Desenvolvimento de bronquiolite obliterante em um modelo murino de transplante de pulmão ortotópico

O objetivo geral deste procedimento é estabelecer um modelo de bronquiolite literativa no espelhamento do transplante pulmonar ortotópico. Isso é feito primeiro colhendo o pulmão do doador de um camundongo C 57 BL 10. O segundo passo é preparar o manguito para a artéria brônquica pulmonar e a veia para anastomose.

Em seguida, o pulmão do doador preparado é transplantado para o receptor C cinco sete BL seis camundongos. A etapa final é observar o camundongo transplantado por 21 ou 28 dias após o transplante. Em última análise, a análise histológica é usada para mostrar lesões de bronquiolite literativa no pulmão transplantado.

A principal vantagem deste modelo em comparação com o modelo de transplante heterotópico de vias aéreas espelhado é que o modelo atual imita a condição humana. Geralmente, os indivíduos novos neste método terão dificuldades porque as estruturas superiores em camundongos são muito delicadas e mais suscetíveis a lesões, porque as massas são apenas um décimo da massa do rato Coloque o camundongo doador em uma câmara de retenção selada e induza a anestesia com 5% de flúor. Em seguida, use o cateter intravenoso de calibre 20 para intubar o camundongo ou Trae e, em seguida, coloque-o em um ventilador de roedores.

Mantenha a anestesia com um a 2% de flúor. Depois de se certificar de que o mouse está totalmente anestesiado pela falta de resposta ao movimento da cauda e ao beliscão do dedo do pé, coloque-o em decúbito dorsal e prepare o abdômen com álcool a 70%. Agora, corte a pele que cobre o abdômen com uma tesoura e exponha a musculatura abdominal.

Em seguida, faça uma esternotomia do lapo fazendo primeiro uma incisão na linha média através da parede abdominal e, em seguida, cortando transversalmente o esterno, afaste os intestinos e localize a veia cava inferior, que fica logo abaixo do fígado. Injete heparina a 100 microlitros por quilograma na VCI. Em seguida, puxe para baixo o ligamento falciforme do fígado e corte o diafragma ao longo da fixação causal ventral em direção à coluna.

Corte os dois lados da parede torácica até o pescoço para expor a cavidade torácica. Corte a caixa torácica bilateralmente enquanto protege o pulmão e remova o timo. Em seguida, corte a VCI intratorácica ao nível do diafragma.

Agora localize o coração e excise o apêndice atrial direito. Em seguida, faça uma incisão transversal na raiz do tronco da artéria pulmonar e use a incisão para lavar os pulmões com dois mililitros de ringer lactato resfriado e 0,1 mililitros de heparina. Exponha a traqueia e corte-a junto com o esôfago.

Agora pare a ventilação em dois terços da inflação corrente final. Extirpe o bloco longo do coração e guarde-o no gelo. Coloque gaze no pulmão excisado para protegê-lo da luz.

Incisar o ligamento pulmonar até a veia pulmonar ou pv. Remova o esôfago e a aorta para localizar o hilo. Encontre a artéria pulmonar ou pa, que está localizada na face mais cranial do hilo e no brônquio principal anexado.

Disseque cuidadosamente a artéria pulmonar longe do brônquio. Agora, faça um manguito PA a partir de um cateter IV de calibre 24, cortando-o em 0,5 milímetros de comprimento com uma extensão de 0,7 milímetros. A superfície do manguito é trançada AB.

Para fornecer uma superfície para a anastomose, faça um manguito para o brônquio usando material semelhante ao manguito PA usando apenas um cateter de calibre 20 cortado em um comprimento de um milímetro com uma extensão de 0,7 milímetros. O tamanho do manguito PV varia com o peso do camundongo doador. Para camundongos com peso de 24 a 27 gramas.

O tamanho do manguito é calibre 22 com comprimento de 0,7 milímetro e extensão de 0,7 milímetro para camundongos pesando de 27 a 32 gramas. Os comprimentos são os mesmos, mas um cateter de calibre 20 é usado. Agora, insira os manguitos na lente distal da artéria pulmonar, veia pulmonar e brônquio, prendendo cada um com sutura de seda de nove oh.

Depois que as algemas estiverem devidamente presas. Envolva o pulmão do doador preparado em gaze embebida em ringer lactato e coloque-o no gelo até o transplante. Para preparar o camundongo receptor, induzir a anestesia e colocá-lo em ventilação mecânica da mesma maneira que foi usada para o doador.

Raspe a parede torácica esquerda e prepare-se com álcool 70%. Comece fazendo uma incisão de toracotomia no terceiro espaço intercostal esquerdo. Estenda a incisão dorsalmente perto da coluna.

Certifique-se de que o campo cirúrgico esteja coberto de maneira estéril e coloque uma pinça de microvasos nos vasos pulmonares esquerdos e brônquios adjacentes ao coração. A artéria pulmonar pode ser visualizada no aspecto cranial, a veia pulmonar na extremidade do hilo e o brônquio entre eles. Em seguida, use tração suave em um hemostático para causar tensão leve no pa, PV e brônquio.

Deixe as estruturas hilares presas e ressece cuidadosamente o pulmão esquerdo. Isole a artéria pulmonar, a veia pulmonar e o brônquio e, em seguida, coloque uma sutura de oh frouxamente ao redor de cada estrutura. Disseque o AP completamente de sua bainha adventícia e, em seguida, faça uma pequena incisão transversal de aproximadamente um quarto da circunferência do vaso na parede anterior.

Deixando intacta a continuação da parte dorsal da artéria, obtenha o pulmão doador, que é envolto em gaze de algodão embebida em ringer com lactato frio, e posicione-o na cavidade torácica. Em seguida, insira os manguitos no receptor pa, PV e brônquio para criar anastomose e ligá-los com nano sutura. Em seguida, remova o pulmão receptor.

Em seguida, remova o grampo cruzado hilar, que permite a reperfusão e ventilação. Posicione o pulmão transplantado de volta no tórax receptor e feche a incisão da toracotomia Usando a sutura de cinco oh, o camundongo deve agora se recuperar da anestesia. A buprenorfina pode ser administrada para alívio da dor depois que o camundongo recuperou a consciência.

Esta tabela mostra os escores histológicos de rejeição aguda e prevalência de bronquiolite alfabetizante ou BO. A pontuação pós-transplante de rejeição aguda é chamada de pontuação A. As combinações de aloenxertos mostram uma patologia de rejeição consideravelmente mais aguda ou crônica quando comparadas ao enxerto ISO. Além disso, a prevalência de bronquiolite alfabetizante foi significativamente maior nas combinações de aloenxerto do que no enxerto ISO no dia 21 e 28 pós-transplante.

Os achados macro e histopatológicos 28 dias após o transplante pulmonar são mostrados aqui. Essas imagens representam achados macro e pulmão de enxerto ISO corado com H e E e pulmão virgens direito. Essas imagens representam aloenxerto pulmonar BL 10 corado com h e e trirreme masen transplantado para receptor de camundongo BL seis, que desenvolveu OB e não OB, respectivamente.

A seta branca em um B identifica as lesões OB. Este painel mostra o aloenxerto de pulmão BL seis transplantado para o receptor de camundongo BL 10 Uma vez dominado. Esta técnica pode ser feita em quase meia hora se for realizada corretamente.

A utilidade dessa técnica é que ela pode ser utilizada para responder a perguntas mecanicistas sobre disfunção primária do enxerto, rejeição aguda e bronquiolite ablativa pós-transplante pulmonar.