Name: Ensaio de efluxo do colesterol (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 54 s
Description: Aprenda a quantificar o efluxo de colesterol em células cultivadas usando ensaios bioquímicos. Este método avalia a capacidade de aceptores plasmáticos e fornece insights sobre homeostase lipídica celular.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Este trabalho foi suportado por concessões do National Saúde e Pesquisa Médica do Conselho da Austrália (NHMRC) (526.615 e 545.906) e em parte pelo Programa do Governo de Victoria da OIS. DS é um companheiro de NHMRC.

1. Preparação de [3 H]-colesterol <ol><li> Na hotte, dispensar a quantidade necessária de [3 H] colesterol em um tubo de microcentrífuga 1,5 ml (0,5 uCi (19 kBq) por poço é necessário para um ensaio típico). </li><li> Se [3 H]-colesterol é suspenso em tolueno, secá-la para baixo completamente com N2 gás e ressuspender com etanol a 100% para uma concentração final de 1 uCi (37 kBq / uL Vortex. E ​​misturar bem. </li></ol> 2. Células proteções e Rotulagem colesterol celular Este protocolo foi testado utilizando os seguintes tipos de células: monócitos humanos 4,5, THP-1 humanos monócitos-macrófagos 6,7,8, RAW 264.7 macrófagos murinos 5,9,10,11, células HeLa 12, de veia umbilical humana endotelial As células (HUVEC) e células BHK-21 9, fibroblastos humanos e rato 13,14, células HepG2 humanas hepatocarcinoma 15 e, na forma modificada, a partir de plaquetas &lt;sup&gt; 16. <ol><li> Ressuspender as células e contá-las. Células da placa em 12 poços na densidade final de 0.2x10 6 células por poço em 0,9 ml de meio completo. Células irá continuar a crescer e atingirá 0.8x10 6 células por poço por o tempo da experiência de efluxo. Para as células que não se dividem, tais como diferenciadas células THP-1, a densidade de sementeira deve ser 0.8x10 6 células por poço. Se usando 6 - ou placas de 24 poços, duplo ou metade do número de células por poço, respectivamente. O número de poços deve ser suficiente para determinações quadruplicado para cada condição experimental. </li><li> Se a diferenciação de células THP-1 é necessária, adicionar PMA (concentração final de 0,1 ug / ml) aos meios de comunicação para 48-72 h. </li><li> Adicionar uma pequena alíquota de meios para dentro do tubo de microcentrífuga contendo o [3 H] colesterol. </li><li> Lavar os lados do tubo com os meios de antes da adição de [3 H] colesterol em uma alíquota separada de meio completo (100 uL / poço). </li> &lt;li&gt; Adicionar os meios contendo [3 H] colesterol para os poços com células (volume final por alvéolo é de 1 ml). Se nenhum tratamento de células é necessária antes de rotulagem, as células podem ser colocadas em [H 3] meio contendo colesterol. </li><li> Incubar as células durante 48 horas em cultura de células incubadora (37 ° C CO, 5% 2). </li></ol> 3. Incubação de equilíbrio <ol><li> Após 48 horas de incubação, verificar células ao microscópio. Garantir que eles são saudáveis ​​e estão em confluência de aproximadamente 80%. </li><li> Remova a mídia contendo [3 H] colesterol. Lave as células cuidadosamente com PBS. Repita 3 vezes de lavagem. </li><li> Preparar meios isentos de soro. Se necessário, ativar as células adicionando agonista LXR (como TO-901317 a 1-4 mMol / L) ou AMPc (0,3 mmol / L; para células de origem do mouse apenas) para soro livre-media. </li><li> Adicionar 500 ul de soro meios de comunicação livres para cada poço. </li><li> Incubar durante 18 horas na célula incubadora de cultura (37 ° C CO, 5% 2). </li></ol> &lt;p class = &quot;jove_title&quot;&gt; 4. Incubação efluxo do colesterol <ol><li> Após 18 horas de incubação em meio isento de soro, vá células ao microscópio. Garantir que eles são saudáveis ​​e confluente (mínimo de 80% de confluência). </li><li> Preparar uma solução de colesterol aceitadores de efluxo em meio isento de soro. Exemplos de aceitadores incluem: A apolipoproteína AI (apo AI) (concentração final 10 ug / ml) Lipoproteína de alta densidade (HDL) (concentração final 20 ug / ml) Ciclodextrina (concentração final 200 ug / ml) Plasma (concentração final de 1-2%) </li><li> Lave as células cuidadosamente com PBS. </li><li> Adicionar 250 uL de meios isentos de soro com aceitadores a cada poço. </li><li> Deixar um conjunto de poços para determinar fundo de efluxo (efluxo de