Do-It-Yourself Dispositivo de Recuperação de amostras criopreservadas cair acidentalmente em Tanques de armazenamento criogênico

O objetivo deste procedimento é facilitar a recuperação de amostras em caixas criogênicas e frascos criogênicos de tanques duplos cheios de nitrogênio líquido usando um dispositivo fácil de construir. Isso é feito removendo primeiro um ou dois racks de freezer do executor para permitir espaço para manobra e inserindo o dispositivo verticalmente no executor. O segundo passo é raspar suavemente ao longo da parte inferior do fazedor com o dispositivo.

Em seguida, puxe o dispositivo na vertical ao longo das paredes do fazedor Para retirar a caixa do freezer do tanque, a etapa final é pegar a caixa recuperada da parte inferior do fazedor e recolocar os racks do freezer removidos. A principal vantagem desta técnica em relação aos métodos existentes, como a decantação, a barra cheia de nitrogênio líquido, é que ela fornece uma alternativa fácil, segura e rápida, que preserva a integridade da amostra e pode ser realizada por um único operador. Para iniciar a montagem do dispositivo tolerante a crio, use um alicate para endireitar um lado de uma amarração forte de três lados para fazer uma amarração forte LHA.

Como visto aqui, as dimensões do laço forte podem ser selecionadas dependendo do diâmetro do pescoço do fazedor. Dois laços tão fortes devem ser feitos para permitir que o dispositivo recupere caixas criogênicas de cinco polegadas e meia por cinco polegadas e meia. Prenda-os com uma cinta TST de amarração forte usando um parafuso de coroa, arruela de porca e parafuso para formar a base da concha criogênica.

O dispositivo agora deve aparecer como visto aqui. Agora, usando uma placa com fenda, alinhe as ranhuras na cinta em T de amarração forte com as ranhuras em uma extremidade da placa com fenda. Em seguida, prenda os dois juntos com porcas e parafusos Hillman.

Faça furos para fixação se a placa ranhurada e os laços fortes não tiverem furos pré-perfurados. Se desejado, uma alça pode ser formada dobrando a outra extremidade da placa com fenda e envolvendo com espuma. Para segurar melhor o dispositivo, certifique-se de remover a espuma antes da água cla.

O dispositivo de recuperação DIY tolerante a crio também pode ser adaptado para recuperação de frascos criogênicos. Isso envolve a substituição da base plana por um filtro de aço inoxidável alterado para retirar os frascos do líquido. Para iniciar a montagem, primeiro desaperte as porcas e parafusos da coroa, prendendo a cinta em T do pneu forte à placa com fenda.

Em seguida, antes de prender o filtro de aço inoxidável à placa com fenda, dobre suavemente o gargalo do filtro com a ajuda de um alicate para orientar a base em um ângulo que se assemelhe a uma concha. Se o filtro usado vier com um lábio, use um alicate para dobrar o lábio para baixo. Isso facilitará as manobras com o dispositivo.

Alinhe o orifício na alça do filtro junto com os orifícios na placa com fenda e prenda o filtro usando porcas e parafusos Hillman. Faça furos se o filtro não vier com furos pré-perfurados. Para começar a recuperar caixas criogênicas de um fazedor, certifique-se de primeiro colocar luvas criogênicas.

Em seguida, remova um ou dois racks de freezer do fazedor para permitir espaço para manobras com o dispositivo. Em seguida, use o dispositivo de recuperação DIY tolerante a crio vertical equipado com a base forte do ttra de amarração para raspar suavemente ao longo da parte inferior do fazedor e coletar a caixa, cair no fundo do tanque do fazedor. Em seguida, puxe o dispositivo para cima ao longo das paredes do fazedor para retirar a caixa do freezer do tanque.

Observe que o dispositivo deve ser segurado verticalmente e puxado para cima para evitar que a caixa escorregue de volta para o fazedor. Para recuperar frascos criogênicos, use a concha criogênica equipada com um filtro para raspar suavemente o fundo do fazedor semelhante à recuperação da caixa criogênica, puxe o dispositivo para cima e pegue os frascos coletados no filtro. Um grande desafio nos estudos de expressão gênica é que a qualidade do RNA depende das condições de armazenamento tanto para amostras de tecido congeladas quanto para RNA extraído.

Esta figura mostra o efeito do manuseio da amostra na integridade do RNA total O RNA total da mesma fonte de tecido foi submetido a diferentes manuseamentos de amostras antes do experimento total intacto, a taxa de pré-preparação de RNA mostra 28 s e 18 s ribossômico, bandas de RNA claras com a banda de RNA ribossômico de 28 s, aproximadamente duas vezes mais intensa que a banda de RNA ribossômico de 18 s. Esta é uma indicação de que o RNA está intacto. As pistas três e quatro retratam amostras com degradação significativa devido ao descongelamento parcial repetido por recuperações de curto prazo do executor, modelando assim o armazenamento de longo prazo com decantação periódica devido à necessidade de recuperação dos frascos caídos nas caixas.

No entanto, as amostras armazenadas no serviço de fazedor usando o dispositivo DIY e, portanto, nenhum descongelamento parcial contêm RNA intacto na pista dois. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como recuperar amostras do dvar cheio de nitrogênio líquido sem a necessidade de decantá-lo.