O álcool polivinílico implantação do modelo Esponja

O objetivo geral deste procedimento é utilizar uma esponja de álcool polivinílico para modelar a cicatrização de feridas em camundongos. Isso é realizado primeiramente hidratando e carregando a esponja para implante. Em seguida, a esponja é inserida em um bolsão entre o músculo abdominal e a pele do camundongo.

Após a implantação, cada esponja pode então ser injetada com um tratamento. O passo final é remover as esponjas do camundongo. Em última análise, podem ser realizados cortes, coloração e ensaios quantitativos para observar alterações e variações no processo de cicatrização da ferida.

Embora este método possa fornecer informações sobre a cicatrização de feridas, ele também pode ser aplicado a outras áreas de estudo, como a angiogênese tumoral, a entrega de fármacos e a sobrevivência de células implantadas. Para o enxerto, comece hidratando as esponjas com agitação noturna em uma solução aquosa de cloreto de sódio a 0,9%. Em seguida, autoclave 75 mililitros da suspensão de esponja hidratada por 25 minutos a 121 graus Celsius.

Para esterilizar as esponjas, coloque a solução para esponjas de autoclave em uma cabine de fluxo laminar estéril e, em seguida, use pinças estéreis para pegar uma esponja, comprima a esponja com as pinças e use uma ponteira de vácuo para remover o máximo possível da solução da esponja. Agora, coloque a esponja escorrida em uma placa de cultura de tecidos, tomando cuidado para deixar espaço entre as esponjas, e pipete a solução de tratamento diretamente no centro de uma esponja. Em seguida, pressione suavemente a esponja com a ponteira da pipeta para ajudar na absorção da solução pela esponja.

Após carregar todas as esponjas, armazene a placa em gelo até que as esponjas sejam implantadas no camundongo. Após confirmar a sedação com o teste do reflexo de pinçamento, posicione inicialmente o camundongo em cone nasal na posição supina. Em seguida, utilizando uma máquina de barbear elétrica, remova uma área de um por um polegada de pelos na região ventral inferior do camundongo, abaixo da caixa torácica.

Limpe a área removendo os cabelos cortados. Estérilize a área depilada com Betadine, seguido por álcool a 70%. Em seguida, mantenha a pele esticada.

Use o bisturi para fazer uma incisão vertical, uma vez e meia a duas vezes o diâmetro das esponjas a serem inseridas, tomando cuidado para não cortar através da cavidade corporal. Use a pinça para segurar a borda da pele.

Em seguida, use uma tesoura de Metzenbaum para separar lentamente a pele do músculo em ambos os lados da incisão. Estenda o bolsão por toda a largura do camundongo e desde a caixa torácica até as patas traseiras. Agora, use a pinça para pegar a primeira esponja a ser colocada no animal, segurando-a pelos lados.

Em seguida, transfira a esponja para um par de pinças retas de modo que ela seja segurada por cima e por baixo. Depois, segure e levante a borda da pele com outro par de pinças e insira lentamente a esponja, evitando tocar a pele ou o músculo subjacente. Após inserir todas as esponjas, use um par de pinças para manter ambos os lados da incisão juntos e, então, passe o fio cirúrgico através das duas camadas da pele.

Afirme o primeiro laçamento o suficiente para fechar as bordas da pele e finalize o nó quadrado com mais um laçamento na direção oposta. Desta vez, puxe o nó firmemente. Em seguida, dê mais dois nós quadrados para concluir a sutura.

Coloque suturas adicionais para fechar toda a incisão. Por fim, retire o animal do sistema de anestesia e monitore-o até que a consciência seja recuperada. O camundongo deve começar rapidamente a se locomover e retornar à mobilidade pré-operatória.

Inicie preenchendo uma seringa com a solução desejada e fixe uma agulha de calibre 28 à seringa. Em seguida, após confirmar a sedação por meio do aperto dos dedos dos pés, insira a agulha no animal em um ângulo de 45 graus através da pele no centro das esponjas para garantir que a agulha esteja dentro da esponja. Levante lentamente a agulha verticalmente.

Se a agulha estiver dentro da esponja, a esponja subirá junto com a agulha. Em seguida, injete lentamente a substância na esponja e retire a agulha. Após o sacrifício do animal, segure a pele com uma pinça e faça uma incisão próxima à esponja desejada.

Por fim, separe cuidadosamente as esponjas da cápsula circundante, evitando colher tecido adicional ao redor da esponja removida. As esponjas podem ser armazenadas sob diferentes condições, dependendo do tipo de análise que será realizada. Para seccionamento, as esponjas recuperadas podem ser embutidas em um meio de congelamento, como o composto de temperatura de corte ideal, ou colocadas em formalina a 10% para inclusão e seccionamento em blocos de parafina, como foi feito para essas esponjas coradas com h e e.

E nestas seções de esponjas triremes coradas, os melhores resultados no corte são obtidos quando a esponja é cortada ao meio ao longo do diâmetro, conforme mostrado aqui, e depois é embutida com a superfície cortada voltada para baixo. Como demonstrado aqui, as seções da esponja devem ser feitas de modo que toda a largura da esponja esteja presente nesta figura. A esponja à esquerda foi embutida ou seccionada incorretamente, como evidenciado pela borda do tecido interrompida ao longo do lado direito da seção, enquanto a esponja intacta à direita foi processada corretamente.

Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como preparar, implantar, injetar e remover esponjas de álcool polivinílico para estudar a cicatrização de feridas em camundongos.