mídia livre com soro NO aceitante) </li><li> Incubar as células durante 2 horas em cultura de células incubadora (37 ° C, 5% de CO 2). Duração da incubação pode variar de efluxo 30 min a 8 h, se necessário. </li></ol> 5. Processamento Samples <ol><li> Após 2 horas de incubação verificar células ao microscópio. </li><li> Colete mídia em tubos de microcentrífuga de 1,5 ml. Girar a 14.000 rpm para min 1-10 à temperatura ambiente para remover os restos celulares. </li><li> Transferir 100 uL meios em 7 ml frasco de cintilação. Adicionar 5 ml de gel de Insta-Plus (PerkinElmer) e mistura de vórtice. Armazenar amostras restantes a 4 ° C. </li><li> Colocar as placas no congelador durante 30 minutos. Adicionar 500 uL de dH2O a cada poço. Verificar as células sob microscópio para assegurar que todas as células têm levantada a partir do fundo dos poços. Se ainda aderente, deixe placas com dH 2 O a 4 ° C poços durante a noite ou arranhão. </li><li> Uma vez que todas as células têm levantado, pipetar cima e para baixo para quebrar aglomerados celulares. Transferir 100 uL em frascos de cintilação 7 ml. Adicionar 5 ml de gel de Insta-Plus (PerkinElmer) e mistura de vórtice. Armazenar placas restantes a 4 ° C. </li><li> Coloque frascos de cintilação em contador de cintilação. Configurar contador para contar para [3 H] emunidades DPM. </li></ol> 6. Analisando os resultados <ol><li> A taxa de efluxo de colesterol é geralmente expressa como uma proporção de colesterol movido a partir de células para o aceitador. A fórmula seguinte é utilizado: </li></ol><img alt="Equação 1" src="/files/ftp_upload/3810/3810eq1.jpg" /><ol start="2"><li> O efluxo específica é calculada como a diferença entre o efluxo na presença ou ausência do aceitador (branco). </li></ol><img alt="Equação 2" src="/files/ftp_upload/3810/3810eq2.jpg" /> 7. Linha do tempo <img alt="A Figura 1" src="/files/ftp_upload/3810/3810timeline.jpg" /> 8. Os resultados representativos Um exemplo de um resultado de uma experiência de efluxo de colesterol é mostrado na fig. 1. Nesta experiência THP-1 monócitos humanos foram diferenciadas em macrófagos e de efluxo de colesterol para aceitadores diferentes foitestado. Efluxo de colesterol e médio sem receptores (&quot;em branco&quot;) foi de 0,79% e este valor foi considerado como um efluxo não específico e foi subtraído de outros valores. Efluxo de colesterol para a saúde humana apoA-I (concentração final 30 ug / ml) foi de 4,75%. Uma amostra de plasma de referência foram incluídos nesta experiência para controlar inter-experimentais variabilidade. Uma amostra de referência pode ser utilizado para a normalização de dados através de um grande número de experiências, mas que encontramos prudente repetir o ensaio se a variabilidade é alta. Um plasma do paciente (concentração final de 2%) foi testada antes e depois de o paciente foi tratado com a medicação. Concluiu-se que neste medicação do paciente teve um impacto negativo sobre a capacidade do plasma para suportar o efluxo de colesterol. Outro exemplo de um resultado da experiência de efluxo é mostrado na fig. 2. Neste experimento RAW 264.7 de macrófagos foram ativados ou não ativados por incubação durante a noite com LXR agonista TO-901317 (concentração final1 mmol / L) e de efluxo de colesterol para a mesma amostra de plasma humano (2%) foi testado. Concluiu-se que a activação da expressão celular de transportadores ABC com agonista LXR aumenta a capacidade das células para libertar o colesterol para o aceitador extracelular. <img alt="A Figura 1" src="/files/ftp_upload/3810/3810fig1.jpg" /> Figura 1. Efluxo de colesterol a partir de células THP-1 a receptores de vários. Percentagem de efluxo de colesterol (isto é, a proporção de colesterol marcado movido a partir de células para o aceitador especificado) é mostrada após subtracção dos valores em branco. Média ± DP de determinações quadruplicado, * p &lt;0,05. <img alt="A Figura 2" src="/files/ftp_upload/3810/3810fig2.jpg" /> Figura 2. Efluxo de colesterol a partir de 264,7 Percentagem activado ou não activado com LXR agonista ao plasma humano. RAW de efluxo de colesterol (isto é, a proporção de colesterol marcado movido a partir de células àaceitador especificado) é mostrada após subtracção dos valores em branco. Média ± DP de determinações quadruplicado, * p &lt;0,001.

