Ovariectomia e 17β-estradiol substituição em ratos e camundongos: uma demonstração visual

O objetivo geral deste procedimento é obter controle rigoroso sobre as concentrações séricas de estrogênio, que de outra forma flutuariam em ratas e camundongos fêmeas. Isso é realizado primeiramente removendo os ovários pela raiz dorsal. Em seguida, são preparadas cápsulas de cel elástica e uma mistura de Nutella.

Por fim, uma cápsula é inserida por via subcutânea, ou a mistura de Nutella é administrada por via oral. Em última análise, os resultados podem ser obtidos por radioimunoensaio, que mostra concentrações séricas estáveis ou flutuantes de 17 beta-estradiol para os métodos da cápsula e da Nutella, respectivamente. A principal vantagem dessas técnicas em relação aos métodos existentes, como pellets de liberação lenta, é que elas demonstraram produzir concentrações fisiológicas de estradiol por períodos prolongados de tempo.

Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área do estrogênio, como as diferenças nos efeitos entre administração, raízes e doses. Após anestesiar o animal, posicione-o em decúbito ventral sobre uma placa aquecida conectada a um termômetro retal. Aplique IGEL e para alívio pós-operatório na face lateral do pescoço do animal por via subcutânea.

Administre cinco miligramas por quilograma de IL em solução salina anteriormente a partir da crista ilíaca em uma área de quatro por quatro centímetros. Em seguida, desinfete a área com um antisséptico antes de cobrir o animal com um campo cirúrgico de quatro por quatro centímetros com abertura. Faça uma incisão mediana de dois a três centímetros e dissecção romba da pele da fáscia subjacente, um centímetro lateral à linha mediana.

Realize outra incisão através da fáscia. Em seguida, tão superficialmente quanto possível, dissecar rombamente lateralmente sob esta fáscia até alcançar a cavidade abdominal. Usando pinças, segure o tecido adiposo que envolve o ovário na cavidade abdominal e puxe-o suavemente para fora.

Identifique o ovário e ligue os cornos uterinos e os vasos a 0,5 a um centímetro proximalmente a esta estrutura. Retire o ovário e o tecido adiposo ligado e devolva o tecido remanescente à cavidade abdominal.

Realize outra incisão na fáscia contralateral e remova o outro ovário. Feche as feridas e, se não for administrar imediatamente o 17 beta-estradiol, deixe o animal despertar da anestesia.

Coloque o animal em uma gaiola aquecida por pelo menos duas horas após a cirurgia. Mantenha o rato separado nos primeiros dias após a operação. 24 horas após a cirurgia, por via subcutânea.

Injete os animais com mais cinco miligramas por quilograma de IL para administrar 17 beta-estradiol por meio de cápsulas silastic. Misture completamente a quantidade desejada em óleo de gergelim. Corte comprimentos de três centímetros de tubo silastic e comprimentos de cinco milímetros de palitos aplicadores de madeira para tampar usando pinça.

Insira um êmbolo de madeira na cápsula escolar antes de injetar a solução de 17 beta-estradiol em óleo de gergelim. Para preencher todo o comprimento, tampe suavemente a extremidade aberta da cápsula escolar com outro êmbolo de madeira. Incube as cápsulas na solução restante de 17 beta-estradiol durante a noite antes da implantação.

Após fechar as incisões da ectomia, depile e desinfete uma área quadrada de dois por dois centímetros na face dorsal do pescoço do rato. Faça uma incisão de um centímetro e disseque o cordão lateralmente de forma romba. Disseque um bolsão subcutâneo, criando espaço suficiente para a cápsula.

Limpe a cápsula escolar e insira-a suavemente através da incisão. Em seguida, feche a incisão com um ponto cirúrgico. Certifique-se de que a cápsula tracione a pele o mínimo possível, especialmente ao redor da ferida.

Para utilizar o creme de nozes Nutella como meio de administração de estrogênio, dissolva completamente o 17 beta-estradiol em óleo de gergelim e, em seguida, misture o óleo de gergelim com o creme de nozes. Prepare um creme de nozes placebo sem o 17 beta-estradiol cinco dias antes do experimento. Treine as ratas para consumir o creme de nozes livre de hormônios nos dias um a três.

Treine os animais em grupos nos quarto e quinto dias. Alimente-os com o creme de nozes em gaiolas separadas durante todo o experimento. Coloque os animais em gaiolas separadas quando forem alimentados com o soro fisiológico de creme de nozes.

As concentrações de estradiol 17 beta, que os métodos atuais visam reproduzir, são aproximadamente de cinco a 140 picogramas por mililitro para ratos e de cinco a 35 picogramas por mililitro para camundongos. Conforme mostrado aqui, quando administradas a ratas fêmeas de 300 gramas da linhagem Sprague Dawley.

As cápsulas elásticas subcutâneas produzem concentrações séricas decrescentes lentamente de 17 beta-estradiol, de cerca de 40 picogramas por mililitro no segundo dia até 10 picogramas por mililitro no dia 35. No entanto, imediatamente após a administração, pode-se esperar um pico de concentração sérica de aproximadamente 1000 picogramas por mililitro, que cai para a faixa fisiológica dentro de oito horas quando as cápsulas são administradas a camundongos fêmeas C57 Black Six de 25 gramas.

A concentração sérica diminuiu lentamente de aproximadamente 90 picogramas por mililitro no segundo dia para 25 picogramas por mililitro no dia 35 quando administrada por meio do creme de nozes a 300 gramas. Spra de ratos. Os níveis fisiológicos de 17 beta-estradiol oscilaram diariamente entre 10 e 70 picogramas por mililitro em camundongos.

Os níveis de estradiol 17 beta oscilaram entre 20 e 120 picogramas por mililitro. Uma vez dominada, a técnica de ectomia e implante da cápsula pode ser realizada em 10 minutos, se executada corretamente. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de aderir rigorosamente às diretrizes de higiene.