resfriamento gradual. Isso é conseguido usando a combinação de anestesia isoflurane e a redução das configurações de temperatura no tapete de calor homeotémico. Isso resulta em uma diminuição gradual da temperatura corporal do núcleo...

Indução de hipotermia de curta duração em ratos usando modelos para estudos que examinam relevância clínica e mecanismos

O protocolo descreve o desenvolvimento de um modelo padronizado, repetível e pré-clínico de insolação exercional (EHS) em camundongos livres de estímulos externos adversos, como choque elétrico. O modelo fornece uma plataforma para estudos mecanicistas, preventivos e terapêuticos.

Um modelo pré-clínico de insolação exercional em camundongos

O objetivo do método é testar para hipertermia ou convulsões induzidas pelo calor em modelos de camundongos. O protocolo descreve o uso de uma câmara personalizada com monitoramento contínuo da temperatura corporal para determinar se a temperatura corporal elevada leva a convulsões.

Uma tela comportamental para convulsões induzidas pelo calor em modelos de epilepsia de mouse

Camundongos e ratos são implantados cirurgicamente com transponders de temperatura remotos e, em seguida, habituados ao ambiente de teste e procedimento. As mudanças na temperatura muscular são medidas em resposta a estímulos farmacológicos ou contextuais na gaiola doméstica ou durante a atividade física prescrita (ou seja, caminhada em esteira a uma velocidade constante).

Medindo a termogênese do músculo esquelético em camundongos e ratos

Este protocolo apresenta técnicas e metodologia necessárias para terapia hipertérmica direcionada em modelos de tumores sólidos. A abordagem aproveita a conversão fototérmica da luz infravermelha próxima por nanobastões de ouro injetados intratumoralmente para induzir o aquecimento localizado dentro do microambiente tumoral.

Induzindo hipertermia leve direcionada em modelos de tumores murinos por meio da conversão fototérmica de luz infravermelha próxima por nanobastões de ouro intratumorais

Parabiótico junção dos dois organismos conduz ao desenvolvimento de um sistema circulatório compartilhado. Neste protocolo, descrevemos os passos cirúrgicos para formar uma conexão parabiótico entre um rato do tipo selvagem e um rato expressando GFP constitutiva.

Parabiose em Ratos: Um protocolo detalhado

Este método foi desenvolvido com o objectivo de proporcionar uma solução de fármaco estável através da artéria carótida, para avaliar a farmacocinética de drogas novas em modelos de rato.

Infusões artéria carótida para farmacocinéticas e farmacodinâmicas Análise de taxanos em Ratos

Aprenda a induzir hipertermia corporal total em camundongos por 12-24 horas para estudar respostas imunológicas e fisiológicas. Este protocolo padronizado facilita pesquisas em neurociência e imunidade.

Protocolo para Longa Duração Hipertermia corpo inteiro em Ratos

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