<ol><li>Tabas, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholesterol+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Cholesterol in health and disease.</a> J. Clin. Invest. 110, 583-590 (2002).</li>
<li>Brown, M. S., Goldstein, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cholesterol+feedback%3A+from+Schoenheimer%27s+bottle+to+Scap%27s+MELADL%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Cholesterol feedback: from Schoenheimer's bottle to Scap's MELADL.</a> J. Lipid Res. 50, 15-27 (2009).</li>
<li>Tabas, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Consequences+of+cellular+cholesterol+accumulation%3A+basic+concepts+and+physiological+implications%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Consequences of cellular cholesterol accumulation: basic concepts and physiological implications.</a> J. Clin. Invest. 110, 905-911 (2002).</li>
<li>Murphy, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Density+Lipoprotein+Reduces+the+Human+Monocyte+Inflammatory+Response%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler.+Thromb.+Vasc.+Biol%22%5BJournal%5D)">High-Density Lipoprotein Reduces the Human Monocyte Inflammatory Response.</a> Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 28, 2071-2077 (2008).</li>
<li>Mujawar, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Immunodeficiency+Virus+Impairs+Reverse+Cholesterol+Transport+from+Macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biology%22%5BJournal%5D)">Human Immunodeficiency Virus Impairs Reverse Cholesterol Transport from Macrophages.</a> PLoS Biology. 4, 365-36 (2006).</li>
<li>Patel, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstituted+High-Density+Lipoprotein+Increases+Plasma+High-Density+Lipoprotein+Anti-Inflammatory+Properties+and+Cholesterol+Efflux+Capacity+in+Patients+With+Type+2+Diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Coll.+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Reconstituted High-Density Lipoprotein Increases Plasma High-Density Lipoprotein Anti-Inflammatory Properties and Cholesterol Efflux Capacity in Patients With Type 2 Diabetes.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 53, 962-971 (2009).</li>
<li>Shaw, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Infusion+of+reconstituted+high-density+lipoprotein+leads+to+acute+changes+in+human+atherosclerotic+plaque%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Infusion of reconstituted high-density lipoprotein leads to acute changes in human atherosclerotic plaque.</a> Circ. Res. 103, 1084-1091 (2008).</li>
<li>Kekulawala, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+freezing+on+high-density+lipoprotein+functionality%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Impact of freezing on high-density lipoprotein functionality.</a> Anal. Biochem. 379, 75-77 (2008).</li>
<li>D'Souza, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure%2FFunction+Relationships+of+Apolipoprotein+A-I+Mimetic+Peptides%3A+Implications+for+Antiatherogenic+Activities+of+High-Density+Lipoprotein%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Structure/Function Relationships of Apolipoprotein A-I Mimetic Peptides: Implications for Antiatherogenic Activities of High-Density Lipoprotein.</a> Circ. Res. 107, 217-227 (2010).</li>
<li>Tchoua, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+cholesteryl+ester+transfer+protein+overexpression+and+inhibition+on+reverse+cholesterol+transport%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovasc+Res%22%5BJournal%5D)">The effect of cholesteryl ester transfer protein overexpression and inhibition on reverse cholesterol transport.</a> Cardiovasc Res. 77, 732-739 (2008).</li>
<li>Mukhamedova, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancing+apolipoprotein+A-I-dependent+cholesterol+efflux+elevates+cholesterol+export+from+macrophages+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Lipid+Res%22%5BJournal%5D)">Enhancing apolipoprotein A-I-dependent cholesterol efflux elevates cholesterol export from macrophages in vivo.</a> J. Lipid Res. 49, 2312-2322 (2008).</li>
<li>Mukhamedova, N., Fu, Y., Bukrinsky, M., Remaley, A. T., Sviridov, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Role+of+Different+Regions+of+ATP-Binding+Cassette+Transporter+A1+in+Cholesterol+Efflux%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">The Role of Different Regions of ATP-Binding Cassette Transporter A1 in Cholesterol Efflux.</a> Biochemistry. 46, 9388-9398 (2007).</li>
<li>Sviridov, D., Fidge, N., Beaumier-Gallon, G., Fielding, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Apolipoprotein+A-I+stimulates+the+transport+of+intracellular+cholesterol+to+cell-surface+cholesterol-rich+domains+%28caveolae%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem.+J%22%5BJournal%5D)">Apolipoprotein A-I stimulates the transport of intracellular cholesterol to cell-surface cholesterol-rich domains (caveolae.</a> Biochem. J. 358, 79-86 (2001).</li>
<li>Smyth, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+harlequin+ichthyosis+delineates+a+key+role+for+abca12+in+lipid+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">A mouse model of harlequin ichthyosis delineates a key role for abca12 in lipid homeostasis.</a> PLoS Genet. 4, e1000192-e1000192 (2008).</li>
<li>Fu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+Caveolin-1+Enhances+Cholesterol+Efflux+in+Hepatic+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">Expression of Caveolin-1 Enhances Cholesterol Efflux in Hepatic Cells.</a> J. Biol. Chem. 279, 14140-14146 (2004).</li>
<li>Calkin, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstituted+High-Density+Lipoprotein+Attenuates+Platelet+Function+in+Individuals+With+Type+2+Diabetes+Mellitus+by+Promoting+Cholesterol+Efflux%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Reconstituted High-Density Lipoprotein Attenuates Platelet Function in Individuals With Type 2 Diabetes Mellitus by Promoting Cholesterol Efflux.</a> Circulation. 120, 2095-2104 (2009).</li>
</ol>

Os autores declaram sem conflitos de interesses relacionados a este estudo.

O método descrito para medir o efluxo de colesterol é concebido para medir o movimento do colesterol a partir de células de um aceitador de colesterol extracelular. Há várias considerações críticas na compreensão desta metodologia. Rotulagem e de equilíbrio Na metodologia descrita colesterol marcado é adicionado ao soro contendo soro. Embora nunca investigada em detalhe, presume-se que o colesterol é incorporado nas lipoproteínas do soro e são absorvidas pelas célul...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagentes \ Células </td><td> HeLa </td><td> THP-1 </td><td> RAW </td><td> HUVEC </td><td> BHK-21 </td><td> HFF </td></tr><tr><td> De mídia completo </td><td colspan="3"> RPMI - FCS 10% - 1% de L-glutamina - Strep Pen 0,2% </td><td> M199 - FCS 5% - 1% de L-glutamina - Strep Pen 1% - HEPES 2% (1M) - 7% suplemento de crescimento de células endoteliais (ECGS) </td><td colspan="2"> DMEM - FCS 10% - 1% de L-glutamina - Strep Pen 0,2% </td></tr><tr><td> Séricos Mídia Livre </td><td colspan="3"> RPMI - 1% de L-glutamina - Strep Pen 0,2% </td><td> M199 - 1% de L-glutamina - Strep Pen 1% - HEPES 2% (1M) - Célula endotelial crescer 7%º suplemento (ECGS) </td><td colspan="2"> DMEM - 1% de L-glutamina - Strep Pen 0,2% </td></tr><tr><td> Método passagem </td><td> 1 x Tripsina </td><td> Suspensão </td><td> Raspar </td><td colspan="3"> 1 x Tripsina </td></tr><tr><td> Relação de passagem </td><td> 3:10 </td><td> 01:03 </td><td></td><td> 1:20 </td><td> 01:03 </td><td> 01:03 </td></tr><tr><td> Ativação de células (opcional) </td><td></td><td colspan="5"> TO-901.317 - LXR-agonista - Conc final. 4 mm </td></tr><tr><td> Outros reagentes </td><td></td><td> forbol 12-miristato 13-acetato (PMA) - Diferenciação celular - Conc final. 0.1μg/ml </td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

ensaio de efluxo do colesterol

Cholesterol Efflux Assay

Teor de colesterol de células deve ser mantida dentro dos limites muito apertados, muito ou pouco colesterol em alguns resultados de células em ruptura das membranas celulares, a apoptose e necrose 1. As células podem colesterol fonte da síntese intracelular e de lipoproteínas plasmáticas, ambas as fontes são suficientes para satisfazer plenamente as necessidades de células para o colesterol. Os processos de síntese de colesterol e absorção são fortemente regulados e deficiências de colesterol são 2 raro. Excesso de colesterol é de 3 problema mais comum. Com a excepção dos hepatócitos e para algumas células grau adrenocorticais, as células são incapazes de degradar o colesterol. As células têm duas opções para reduzir seu teor de colesterol: para converter colesterol em ésteres de colesterol, uma opção com capacidade limitada como sobrecarga células com ésteres de colesterol também é tóxico, e efluxo do colesterol, uma opção com capacidade potencialmente ilimitado. Efluxo do colesterol é uma especificaçãoprocesso ific que é regulada por uma série de transportadores intracelulares, tais como ligação de ATP cassete transportador proteínas A1 (ABCA1) e G1 (ABCG1) e B1 eliminador de tipo de receptor. O aceitador de natural de colesterol no plasma é de lipoproteína de alta densidade (HDL) e da apolipoproteína AI. O ensaio de efluxo de colesterol é concebido para quantificar a taxa de efluxo de colesterol a partir de células cultivadas. Mede a capacidade das células para manter o efluxo de colesterol e / ou a capacidade de plasma aceitadores para aceitar o colesterol libertado a partir de células. O ensaio consiste nos passos seguintes. Passo 1: etiquetagem colesterol celular por adição de colesterol rotulados para meio contendo soro e incubando com células de 24-48 h. Este passo pode ser combinado com o carregamento de células com colesterol. Passo 2: a incubação das células em meio isento de soro para equilibrar o colesterol marcado entre todos os pools de colesterol intracelular. Esta fase pode ser combinado com a activação do celular CHtransportadores olesterol. Passo 3: a incubação de células com aceitador extracelular e quantificação de movimento do colesterol a partir de células marcadas para o aceitador. Se precursores de colesterol foram utilizados para etiquetar o colesterol recém-sintetizado, um quarto passo, a purificação do colesterol, pode ser necessária. O ensaio proporciona a seguinte informação: (i) como um tratamento particular (uma mutação, um knock-baixo, a superexpressão um ou um tratamento) afecta a capacidade da célula para o colesterol de efluxo e (ii) como a capacidade de aceitadores de plasma para aceitar o colesterol é afectada por uma doença ou um tratamento. Este método é geralmente usado no contexto de pesquisas cardiovasculares, doenças metabólicas e neurodegenerativas, infecciosas e doenças reprodutivas.

O ensaio de colesterol é concebido para quantificar a taxa de efluxo de colesterol a partir de células cultivadas e da capacidade de plasma aceitadores para aceitar o colesterol libertado a partir de células. O ensaio consiste de marcação das células com o equilíbrio do colesterol, de colesterol entre pools intracelulares e libertação de colesterol para um aceitador extracelular.

Ensaio de efluxo do colesterol

O conteúdo de colesterol das células deve ser mantido dentro de limites muito rigorosos; a presença de colesterol em excesso ou em quantidade insuficiente em uma célula resulta na interrupção de...

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Os proteolipossomas são usados para estudar canais purificados e transportadores reconstituídos em um ambiente bioquímico bem definido. Um procedimento experimental para medir o efluxo mediado por essas proteínas é ilustrado. As etapas para preparar proteolipossomas, realizar os registros e analisar os dados para determinar quantitativamente as propriedades funcionais da proteína reconstituída são descritas.

A proteolipossoma-Based Efluxo Ensaio para determinar as propriedades de uma única molécula de Cl<sup&gt; -</sup&gt; Canais e Transportadores

Descrevemos aqui um ensaio livre celular bioquímico fluorométrica para determinação da peroxidação lipídica-HDL. Este ensaio rápido e reprodutível pode ser usado para determinar a função do HDL em estudos de grande escala e pode contribuir para nossa compreensão da função do HDL em doenças humanas.

Bioquímico celular-free fluorométrica ensaio enzimático para medição do elevado-throughput de peroxidação lipídica em lipoproteína de alta densidade

O objetivo deste estudo foi avaliar em vitro hipolipemiantes efeitos de drogas em modulando a morfologia das partículas de colesterol. Comparação de drogas hipolipemiantes revelou variações no seu efeito em modulando as características morfológicas das partículas de colesterol.

Efeitos diferenciais de drogas hipolipemiantes na modulação da morfologia das partículas de colesterol

Este protocolo fornece uma abordagem eficiente para medir a absorção de colesterol LDL com taxas de fluxo em tempo real usando uma célula viva, sistema em vários tipos de células de imagem. Esta técnica fornece uma plataforma para a atividade farmacológica de compostos afetando o influxo de LDL enquanto monitora para morfologia celular e citotoxicidade, portanto, potencial de tela.

Ensaio de absorção de LDL colesterol usando célula viva análise com célula de imagem monitoramento de integridade

Medição da capacidade de efluxo de colesterol in vitro de soro ou plasma em modelos de celular de macrófagos é uma ferramenta promissora como um biomarcador para a aterosclerose. No presente estudo, podemos otimizar e padronizar um método de efluxo de colesterol NBD fluorescente e desenvolver uma análise do elevado-throughput usando placas de 96 poços.

Ensaio de efluxo de colesterol Nitrobenzoxadiazole-etiquetadas do elevado-throughput

Dois métodos de enriquecimento do colesterol são apresentados: a aplicação de ciclodextrina saturada com colesterol para enriquecer tecidos e células de mamíferos, e o uso de dispersões à base de fosfolipídeos enriquecidos com colesterol (lipossos) para enriquecer os oócitos xenopus. Esses métodos são fundamentais para determinar o impacto de níveis elevados de colesterol na função molecular, celular e de órgãos.

Enriquecimento de Tecidos mamíferos e Oócitos xenopus com colesterol

Este artigo tem como objetivo apresentar um protocolo sobre como construir um microscópio de espectroscopia de correlação de fluorescência (svFCS) para medir a difusão molecular na membrana plasmática das células vivas.

Espectroscopia de correlação de fluorescência de variação spot para análise de difusão molecular na membrana plasmática de células vivas

Descrevemos um método para o uso de ciclodextrina para mediar a troca entre lipídios da membrana plasmática com lipídios exógenos. Essa técnica pode ser combinada com experimentos que estudam proteínas transmembranares, que se comportam de maneira diferente em ambientes semelhantes a jangadas lipídicas do que em ambientes não semelhantes a jangadas.

Ensaio de Troca Lipídica em Células Vivas

Aqui, descrevemos os protocolos para medir a quantidade de fosfolipídio fluorescente especificamente removido das partículas doadoras de lipídios pela lipoproteína de alta densidade (HDL) presente no plasma ou soro humano total. Mostramos que essa métrica de funcionalidade HDL prevê doenças cardiovasculares incidentes.

Ensaio de efluxo de fosfolipídios específico para lipoproteína de alta densidade

Este artigo descreve os procedimentos de um ensaio de metástase experimental que é usado para determinar o potencial metastático de linhagens de células humanas de câncer.

Ensaio Metástase Experimental

Aprenda a quantificar o efluxo de colesterol em células cultivadas usando ensaios bioquímicos. Este método avalia a capacidade de aceptores plasmáticos e fornece insights sobre homeostase lipídica celular.

Ensaio de efluxo do colesterol

Explorar mais vídeos